افتح القائمة الرئيسية
استخلاص الرنا عبر استخلاص الطورين (en) وترسيب الإيثانول (en).

استخلاص الرنا (بالإنجليزية: RNA extraction) هو تنقية الرنا من العينات البيولوجية، هذا الإجراء معقد بسبب تواجد إنزيمات الريبونزكلياز الوفير في الخلايا والأنسجة، والتي بإمكانها تفكيك الرنا بسرعة.[1] تُستَخدم العديد من الطرق في علم الأحياء الجزيئي لعزل الرنا من العينات، وأشهر هذه الطرق هي استخلاص حمض ثيوسيانات الغوانيدنيوم-فينول-كلوروفورم (en).[2][3] تتميز طريقة ورقة الترشيح في التحليل والشطف بقدرة إنتاجية عالية.[4]

استخلاص الرنا في سائل الهيدروجين باستخدام هاون ومدقة (أو آلة فولاذية تعرف بساحقة النسيج) مفيد كذلك في منع نشاط الريبونوكليازات.

التلوث بالرنازعدل

استخلاص الرنا في تجارب علم الأحياء الخلوي يُعقده بشدة تواجد جزيئات الرناز الوافر والقوي والتي تقوم بتفكيك عينات الرنا. يمكن لبعض جزيئات الرناز أن تكون قوية للغاية وتثبيطها صعب مقارنة بتثبيط الدنازات. فضلا عن الرناز الخلوي المتحرر، توجد العديد من الرنازات في المحيط الجواري. تطورت الرنازات للقيام بالعديد من الوظائف الخلوية في مختلف الكائنات،[5][6][7] على سبيل المثال: يتم فرز الرناز 7 وهو عضو من العائلة الكبيرة رناز A بواسطة الجلد البشري ويعمل كعامل قوي مضاد للمرض.[8][9] بالنسبة لهذه الرنازات المفرَزَة، حتى النشاط الإنزيمي قد لا يكون ضروريا لعملها المتوقع فعل سبيل المثال تعمل الرنازات المناعية عبر إزالة استقرار الغشاء الخلوي للبكتيريا.[10][11]

لمواجهة هذا، يتم غسل المعدات التي تُستخدم لاستخلاص الرنا بعناية وتتُرك مفصولة عن باقي معدات المخبر، كما تعالج بختلف المواد الكيميائية القوية للقضاء على الرنازات. لسبب ما يحرص مؤدوا التجارب على عدم ترك جلدهم العاري يلمس المعدات.

مراجععدل

  1. ^ Peirson SN, Butler JN (2007). "RNA extraction from mammalian tissues". Methods Mol. Biol. Methods in Molecular Biology. 362: 315–27. ISBN 978-1-58829-417-3. PMID 17417019. doi:10.1007/978-1-59745-257-1_22. 
  2. ^ Chomczynski P, Sacchi N (2006). "The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on". Nat Protoc. 1 (2): 581–5. PMID 17406285. doi:10.1038/nprot.2006.83. 
  3. ^ Bird IM (2005). "Extraction of RNA from cells and tissue". Methods Mol. Med. 108: 139–48. PMID 16028681. 
  4. ^ FortiusBio High Throughput RNA Extraction Filter Paper Card نسخة محفوظة 6 مايو 2016 على موقع واي باك مشين.
  5. ^ Rossier، O.؛ Dao، J.؛ Cianciotto، N. P. (2009). "A type II secreted RNase of Legionella pneumophila facilitates optimal intracellular infection of Hartmannella vermiformis". Microbiology. 155 (3): 882–890. PMC 2662391 . PMID 19246759. doi:10.1099/mic.0.023218-0. 
  6. ^ Luhtala، N.؛ Parker، R. (2010). "T2 Family ribonucleases: Ancient enzymes with diverse roles". Trends in Biochemical Sciences. 35 (5): 253–259. PMC 2888479 . PMID 20189811. doi:10.1016/j.tibs.2010.02.002. 
  7. ^ Dyer، K. D.؛ Rosenberg، H. F. (2006). "The RNase a superfamily: Generation of diversity and innate host defense". Molecular Diversity. 10 (4): 585–597. doi:10.1007/s11030-006-9028-2. 
  8. ^ Harder، J. (2002). "RNase 7, a Novel Innate Immune Defense Antimicrobial Protein of Healthy Human Skin". Journal of Biological Chemistry. 277 (48): 46779–46784. PMID 12244054. doi:10.1074/jbc.M207587200. 
  9. ^ Köten، B.؛ Simanski، M.؛ Gläser، R.؛ Podschun، R.؛ Schröder، J. M.؛ Harder، J. R. (2009). "RNase 7 Contributes to the Cutaneous Defense against Enterococcus faecium". PLoS ONE. 4 (7): e6424. PMC 2712763 . PMID 19641608. doi:10.1371/journal.pone.0006424. 
  10. ^ Huang، Y. -C.؛ Lin، Y. -M.؛ Chang، T. -W.؛ Wu، S. -J.؛ Lee، Y. -S.؛ Chang، M. D. -T.؛ Chen، C.؛ Wu، S. -H.؛ Liao، Y. -D. (2006). "The Flexible and Clustered Lysine Residues of Human Ribonuclease 7 Are Critical for Membrane Permeability and Antimicrobial Activity". Journal of Biological Chemistry. 282 (7): 4626–4633. PMID 17150966. doi:10.1074/jbc.M607321200. 
  11. ^ Rosenberg، H. F. (2008). "RNase a ribonucleases and host defense: An evolving story". Journal of Leukocyte Biology. 83 (5): 1079–87. PMC 2692241 . PMID 18211964. doi:10.1189/jlb.1107725.