افحص التغييرات الفردية
تسمح لك هذه الصفحة بفحص المتغيرات التي تم إنشاؤها بواسطة عامل تصفية إساءة الاستخدام لإجراء تغيير فردي.
المتغيرات المولدة لهذا التغيير
| متغير | قيمة |
|---|---|
عدد التعديلات للمستخدم (user_editcount) | 60 |
اسم حساب المستخدم (user_name) | 'Zalbaraka' |
عمر حساب المستخدم (user_age) | 596205 |
المجموعات (متضمنة غير المباشرة) التي المستخدم فيها (user_groups) | [
0 => '*',
1 => 'user',
2 => 'autoconfirmed'
] |
المجموعات العالميَّة التي يمتلكها الحساب (global_user_groups) | [] |
ما إذا كان المستخدم يعدل من تطبيق المحمول (user_app) | false |
ما إذا كان المستخدم يعدل عبر واجهة المحمول (user_mobile) | false |
هوية الصفحة (page_id) | 616298 |
نطاق الصفحة (page_namespace) | 0 |
عنوان الصفحة (بدون نطاق) (page_title) | 'استشراب السائل رفيع الإنجاز' |
عنوان الصفحة الكامل (page_prefixedtitle) | 'استشراب السائل رفيع الإنجاز' |
آخر عشرة مساهمين في الصفحة (page_recent_contributors) | [
0 => 'Zalbaraka',
1 => 'JarBot',
2 => 'Mr.Ibrahembot',
3 => 'MenoBot',
4 => 'Emara',
5 => '149.255.231.53',
6 => 'وسام',
7 => 'Abdullah Ismaeel',
8 => 'ZkBot',
9 => 'عبد الله'
] |
عمر الصفحة (بالثواني) (page_age) | 362113557 |
فعل (action) | 'edit' |
ملخص التعديل/السبب (summary) | 'تحسين' |
نموذج المحتوى القديم (old_content_model) | 'wikitext' |
نموذج المحتوى الجديد (new_content_model) | 'wikitext' |
نص الويكي القديم للصفحة، قبل التعديل (old_wikitext) | '{{ترجمة|تاريخ=ديسمبر 2020}}
[[ملف:Hplc.JPG|تصغير|جهاز HPLC]]
[[ملف:Preparative HPLC.svg|تصغير|400px|جهاز (HPLC)تحضيري الكروموتغرافيا ذات الأداء العالي]]
'''الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء''' <ref>{{استشهاد ويب|مسار=https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/|عنوان=ترجمة و معنى high performance liquid chromatography بالعربي في قاموس المعاني. قاموس عربي انجليزي مصطلحات صفحة 1<!-- عنوان مولد بالبوت -->|تاريخ الوصول=2020-12-07| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20201207091340/https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/ | تاريخ أرشيف = 7 ديسمبر 2020 }}</ref> أو '''الاستشراب السائلي عالي الأداء'''<ref>{{استشهاد ويب|مسار=http://ldlp-dictionary.com/dictionaries/word/3317765/A%20New%20Illustrated%20Science%20Dictionary%20(En/Ar)/high-performance%20liquid%20chromatography|عنوان=القاموس العلمي المُصوّر الجديد|ناشر=|تاريخ الوصول=24 مارس 2017| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20171208004116/http://ldlp-dictionary.com/dictionaries/word/3317765/A%20New%20Illustrated%20Science%20Dictionary%20(En/Ar)/high-performance%20liquid%20chromatography | تاريخ أرشيف = 8 ديسمبر 2017 }}</ref> {{إنج|High performance liquid chromatography}}
الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء <ref>High-performance liquid chromatography (HPLC)[https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/],ترجمة و معنى high performance liquid chromatography في قاموس عربي انجليزي. {{Webarchive|url=https://web.archive.org/web/20201206114710/https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/ |date=6 ديسمبر 2020}}</ref>، التي كان يُشار إليها سابقًا بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الضغط high-pressure liquid chromatography، هي تقنية في [[الكيمياء التحليلية]] تُستخدم لفصل وتحديد وقياس كل مكون في خليط. يعتمد على المضخات لتمرير مذيب سائل مضغوط يحتوي على خليط العينة من خلال عمود مملوء بمادة ممتصة صلبة. يتفاعل كل مكون في العينة بشكل مختلف قليلاً مع المادة الممتزة، مما يتسبب في معدلات تدفق مختلفة للمكونات المختلفة ويؤدي إلى فصل المكونات أثناء تدفقها خارج العمود.
يجري استخدام تقنية HPLC في الصناعة (على سبيل المثال، أثناء عملية إنتاج المنتجات الصيدلانية والبيولوجية)، وفي مجال القانوني والرياضي والجنائي (على سبيل المثال، الكشف عن عقاقير تحسين الأداء في البول)، في مجال البحثي (على سبيل المثال، فصل مكونات عينة بيولوجية معقدة، أو مواد كيميائية اصطناعية مماثلة similar synthetic chemicals من بعضهما البعض) ، وفي المجال الطبي (على سبيل المثال، الكشف عن مستويات فيتامين د vitamin D في مصل الدم).<ref>{{استشهاد بدورية محكمة | الأخير1 = Gerber | الأول1 = F. | الأخير2 = Krummen | الأول2 = M. | الأخير3 = Potgeter | الأول3 = H. | الأخير4 = Roth | الأول4 = A. | الأخير5 = Siffrin | الأول5 = C. | last6 = Spoendlin | first6 = C. | doi = 10.1016/j.chroma.2004.02.056 | عنوان = Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice | صحيفة = Journal of Chromatography A | المجلد = 1036 | العدد = 2 | صفحات = 127–133 | سنة = 2004 | pmid = 15146913}}</ref>
يمكن وصف الكروماتوغرافيا بأنها عملية انتقال مادة mass transfer process تتضمن الامتزاز adsorption. تعتمد تقانة HPLC على المضخات لتمرير سائل مضغوط وخليط عينة عبر عمود مملوء بمادة ماصة adsorbent، مما يؤدي إلى فصل مكونات العينة. المكون النشط للعمود، الممتزات adsorbent، عادة ما يكون عبارة عن مادة حبيبية مصنوعة من جزيئات صلبة (مثل السيليكا والبوليمرات وما إلى ذلك)، بحجم 2-50 ميكرومتر. يتم فصل مكونات مزيج العينة عن بعضها بسبب اختلاف درجات تفاعلها مع جزيئات الامتصاص. السائل المضغوط عادة عبارة عن خليط من المذيبات (على سبيل المثال، ماء، أسيتونيتريل و/أو ميثانول) ويشار إليه باسم "الطور المتحرك" mobile phase. يلعب تكوينه ودرجة حرارته دورًا رئيسيًا في عملية الفصل من خلال التأثير على التفاعلات التي تحدث بين مكونات العينة والمواد الماصة. هذه التفاعلات فيزيائية بطبيعتها، مثل تأثيرات [[هيدروفوبية]] hydrophobic (تبعثري)(dispersive)، تأثيرات كهربائية [[ثنائي القطب]] dipole–dipole وأ[[يونية]] ionic، وغالبًا ما كون مزيجًا من تلك التأثيرات.
تتميز تقانة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) عن الكروماتوغرافيا السائلة التقليدية ("أو ذات الضغط المنخفض") traditional ("low pressure") liquid chromatography بأن ضغوط التشغيل للطور المتحرك عالية بكثير (50-350 بار)، بينما تعتمد كروماتوغرافيا السائل التقليدية (أو العادية) عادةً على قوة الجاذبية لتمرير الطور المتحرك عبر العمود. نظرًا لصغر كمية العينة المفصولة في تقانة HPLC التحليلية، فإن أبعاد العمود النموذجية تكون بحيث قيم نصف قطر العمود تقع ضمن المجال (2.1-4.6 ملم) وقيم طول العمود تنحصر ضمن المجال (30-250 ملم). كما أن أعمدة HPLC تملأ بحشوات من حبيبات أو دقائق ماصة صغيرة adsorbent particles (2-50 ميكرومتر في متوسط حجم الدقائق أو الحبيبات الدقيقة). هذه الأبعاد والخصائص الآنفة الذكر تعطي تقانة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) قدرة فصل resolving power فائقة (القدرة على التمييز بين مكونات المزيج المراد فصله) عند فصل الخلائط، مما يجعلها تقنية كروماتوغرافية شائعة الاستخدام وأكثر من باقي أنواع الكروماتوغرافيا السائلة الأخرى.
يشتمل المخطط التخطيطي لجهاز الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء HPLC بشكل نموذجي على مزيل الغازات degasser، وآخذ العينات (أو الحاقن) sampler، والمضخات pumps، والكاشف detector. يقوم جهاز حاقن العينات بإدخال خليط العينة إلى تيار الطور المتحرك الذي يحمله إلى العمود. وتقوم المضخات بتأمين التدفق المطلوب وتركيب الطور المتحرك عبر العمود من مزج مكونات الطور المتحرك (المحلّات). ويولد الكاشف إشارة تتناسب مع كمية كل مكون العينة الذي يخرج تباعاً من العمود، وبالتالي يسمح الكاشف ب[[التحليل الكمي]] quantitative analysis لمكونات العينة. يتحكم المعالج الميكرويّ الرقمي digital microprocessor وبرنامج المستخدم في جهاز HPLC ويوفّران تحليل البيانات.
يمكن لبعض نماذج [[المضخات]] الميكانيكية في جهاز HPLC أن تقوم بمزج عدة [[مذيبات]] (محلّات) معًا بنسب تتغير بمرور الوقت، مما يؤدي إلى توليد تدرج في تركيب في الطور المتحرك (وإلى تدرج في قطبية الطور المتحرك). هناك العديد من أجهزة الكشف شائعة الاستخدام، مثل كاشف الأشعة فوق البنفسجية/المرئية [[مطيافية الأشعة المرئية وفوق البنفسجية]]، أو كاشف مجموعة ثنائي الضوئي ([[ثنائي ضوئي]] (PDA أو كاشف يعتمد على قياس [[مطيافية الكتلة]] [[مطيافية الكتلة]]. تحتوي معظم أجهزة HPLC أيضًا على فرن العمود column oven يسمح بضبط درجة الحرارة التي يتم عندها إجراء الفصل والتحليل.
== شرح النظرية ==
يتم ادخال المادة المراد تحليلها في تيار الطور المتحرك. سرعة تحرك المادة المنحلة داخل العمود تتحدد بكم الروابط الفيزيائية أو الكيميائية بينها وبين الطور (الساكن أو الثابت). كمية المادة المنحلة المنحبسة تعتمد على تركيب المادة وتركيب الطور الثابت والطور الناقل أو المتحرك. الوقت الذي تستغرقه المادة المنحبسة داخل العمود لكي تصل للطرف الآخر للعمود وتظهر على الكاشف يسمي وقت الاحتباس أو الاحتفاظ.
إن أجهزة الـ HPLC متوفرة بسهولة لأنها تستخدم في مجالات متعددة منها مجال التقنية الحيوية والتقنية الطبية السريرية والتحاليل الصيدلانية. إضافة إلى استخدامها في الكيمياء ومستحضرات التجميل وفي في مجال الطاقة والبيئة والصناعات الغذائية. كما أن توافر أجهزة بأسعار مقبولة وذات كفاءة متطورة وموثوقة قد جعل أجهزة الـHPLC هي الطريقة المفضلة في التحاليل الصيدلانية وذلك بدءً من إنشاء تركيب الدواء أو فصل مكوناته أو ضبط جودته. لقد تطور استخدام الـHPLC بشكل كبير خلال العقود الماضية ففي الستينات تم وضع الأسس والمبادئ النظرية لهذه التقنية، وأدى التطور في مواد تعبئة عمود الاستشراب (أعمدة الكروماتوغرافيا) في السبعينات إلى تطور الاستشراب بالطور العكوس. وفي الثمانينات أدى التطور في الحواسيب والأتمتة والبرمجيات إلى سهولة استخدام الـ HPLC . وفي التسعينات طورت أعمدة الاستشراب الميكرونية (الصغيرة) وأعمدة الاستشراب المتخصصة لاستعمال محدد، والكواشف Detector المتنوعة، بالإضافة إمكانات الحصول على البيانات المتكاملة وتخزينها واسترجاعها، مما أدى إلى الزيادة الكبيرة في فعالية وسرعة أجهزة الـ HPLC.
== التطور التاريخي لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة HPLC ==
قبل أن يستخدم العلماء والخبراء في الكيمياء التحليلية تقنيات الكروماتوغرافية السائلة القياسية، كانت أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة غير فعالة إلى حد كبير بسبب معدل تدفق المذيبات التي تعتمد على الجاذبية. وكانت تستغرق عمليات الفصل الكروماتوغرافي ساعات عديدة، وأحيانًا أيامًا حتى تكتمل.<ref name=Karger>{{استشهاد بدورية محكمة|مؤلف=Karger, Barry L. |سنة=1997|عنوان=HPLC: Early and Recent Perspectives|صحيفة= Journal of Chemical Education |المجلد=74|العدد=1|صفحات=45|doi=10.1021/ed074p45|bibcode=1997JChEd..74...45K}}</ref> كانت كروماتوغرافيا الغازية (Gas chromatography (GC في ذلك الوقت أقوى من الكروماتوغرافيا السائلة (liquid chromatography (LC، ومع ذلك، كان يُعتقد أن فصل الطور الغازي وتحليل [[بوليمرات|البوليمرات الحيوية]] القطبية ذات الوزن الجزيئي العالي أمر مستحيل. كانت [[كروماتوغرافيا الغاز|كروماتوغرافيا الغازية]] GC غير فعالة بالنسبة للعديد من علماء الكيمياء الحيوية بسبب عدم الاستقرار الحراري للمواد المذابة المراد تحليلها.<ref name=Henry>Henry, Richard A. (1 February 2009) [http://www.chromatographyonline.com/early-days-hplc-dupont "The Early Days of HPLC at Dupont"]. Chromatography Online. Avanstar Communications Inc. {{Webarchive|url=https://web.archive.org/web/20200801185002/http://www.chromatographyonline.com/early-days-hplc-dupont |date=1 أغسطس 2020}}</ref> نتيجة لذلك، تم افتراض طرق بديلة والتي أدت مع الوقت إلى تطوير تقانة HPLC.
بعد العمل الأساسي الذي قام به Martin و Synge في عام 1941 ، تنبأ Cal Giddings و Josef Huber وآخرون في الستينيات من القرن التاسع العشر أنه يمكن تشغيل LC في وضع عالي الكفاءة عن طريق تقليل أقطار حبيبات التعبئة (الحشوة) إلى حد كبير أقل مما كان في حالة الكروماتوغرافيا السائلة LC النموذجية (وحالة الكروماتوغرافيا الغازية GC) التي تستخدم حبيبات بأقطار تصل لحوالي 150 ميكرومتر وأيضاً باستخدام ضغوط خارجية لزيادة سرعة الطور المتحرك.<ref name=Karger /> وخضعت هذه التنبؤات لتجارب ودراسات مكثفة لفترة امتدت من سنوات الستينيات إلى السبعينيات. وبدأت الأبحاث التطويرية المبكرة في تحسين حبيبات حشوة أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة LC، وكان اختراع حبيبات من نوع Zipax، وهو جسيم مسامي سطحيًا، واعدًا لتقنية HPLC.<ref>Iler, R.K. (1979) ''The Chemistry of Silica''. John Wiley & Sons. New York.</ref>
جلبت أعوام السبعينيات العديد من التطورات في [[الأجهزة]] و[[البرمجيات]] المتعلقة بتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي. بدأ الباحثون في استخدام المضخات والحاقن لعمل تصميم أولي لنظام تقانة HPLC.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|مؤلف1=Karger, B. L. |مؤلف2=Berry, L. V. |عنوان=Rapid liquid-chromatographic separation of steroids on columns heavily loaded with stationary phase |صحيفة=Clin. Chem. |المجلد=17 |العدد=8 |صفحات=757–64 |pmid=4254537|سنة=1971 }}</ref> كانت [[مضخة|مضخات تضخيم الغاز]] مثالية Gas amplifier pumps لأنها تعمل بضغط ثابت ولا تتطلب سدادات مانعة للتسرب leak-free seals أو صمامات فحص check valves لتدفق ثابت وكميات جيدة. <ref name=Henry/> تم وضع معالم الأجهزة في قسم البوليمرات الصناعية Dupont IPD (Industrial Polymers Division) مثل جهاز التدرج ذي الحجم المنخفض الذي يتم استخدامه بالإضافة إلى استبدال الحاقن الحاجز septum injector بصمام الحقن الحلقي loop injection valve.<ref name=Henry/>
بينما كانت التطورات مهمة على مستوى الأجهزة، فإن تاريخ تقانة HPLC يتعلق في المقام الأول بتاريخ وتطور تكنولوجيا الحبيبات أو الجسيمات [[particle technology]].<ref name=Henry/> بعد إدخال حبيبات ذات الطبقة المسامية porous layer particles، كان هناك اتجاه ثابت لتقليل حجم تلك الجسيمات لتحسين الكفاءة.<ref name=Henry/> ولكن مع تقليل حجم الجسيمات، نشأت مشاكل جديدة. نشأت المشاكل العملية من فرق الضغط المفرط اللازم لدفع السائل المتحرك عبر العمود وأيضاُ صعوبة تحضير حشوة منتظمة التراص والتعبئة من المواد الحبيبية الصغيرة للغاية.<ref>Giddings, J. Calvin (1965) ''Dynamics of Chromatography, Part I. Principles and Theory''. Marcel Dekker, Inc., New York. p. 281.</ref> في كل مرة يتم تقليل حجم الجسيمات بشكل كبير، يجب أن تحدث جولة أخرى من تطوير الأدوات والأجهزة للتعامل مع فرق الضغط الناشء بين طرفي العمود.<ref name=Henry/>
== مفاهيم وتعاريف أساسية، ونظرية الكروماتوغرافيا ==
'''الطور المتحرك (mobile phase):''' لفصل مكونات مزيج ما، ندخل السائل المراد فصل مكوناته في تدفق متتابع، وهذا ما يسمى بالطور المتحرك (mobile phase).
'''الطور الثابت أو الساكن (stationary phase)'''
وتترك الحلالة ( المادة المنحلة) لتعبر خلال طبقة عمود الاستشراب الحاوي على مواد ( جزيئات ) أقطارها صغيرة جداً مما يمنحها سطح تماس كبير، وهذا ما ندعوه بالطور الثابت stationary phase.
'''الماد المذابة أو الحلالة (الذوائب solutes)'''
وطالما تعبر جزيئات الحلالة عمود الاستشراب محمولة في الطور المتحرك فإنه يتم تأثر Interaction مستمر بين جزيئات الحلالة (أو الذوائب solutes) وبين الطور الثابت وكذلك أيضاً مع الطور المتحرك، وينتج عن هذا توازن ديناميكي dynamic equilibrium.
كما يؤدي اختلاف عمليات التوازن هذه إلى فصل مكونات هذا المزيج.
'''(الإمرار) المتماثل isocratic elution أو الشطف بالطور المتحرك ذي التركيب الثابت'''
وعندما تتم عملية فصل مواد المزيج مع المحافظة على التركيب الثابت لمكونات الطور المتحرك، فإننا ندعو هذه العملية بالشطف (الإمرار) المتماثل isocratic elution.
'''الشطف المتدرج gradient elution''' فهو التغير المستمر لتركيب الطور المتحرك كنسبة نوع أو أكثر من المذيبات في الطور المتحرك كتابع للزمن.
'''كاشف detector'''
عندما تخرج جزيئات الحلالة من مناطق الطور المتحرك فإنها تمر عبر كاشف detector أو سلسلة من الكواشف (المتحريات). وتستجيب إشارات الكاشف كدالة على تركيز الحليلة (المادة المذابة) في قطفات الطور المتحرك التي تخرج من العمود مع الزمن.
'''برامج تحليل بيانات data processors'''
ترسل هذه الإشارات إلى برامج تحليل بيانات data processors والذي يرسم الخطوط البيانية plot كدالة مع الزمن.
'''المخطط الاستشرابي chromatogram'''
ويدعى المخطط الذي يظهر هذه الإشارات بالمخطط الاستشرابي chromatogram، وتدعى مناطق المكونات لكل مركب بالقمم الاستشرابية chromatographic peaks . وتتميز هذه القمم بالمعايير (المتثابتات) parameters التالية : العرض، المساحة، ارتفاع القمة، ومدى التذييل tailing، وزمن العبور (الاحتفاظ) retention time. ويدعى الجهاز الذي يقوم بهذ العمل جهاز مخطط الاستشراب (مخطاط الاستشرابي) chromatograph.
'''المحقن injector'''
في الـ HPLC تدخل الجزيئات الذائبة ضمن سيل الطور المتحرك. ويمر هذا السيل عبر مدخل inlet وينبثق عبر مخرج outlet العمود.
'''المضخة عالية الضغط pump'''
وبما أن أبعاد الأجزاء صغيرة جداً (حوالي 10 ميكرون أو أقل) والعمود مملوء بشكل كامل فإنه لا بد من دفع حركة الطور المتحرك باستخدام مضخات عالية الضغط.
وإن الجزيئات الذائبة فقط هي التي تنتقل عبر الطور المتحرك. والجزيئات التي تتفاعل مع سطح العمود سيحدث لها عرقلة impeded بالخروج، والعصبة الناشئة عنها سيحدث لها لفظ متأخر عن لفظ العصبة التي تتثبت جزيئاتها بشكل أضعف. إن النزوح النسبي للذائبة يعتمد على خواصها الحركية والترموديناميكية.
وتختلف المضخات في سعة الضغط، ولكن يتم قياس أدائها على أساس قدرتها على إنتاج معدل تدفق حجمي ثابت وقابل للتكرار. قد يصل الضغط إلى 60 ميجا باسكال (6000 رطل/ بوصة 2)، أو حوالي 600 ضغط جوي. تم تحسين أنظمة HPLC الحديثة للعمل في ضغوط أعلى بكثير، وبالتالي فهي قادرة على استخدام أحجام جزيئات أصغر بكثير في الأعمدة (<2 ميكرومتر). يمكن أن تعمل أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء هذه أو UHPLCs بسرعة تصل إلى 120 ميجا باسكال (17405 رطل/بوصة 2) ، أو حوالي 1200 الغلاف الجوي المصطلح "UHPLCs" هو علامة تجارية لشركة Waters Corporation
=== الكواشف===
تنقسم أجهزة الكشف عن HPLC إلى فئتين رئيسيتين: عالمية أو انتقائية. تقيس أجهزة الكشف العالمية عادةً خاصية الكتلة (على سبيل المثال، معامل الانكسار) عن طريق قياس اختلاف الخاصية المادية بين الطور المتحرك والطور المتحرك باستخدام المذاب بينما تقيس الكاشفات الانتقائية خاصية المذاب (على سبيل المثال، امتصاص الأشعة فوق البنفسجية) عن طريق الاستجابة ببساطة إلى الخصائص الفيزيائية أو الكيميائية للمذاب. [18] يستخدم HPLC بشكل شائع كاشف امتصاص UV-Vis ، ومع ذلك، يمكن استخدام مجموعة واسعة من أجهزة الكشف عن اللوني. كاشف عالمي يكمل الكشف عن امتصاص الأشعة فوق البنفسجية المرئية هو كاشف الأيروسول المشحون (CAD). يشتمل نوع من الكاشفات المستخدمة بشكل شائع على كاشفات معامل الانكسار، والتي توفر قراءات عن طريق قياس التغيرات في معامل الانكسار للشاطف أثناء تحركه عبر خلية التدفق. في حالات معينة، من الممكن استخدام أجهزة كشف متعددة، على سبيل المثال LCMS يجمع عادةً بين UV-Vis مع مطياف الكتلة.
=== العوامل المؤثرة على كفاءة الفصل ===
إن مدى وكفاءة الفصل بين قمتي لفظ متقاربتين يعبَّر عنها ب'''عامل الاحتباس''' أو '''عامل السعة''' '''(retention (or capacity) factor (k’)''' ، و'''عامل الاصطفاء''' '''selectivity factor''' ، و '''عدد الطبقات النظرية N'''. إن عامل السعة هو قياس زمن التصاق جزيئات الذائبة بأجزاء العمود مقارنة مع زمن التصاقها بالطور المتحرك. لذلك كلما كبرت قيمة K’ كلما زاد التثبت على أجزاء العمود.<ref>{{استشهاد ويب| مسار = http://www.cem.msu.edu/~cem333/Week16.pdf| عنوان =| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20120617061134/http://www.cem.msu.edu/~cem333/Week16.pdf | تاريخ أرشيف = 17 يونيو 2012 }}</ref>
== أنواع الكروماتوغرافيا السائلة==
=== كروماتوغرافيا التقسيم Partition chromatography ===
[[File:HILIC Partition Method Graphic.png|thumb|300px|[[HILIC]] Partition Technique Useful Range]]
كانت كروماتوغرافيا التقسيم (التشارك أو التوزع) Partition chromatography أحد الأنواع الأولى للكروماتوغرافيا التي طورها الكيميائيون.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة| المجلد = 19| العدد = 5| صفحات = 506–512| الأخير = Ettre| الأول = C.| عنوان = Milestones in Chromatography: The Birth of Partition Chromatography| صحيفة = LCGC| تاريخ الوصول = 2016-02-26| تاريخ = 2001| مسار = http://images.alfresco.advanstar.com/alfresco_images/pharma/2014/08/22/1598ed6f-5bbe-400b-bc08-ff07d2c59826/article-2090.pdf| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20161006152921/http://images.alfresco.advanstar.com/alfresco_images/pharma/2014/08/22/1598ed6f-5bbe-400b-bc08-ff07d2c59826/article-2090.pdf | تاريخ أرشيف = 6 أكتوبر 2016 }}</ref> تم تطبيق مبدأ معامل التقسيم partition coefficient في [[استشراب ورقة|كروماتوغرافيا الورق]] و[[استشراب طبقة رقيقة|كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة]] والطور الغازي وتطبيقات فصل سائل ــ سائل. حصل Archer John Porter Martin و Richard Laurence Millington Synge على جائزة نوبل في الكيمياء لعام 1952 لتطويرهما لهذه التقنية، والتي كانت تستخدم لفصل الأحماض الأمينية.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة| المجلد = 35| العدد = 1–2| صفحات = 91–121| الأخير1 = Martin| الأول1 = A J P| الأخير2 = Synge| الأول2 = R L M| عنوان = Separation of the higher monoamino-acids by counter-current liquid-liquid extraction: the amino-acid composition of wool| صحيفة = Biochemical Journal| تاريخ = 1941| pmid = 16747393| doi=10.1042/bj0350091| pmc=1265473}}</ref> يستخدم كروماتوغرافيا التقسيم مذيبًا محتفظًا به، على السطح أو داخل حبيبات أو ألياف مصفوفة داعمة صلبة "خاملة" كما هو الحال مع كروماتوغرافيا الورق؛ أو يستفيد من بعض تأثيرات الكولومبية (الكهربائية الساكنة) و/ أو الهيدروجين مع الطور الثابت. تنقسم مكونات العينة بين الطور الثابت السائل والطور المتحرك eluent. تمامًا كما هو الحال في كروماتوغرافيا التفاعل المحبة للماء (HILIC ؛ تقنية فرعية داخل HPLC)، تفصل هذه الطريقة مكونات المزيج المراد تحليله بناءً على الاختلافات في قطبيتها. غالبًا ما يستخدم HILIC طورًا ثابتًا قطبيًا مرتبطًا وطورًا متحركًا مصنوعًا بشكل أساسي من الأسيتونيتريل مع الماء كمكون قوي. تم استخدام قسم HPLC تاريخيًا على دعامات السيليكا أو الألومينا غير المربوطة unbonded silica. يعمل كل منها بشكل فعال لفصل مكونات العينة المراد تحليلها عن طريق الاختلافات القطبية النسبية. تتميز الأطوار المرتبطة بـ HILIC بميزة فصل المواد المذابة الحمضية والقاعدية والمحايدة في مسار كروماتوغرافي واحد.<ref>{{استشهاد بكتاب|سنة=1987 |عنوان=High performance liquid chromatography |مسار=https://archive.org/details/highperformancel00lind |url-access=registration |ناشر=Wiley |مؤلف1=Lindsay, S. |مؤلف2=Kealey, D. |osti = 7013902}} from review {{استشهاد بدورية محكمة|صحيفة=J. Am. Chem. Soc. |المجلد=110 |العدد=11 |سنة=1988 |doi=10.1021/ac00162a003|عنوان=Theoretical and experimental foundation for surface-coverage programming in gas–solid chromatography with an adsorbable carrier gas|الأخير1=Hung|الأول1=L. B.|الأخير2=Parcher|الأول2=J. F.|الأخير3=Shores|الأول3=J. C.|الأخير4=Ward|الأول4=E. H.|صفحات=1090–1096}}</ref>
تنتشر المواد المنحلة القطبية polar analytes في طبقة مائية ثابتة مرتبطة بالطور القطبي الثابت، وبالتالي يتم الاحتفاظ بها. كلما زادت قوة التفاعلات بين المواد المنحلة القطبية والطور القطبي الثابت (بالنسبة إلى الطور المتحرك)، زاد وقت الشطف elution time. تعتمد قوة التأثير أو التفاعل على طبيعة جزء المجموعات الوظيفية من البنية الجزيئية للمواد المنحلة، مع مجموعات أكثر استقطابًا (على سبيل المثال، هيدروكسيل-) ومجموعات قادرة على الارتباط الهيدروجيني الذي يؤدي إلى مزيد من الاحتفاظ. يمكن أن تزيد التاثيرات الكولومبية (الكهروستاتيكية) أيضًا من الاحتفاظ. سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، بينما تميل إضافة المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى زيادة أوقات الاستبقاء.
===كروماتوغرافيا الطور العادي===
كان كروماتوغرافيا الطور الطبيعي أحد الأنواع الأولى من HPLC التي طورها الكيميائيون. تُعرف هذه الطريقة أيضًا باسم HPLC من النوع العادي (NP-HPLC) ، حيث تفصل هذه الطريقة المواد المنحلة المراد فصلها بناءً على تقاربها مع سطح قطبي ثابت مثل السيليكا، ومن ثم فهي تعتمد على قدرة التحليل على الانخراط في التأثيرات القطبية (مثل الترابط الهيدروجيني أو ثنائي القطب) مع السطح الماص. يستخدم NP-HPLC طورًا متحركًا غير قطبي وغير مائي (على سبيل المثال، الكلوروفورم)، ويعمل بشكل فعال لفصل المواد المنحلة القابلة للذوبان بسهولة في المذيبات غير القطبية. يرتبط التحليل بالطورالثابت القطبي ويتم الاحتفاظ بها. تزداد قوة الامتزاز مع زيادة قطبية المواد المنحلة. لا تعتمد قوة التأثير فقط على المجموعات الوظيفية الموجودة في بنية جزيء المواد المنحلة، بل تعتمد أيضًا على العوامل الاستراتجية. يسمح تأثير العائق الفراغي على قوة التأثير لهذه الطريقة بحل أيزومرات بنيوية (منفصلة).
سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، في حين تميل المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى إحداث شطف أبطأ (زيادة أوقات الاحتفاظ). تميل المذيبات القطبية للغاية مثل آثار الماء في الطور المتحرك إلى الامتصاص إلى السطح الصلب للطور الثابت مكونًا طبقة ثابتة (مائية) والتي تلعب دورًا نشطًا في الاحتفاظ. هذا السلوك غريب إلى حد ما بالنسبة لكروماتوغرافيا الطور الطبيعي لأنه محكوم بشكل حصري تقريبًا بآلية امتزاز (على سبيل المثال، تتفاعل المواد المنحلة مع سطح صلب بدلاً من الطبقة المذابة ليجند متصل بالسطح الماص؛ انظر أيضًا HPLC ذو المرحلة العكسية أدناه). لا يزال كروماتوغرافيا الامتزاز مستخدمة على نطاق واسع لفصل الأيزومرات الهيكلية في كل من تنسيقات كروماتوغرافيا العمود والطبقة الرقيقة على دعامات السيليكا أو الألومينا المنشط (المجفف).
فشلت أنواع الكروماتوغرافية التقسيمية و NP-HPLC في السبعينيات مع تطوير كروماتوغرافيا HPLC ذات الأطوار العكسية بسبب ضعف استنساخ نتائج أوقات الاحتفاظ بسبب وجود طبقة مذيبات عضوية مائية أو بروتونية على سطح السيليكا أو وسط كروماتوغراف الألومينا . تتغير هذه الطبقة مع أي تغييرات في تكوين الطور المتحرك (على سبيل المثال، مستوى الرطوبة) مما يتسبب في أوقات استبقاء الانجراف.
في الآونة الأخيرة، أصبح الفصل الكروماتوغرافي شائعًا مرة أخرى مع تطور مراحل الارتباط الهيليك "Hilic" التي تُظهر تحسين استنساخ نتائج، ونتيجة لفهم أفضل لنطاق فائدة هذه التقنية.
===كروماتوغرافيا الإزاحة===
المبدأ الأساسي لكروماتوغرافيا الإزاحة displacement chromatography هو: إن الجزيء ذو الألفة العالية لركازة الكروماتوغرافيا (المزيح displacer) سوف يتنافس بفعالية على مواقع الربط، وبالتالي يزيح جميع الجزيئات ذات الألفة الأقل.<ref>[http://www.sacheminc.com/industries/biotechnology/teaching-tools.html Displacement Chromatography]. Sacheminc.com. Retrieved 2011-06-07. {{webarchive |url=https://web.archive.org/web/20080915113736/http://www.sacheminc.com/industries/biotechnology/teaching-tools.html |date=September 15, 2008 }}</ref> هناك اختلافات واضحة بين كروماتوغرافيا الإزاحة وكروماتوغرافيا الشطف elution chromatography. في وضع كروماتوغرافيا الشطف، تظهر المواد عادةً من عمود في قمم غاوسية ضيقة Gaussian peaks. مطلوب فصل واسع للقمم، مفضل عن خط الأساس baseline، من أجل تحقيق أقصى تنقية. تعتمد السرعة التي ينتقل بها أي مكون من خليط إلى أسفل العمود في وضع كروماتوغرافيا الشطف على العديد من العوامل. ولكن لكي تنتقل مادتان بسرعات مختلفة، وبالتالي يتم حلهما، يجب أن تكون هناك اختلافات جوهرية في بعض التفاعلات بين الجزيئات الحيوية وركازة الكروماتوغرافيا. يتم ضبط متحولات التشغيل لتعظيم تأثير هذا الاختلاف. في كثير من الحالات، لا يمكن تحقيق الفصل الأساسي للقمم إلا من خلال شطف التدرج وتحميل العمود المنخفض. وبالتالي، هناك عيبان في كروماتوغرافيا وضع الشطف، خاصة في المقياس التحضيري، وهما التعقيد التشغيلي، بسبب ضخ المذيبات المتدرج، والإنتاجية المنخفضة، بسبب التحميل المنخفض للعمود. يتميز كروماتوغرافيا الإزاحة بمزايا تفوق كروماتوغرافيا الشطف حيث يتم حل المكونات في مناطق متتالية من المواد النقية بدلاً من "القمم". نظرًا لأن العملية تستفيد من عدم خطية متساوي الحرارة، يمكن فصل تغذية عمود أكبر على عمود معين مع استرداد المكونات النقية بتركيز أعلى بكثير.
=== كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي ===
[[File:Hplc-perfume-chromatogram.png|thumb|300px|A chromatogram of complex mixture (perfume water) obtained by reversed phase HPLC]]
{{تفاصيل|Reversed-phase chromatography}}
تحتوي HPLC ذات الطور العكسي (RP-HPLC) على طور ثابت غير قطبي وطور متحرك مائي قطبي معتدل. إحدى الأطور الثابتة الشائعة هي السيليكا التي تم تعديل سطحها باستخدام المادة RMe2SiCl، حيث R عبارة عن مجموعة ألكيل مستقيمة مثل C<sub>18</sub>H<sub>37</sub> أو C<sub>8</sub>H<sub>17</sub>. مع مثل هذه الأطوار الثابتة، يكون وقت الاستبقاء أطول للجزيئات الأقل قطبية، بينما يتم التخلص من الجزيئات القطبية بسهولة أكبر (في وقت مبكر من التحليل). يمكن للمحلل المخبري زيادة أوقات الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من الماء إلى الطور المتحرك؛ مما يجعل ألفة المادة التحليلية الكارهة للماء للطورالثابت الكاره للماء أقوى مقارنة بالطور المتحرك الأكثر مقاومة للماء الآن. وبالمثل، يمكن للمحلل المخبري تقليل وقت الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من المذيبات العضوية إلى الطور المتحرك eluent. يتم استخدام RP-HPLC بشكل شائع لدرجة أنه غالبًا ما يشار إليه بشكل غير صحيح باسم "HPLC" دون مزيد من المواصفات. تستخدم صناعة الأدوية بانتظام نوع الكروماتوغرافيا RP-HPLC لضمان جودة الأدوية قبل إطلاقها.
يعمل RP-HPLC على مبدأ التفاعلات الكارهة للماء، والتي تنشأ من التناظر العالي في بنية الماء ثنائي القطب ويلعب الدور الأكثر أهمية في جميع العمليات في علوم الحياة. يسمح RP-HPLC بقياس هذه القوى التفاعلية. يتناسب ارتباط المادة المنحلة بالطور الثابت مع مساحة سطح التلامس حول الجزء غير القطبي من جزيء المادة المنحلة عند الارتباط بالرابط في الطورالثابت. هذا التأثير المضاد للذوبان تهيمن عليه قوة الماء من أجل "تقليل التجويف" حول المادة المنحلة وسلسلة C18 مقابل مجمع كليهما. الطاقة المنبعثة في هذه العملية تتناسب طرديًا مع التوتر السطحي للشاطف (الماء: 7.3 × 10 /6 جول / سم 2 ، الميثانول: 2.2 × 10 /6 جول / سم 2) والسطح الكارهة للماء من الحليلة والمرتبطة (المعقد) ligand على التوالي . يمكن تقليل الاحتباس عن طريق إضافة مذيب أقل قطبية (ميثانول، أسيتونتريل) إلى الطور المتحرك لتقليل التوتر السطحي للماء. يستخدم شطف التدرج هذا التأثير عن طريق التقليل التلقائي للقطبية والتوتر السطحي للطور المتحرك المائية أثناء التحليل.
تلعب الخصائص الهيكلية للجزيء المادة المنحلة دورًا مهمًا في خصائص الاحتفاظ به. بشكل عام، يتم الاحتفاظ بالتحليل ذي المساحة السطحية الكارهة للماء (C-H ، C-C ، والروابط الذرية غير القطبية عمومًا، مثل S-S وغيرها) لفترة أطول لأنه لا يتفاعل مع بنية الماء. من ناحية أخرى، فإن المواد المنحلة ذات المساحة السطحية القطبية الأعلى (التي يمنحها وجود المجموعات القطبية، مثل -OH أو -NH2 أو COO− أو -NH3 + في هيكلها) أقل احتفاظًا بها حيث يتم دمجها بشكل أفضل في الماء. تخضع مثل هذه التفاعلات لتأثيرات فراغية في تلك الجزيئات الكبيرة جدًا قد يكون لها وصول محدود فقط إلى مسام الطورالثابت، حيث تحدث التفاعلات مع الروابط السطحية (سلاسل الألكيل). عادة ما ينتج عن عائق السطح هذا احتباس أقل.
يزيد وقت الاستبقاء مع مساحة السطح الكارهة للماء (غير القطبية). تتخلص مركبات السلاسل المتفرعة بسرعة أكبر من الأيزومرات الخطية المقابلة لها بسبب تناقص مساحة السطح الإجمالية. وبالمثل يتم التخلص من المركبات العضوية ذات الروابط C-C المفردة في وقت لاحق من تلك التي تحتوي على رابطة ثلاثية C = C أو C-C ، حيث أن الرابطة المزدوجة أو الثلاثية أقصر من رابطة C-C مفردة.
بصرف النظر عن التوتر السطحي للطور المتحرك (القوة التنظيمية في هيكل eluent) ، يمكن أن تؤثر معدلات الطور المتحرك الأخرى على الاحتفاظ بالمادة المنحلة. على سبيل المثال، تؤدي إضافة الأملاح غير العضوية إلى زيادة خطية معتدلة في التوتر السطحي للمحاليل المائية (حوالي 1.5 × 10 J7 جول/سم2 لكل مول لكلوريد الصوديوم، 2.5 × 10−7 جول/ سم2 لكل مول لـ (NH4) 2SO4)، ولأن إنتروبية entropy سطح التماس بين المذيبات والمادة المنحلة يتم التحكم فيها عن طريق التوتر السطحي، فإن إضافة الأملاح تميل إلى زيادة وقت الاستبقاء. تُستخدم هذه التقنية للفصل الطفيف واستعادة البروتينات وحماية نشاطها البيولوجي في تحليل البروتين (كروماتوغرافيا التفاعل الكارهة للماء، HIC).
عامل مهم آخر هو درجة الحموضة في الطور المتحرك لأنه يمكن أن يغير الطبيعة الكارهة للماء للمادة المنحلة. لهذا السبب، تستخدم معظم الطرق عامل تخزين مؤقت، مثل فوسفات الصوديوم، للتحكم في درجة الحموضة. تخدم المحاليل الموقية Buffers أغراضًا متعددة: التحكم في الأس الهيدروجيني، وتحييد الشحنة على سطح السيليكا في الطورالثابت والعمل كعوامل إقران أيون لتحييد شحنة التحليل. يضاف فورمات الأمونيوم بشكل شائع في قياس الطيف الكتلي لتحسين الكشف عن بعض المواد المنحلة عن طريق تكوين مقاربات الأمونيوم التحليلية. غالبًا ما يضاف حمض عضوي متطاير مثل حمض الأسيتيك، أو حمض الفورميك الأكثر شيوعًا، إلى الطور المتحرك إذا تم استخدام مقياس الطيف الكتلي لتحليل العمود المائل. يستخدم حمض Trifluoroacetic بشكل غير منتظم في تطبيقات قياس الطيف الكتلي نظرًا لثباته في الكاشف ونظام توصيل المذيبات، ولكن يمكن أن يكون فعالًا في تحسين الشبكية ntion من المواد المنحلة مثل الأحماض الكربوكسيلية في التطبيقات التي تستخدم أجهزة الكشف الأخرى، حيث أنه حمض عضوي قوي إلى حد ما. تختلف تأثيرات الأحماض والمحاليل الموقية باختلاف التطبيق ولكنها تعمل بشكل عام على تحسين دقة الكروماتوغرافيا.
من الصعب جدًا إتلاف أعمدة الطور المعكوس مقارنةً بأعمدة السيليكا العادية ؛ ومع ذلك، تتكون العديد من أعمدة الطور المعكوس من جزيئات السيليكا المشتقة من الألكيل ولا يجب استخدامها مع القواعد المائية لأنها ستدمر جسيم السيليكا الأساسي. يمكن استخدامها مع حمض مائي، ولكن لا ينبغي أن يتعرض العمود للحمض لفترة طويلة، حيث يمكن أن يؤدي ذلك إلى تآكل الأجزاء المعدنية لجهاز HPLC. يجب شطف أعمدة RP-HPLC بمذيب نظيف بعد استخدامها لإزالة الأحماض المتبقية أو المحاليل، وتخزينها في تركيبة مناسبة من المذيب. يجب أن يظل المحتوى المعدني لأعمدة HPLC منخفضًا إذا كان يجب الاحتفاظ بأفضل قدرة ممكنة لفصل المواد. الاختبار الجيد للمحتوى المعدني للعمود هو حقن عينة عبارة عن خليط من 2,2'- و 4,4'-bipyridine. نظرًا لأن 2,2'-bipy يمكن أن يخلب المعدن، فسيتم تشويه شكل ذروة 2,2'-bipy (ذيول) عندما توجد أيونات معدنية على سطح السيليكا. [بحاجة لمصدر] ..
=== كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي ===
كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC)، والمعروفة أيضًا باسم كروماتوغرافيا نفاذية الهلام أو كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي، تفصل الجسيمات على أساس الحجم الجزيئي (في الواقع بواسطة نصف قطر ستوكس للجسيم). وهو بشكل عام كروماتوغرافيا منخفضة الدقة، وبالتالي فإنه غالبًا ما يكون محجوزة لخطوة "التصفية" النهائية للتنقية. كما أنها مفيدة في تحديد البنية الثلاثية والبنية الرباعية للبروتينات المنقاة. تستخدم SEC بشكل أساسي لتحليل الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات أو البوليمرات. تعمل SEC عن طريق محاصرة هذه الجزيئات الأصغر في مسام الجسيم. تمر الجزيئات الأكبر ببساطة عبر المسام لأنها أكبر من أن تدخل المسام. وبالتالي، فإن الجزيئات الأكبر تتدفق عبر العمود بشكل أسرع من الجزيئات الأصغر، أي أنه كلما كان الجزيء أصغر، زاد وقت الاحتفاظ.
تستخدم هذه التقنية على نطاق واسع لتحديد الوزن الجزيئي للسكريات. SEC هي التقنية الرسمية (التي اقترحها دستور الأدوية الأوروبي) لمقارنة الوزن الجزيئي لمختلف الهيبارين منخفض الوزن الجزيئي المتاح تجاريًا.
===كروماتوغرافيا التبادل الأيوني===
في كروماتوغرافيا التبادل الأيوني (IC)، يعتمد الاستبقاء على التجاذب بين الأيونات المنحلة والمواقع المشحونة المرتبطة بالطور الثابت. يتم استبعاد الأيونات المذابة بنفس الشحنة مثل المواقع المشحونة بالعمود من الربط، بينما يتم الاحتفاظ بالأيونات المذابة للشحنة المعاكسة للمواقع المشحونة للطور الثابت في العمود. يمكن التخلص من الأيونات المذابة التي يتم الاحتفاظ بها في الطور الثابت من العمود عن طريق تغيير شروط المذيب في الطور المتحرك الشاطف (على سبيل المثال، زيادة التأثير الأيوني لنظام المذيب عن طريق زيادة تركيز الملح في المحلول، وزيادة درجة حرارة العمود، وتغيير الرقم الهيدروجيني للمذيب، إلخ).
تشمل أنواع المبادلات الأيونية راتنجات البوليسترين، ومبادلات أيونات السليلوز والديكستران (المواد الهلامية)، والزجاج ذي المسام الخاضعة للتحكم أو السيليكا المسامية. تسمح راتنجات البوليسترين بالربط المتقاطع الذي يزيد من ثبات السلسلة. يقلل الارتباط المتقاطع العالي من الانحراف، مما يزيد من وقت الموازنة ويحسن الانتقائية في النهاية. تمتلك مبادلات أيونات السليلوز والديكستران أحجام مسام أكبر وكثافة منخفضة الشحن مما يجعلها مناسبة لفصل البروتين.
بشكل عام، تفضل المبادلات الأيونية ربط الأيونات ذات الشحنة الأعلى ونصف القطر الأصغر.
زيادة تركيز الأيون المضاد (فيما يتعلق بالمجموعات الوظيفية في الراتنجات) يقلل من وقت الاستبقاء. يقلل انخفاض الرقم الهيدروجيني من وقت الاستبقاء في تبادل الكاتيونات بينما تقلل الزيادة في الرقم الهيدروجيني من وقت الاحتفاظ في تبادل الأنيون. عن طريق خفض الرقم الهيدروجيني للمذيب في عمود التبادل الكاتيوني، على سبيل المثال، يتوفر المزيد من أيونات الهيدروجين للتنافس على المواضع على الطور الثابت الأنيوني، وبالتالي سيتم شطف الكاتيونات ضعيفة الارتباط.
يستخدم هذا النمط من الكروماتوغرافيا على نطاق واسع في التطبيقات التالية: تنقية المياه، والتركيز المسبق للمكونات النزرة، وكروماتوغرافيا التبادل الترابطي، وكروماتوغرافيا التبادل الأيوني للبروتينات، وكروماتوغرافيا التبادل الأنيوني عالي الحموضة للكربوهيدرات والسكريات قليلة الحموضة، وغيرها.
===كروماتوغرافيا ذات الألفة الحيوية===
{{details|Affinity chromatography}}
تعتمد هذه العملية الكروماتوغرافية على خاصية المواد النشطة بيولوجيا لتشكيل معقدات complexes مستقرة ومحددة وقابلة للعكس. يتضمن تكوين هذه المعقدات مشاركة القوى الجزيئية المشتركة مثل تأثيرات قوى فاندر فالس Van der Waals والتأثير الكهروستاتيكي وتأثير ثنائي القطب والألفة الهيدروفيلية ورابطة الهيدروجين. يتم تكوين رابطة بيولوجية فعالة ونوعية من خلال اجتماع متضافر للعديد من هذه القوى في مواقع النشطة التفاعلية في الطور الكروماتوغرافي.
===كروماتوغرافيا الطور العادي المائي===
كروماتوغرافيا الطور العادي المائي وبالإنكليزية Aqueous normal-phase chromatography (ANP) هي تقنية كروماتوغرافية تشمل منطقة الطور المتحرك (خيارات تركيب الطور المتحرك) بين كروماتوغرافيا الطور العكسي reversed-phase chromatography (RP) __التي فيها الطور المتحرك هو أكثر قطبية من الطور الثابت__ وكروماتوغرافيا الطور الطبيعي العضوي organic normal phase chromatography (ONP) التي يتصف الطور المتحرك بقطبية أقل من الطور الثابت. تُستخدم هذه التقنية لتحقيق انتقائية فريدة للمركبات المحبة للماء (هيدروفيلية)، مما يُظهر قدرة الشطف للطور العادي باستخدام مذيبات عضوية عكسية الطور. [بحاجة لمصدر]
==الشطف مع طور متحرك إيزوقراطي ومتدرج==
بالإنكليزية (Isocratic and gradient elution)
[[File:HPLC extraction and use.jpg|thumb|في وحدة أبحاث استخدام المنتجات الطبيعية ARS في أكسفورد, يقوم عالم مساعد (يمين) باستخراج أصباغ نباتية سيتم تحليلها بواسطة اختصاصي فيزيولوجيا النبات (يسار) باستخدام نظام HPLC.]]
يُطلق على الفصل الذي يظل فيه تكوين الطور المتحرك ثابتًا طوال الإجراء اسمًا إيزوقراطيًا Isocratic(يعني التكوين الثابت). (على سبيل المثال، ستبقى النسبة المئوية للميثانول طوال الإجراء ثابتة ، أي 10٪) الكلمة صاغها [[سابا هورفاث]] [[سابا هورفاث|Csaba Horvath]] الذي كان أحد رواد تقانة HPLC. [بحاجة لمصدر]،
لا يجب أن يظل تكوين الطور المتحرك ثابتًا. يوصف الفصل الذي يتغير فيه تكوين الطور المتحرك أثناء عملية الفصل بأنه شطف متدرج. أحد الأمثلة هو التدرج اللوني الذي يبدأ عند 10٪ ميثانول وينتهي عند 90٪ ميثانول بعد 20 دقيقة. ويطلق على عنصري الطور المتحرك اسم "A" و "B" ؛ A هو المذيب "الضعيف" الذي يسمح للمذاب (المادة المنحلة) بالتخلص ببطء فقط، بينما B هو المذيب "القوي" الذي يزيل المواد المذابة بسرعة من العمود. في كروماتوغرافيا الطور العكسي، غالبًا ما يكون المذيب A عبارة عن ماء أو محلول مائي ، بينما B عبارة عن مذيب عضوي قابل للامتزاج بالماء، مثل الأسيتونتريل أو الميثانول أو [[رباعي هيدرو الفوران]] THF أو الأيزوبروبانول.
في الشطف المتساوي ، يزداد عرض الذروة مع زمن الاستبقاء خطيًا وفقًا لمعادلة N ، عدد الصفائح النظرية. هذا يؤدي إلى عيب أن القمم المتأخرة تصبح مسطحة وواسعة للغاية. قد يمنعها شكلها وعرضها من التعرف عليها على أنها قمم.
يقلل شطف التدرج من الاحتفاظ بمكونات التصفية اللاحقة بحيث تتم إزالتها بشكل أسرع، مما يعطي قممًا أضيق (وأطول) لمعظم المكونات. يعمل هذا أيضًا على تحسين شكل الذروة للقمم الذيلية ، حيث يدفع التركيز المتزايد للشاطف العضوي جزء الذيل من الذروة إلى الأمام. يؤدي هذا أيضًا إلى زيادة ارتفاع الذروة (تبدو القمة "أكثر حدة")، وهو أمر مهم في تحليل التتبع. قد يتضمن برنامج التدرج زيادات مفاجئة "خطوة" في النسبة المئوية للمكون العضوي ، أو منحدرات مختلفة في أوقات مختلفة - كل ذلك وفقًا للرغبة في الفصل الأمثل في أقل وقت ممكن.
[[File:Reverse Phase Gradient Elution Schematic.svg|thumb|220x220px|A schematic of gradient elution. . تؤدي زيادة قوة الطور المتحرك بشكل متسلسل إلى إزالة المواد المنحلة التي لها قوة تفاعل متفاوتة مع الطور الثابت.]]
في الشطف المتساوي ، لا تتغير الانتقائية إذا تغيرت أبعاد العمود (الطول والقطر الداخلي) - أي يتم فصل القمم بنفس الترتيب. في شطف التدرج ، قد يتغير ترتيب الشطف مع تغير الأبعاد أو معدل التدفق. [بحاجة لمصدر]
تنشأ القوة الدافعة في كروماتوغرافيا الطور المعكوس في الترتيب العالي لهيكل الماء. يتمثل دور المكون العضوي في الطور المتحرك في تقليل هذا الترتيب المرتفع وبالتالي تقليل قوة التثبيط للمكون المائي.
== التشغيل ==
يتم إدخال خليط العينة المراد فصله وتحليله، في حجم صغير منفصل (عادةً ميكروليتر)، في تيار الطور المتحرك المتسرب عبر العمود. تتحرك مكونات العينة عبر العمود بسرعات مختلفة، وهي تابعة لتأثيرات فيزيائية محددة مع مادة الامتصاص (وتسمى أيضًا الطور الساكن أو الثابت stationary phase). تعتمد سرعة كل مكون على طبيعته الكيميائية وعلى طبيعة الكيميائية للطور الساكن في العمود وعلى تركيب الطور المتحرك. يُطلق على الوقت الذي يتم فيه فصل مادة تحليلية معينة elution (يخرج من العمود) اسم وقت الاحتفاظ أو الاستبقاء retention time. وقت الاستبقاء المقاس في ظل ظروف معينة هو خاصية تعريف لتحليل معين.
تتوفر العديد من أنواع الأعمدة المختلفة، المليئة بمواد ممتزة متفاوتة في حجم الجسيمات وطبيعة سطحها ("كيمياء السطح"). يتطلب استخدام مواد التعبئة ذات الأحجام الصغيرة للجسيمات استخدام ضغط تشغيلي أعلى (الضغط الخلفي backpressure) وعادة ما يحسن دقة الفصل الكروماتوغرافية (درجة الفصل للذروة بين مكونات المتتالية الخارجة من العمود). قد تكون الجسيمات الممتزة كارهة للماء hydrophobic أو قطبية بطبيعتها.
تشتمل الأطوار المتحركة الشائعة الاستخدام على أي مزيج قابل للامتزاج من الماء مع المذيبات العضوية المختلفة (الأكثر شيوعًا هي الأسيتونيتريل والميثانول). تستخدم بعض تقنيات HPLC أطوار متحركة خالية من الماء (انظر كروماتوغرافيا الطور الطبيعي normal-phase chromatography أدناه). قد يحتوي المكون المائي للطور المتحرك على أحماض (مثل حمض الفورميك أو الفوسفوريك أو ثلاثي فلورو أسيتيك) أو أملاح للمساعدة في فصل مكونات العينة. قد يظل تركيب الطور المتحرك ثابتًا (وضع الشطف المتساوي isocratic elution mode) أو متغيراً (وضع الشطف المتدرج gradient elution mode) أثناء التحليل الكروماتوغرافي. عادة ما يكون الشطف المتساوي فعالًا في فصل مكونات العينة التي تختلف اختلافًا كبيرًا في ألفتها الكيميائية مع الطور الثابت. في الشطف المتدرج، يتنوع تركيب الطور المتحرك نموذجيًا من قوة الشطف المنخفضة إلى عالية. تنعكس قوة الشطف للطور المتحرك من خلال أزمنة احتفاظ ذات قوة تصفية عالية والتي تنتج شطفًا سريعًا (أزمنة احتفاظ قصيرة). نموذجياً يمكن أن يبدأ برنامج التدرج للطور المتحرك في كروماتوغرافيا الطور المعكوس عند 5٪ أسيتونيتريل (في الماء أو محلول موقي مائي aqueous buffer) ويرتفع خطيًا إلى 95٪ أسيتونيتريل خلال 5-25 دقيقة. قد تكون فترات ثبات تركيب الطور المتحرك جزءًا من برنامج التدرج التشغيلي. على سبيل المثال، يمكن الاحتفاظ بتركيب الطور المتحرك ثابتًا عند تركيب 5٪ أسيتونيتريل لمدة 1-3 دقائق، ثم يجري تغيير خطي يصل إلى 95٪ أسيتونيتريل.[[ملف:Fraction Collector Tube Rack.jpg|تصغير|جامع القطفات الدوراني. The system is being used to isolate a fraction containing [[Complex I]] from ''E. coli'' plasma membranes. About 50 litres of bacteria were needed to isolate this amount.<ref name="Fraction collector (post on Flickr)">{{استشهاد ويب|الأخير1=Morgan|الأول1=David J.|عنوان=Fraction collector (post on Flickr)|مسار=https://www.flickr.com/photos/tz1_1zt/112090380|موقع=Flickr|تاريخ الوصول=28 October 2015|تاريخ=2003-11-19| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20201207102226/https://www.flickr.com/photos/tz1_1zt/112090380 | تاريخ أرشيف = 7 ديسمبر 2020 }}</ref>]]
يعتمد التركيب المختار للطور المتحرك (ويسمى أيضًا الشاطف eluent) على شدة التفاعلات بين مكونات العينة المختلفة (analytes) والطور الساكن (على سبيل المثال، التفاعلات الكارهة للماء في كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور المعكوس). اعتمادًا على الفتهم الكيميائية مع الطورين المتحرك والساكن تتوزع partition مكونات العينة المختلفة بين الاثنين أثناء عملية الفصل التي تحدث في العمود. تشبه عملية التوزيع partition تلك التي تحدث أثناء الاستخلاص السائل ـ السائل liquid–liquid extraction ولكنها مستمرة وليست تتم عبر مراحل تشغيلية step-wise. في هذا المثال، باستخدام التدرج اللوني للماء/الأسيتونتريل، ستتم إزالة المزيد من المكونات الكارهة للماء (الهيدروفوبية) من الطور الساكن (أي تخرج من العمود) في وقت متأخر، بمجرد أن يصبح الطور المتحرك أكثر تركيزًا في الأسيتونيتريل (أي في الطور المتحرك ذي قوة التصفية العالية من جراء تزايد هيدروفوبية المحلول الشاطف).
يعتمد اختيار مكونات الطور المتحرك والإضافات (مثل الأملاح أو الأحماض) وشروط التدرج على طبيعة العمود ومكونات العينة. غالبًا ما يتم إجراء سلسلة من العمليات التجريبية مع العينة من أجل إيجاد طريقة HPLC التي تعطي فصلًا مناسبًا.
== التطبيقات ==
=== في مجال تصنيع المواد Manufacturing ===
هناك تطبيقات عديدة لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي HPLC في العلوم المختبرية والسريرية. إنها تقنية شائعة تستخدم في تطوير [[أدوية|المنتجات الصيدلانية]]، لأنها طريقة يمكن الاعتماد عليها للحصول على نقاوة المنتج وضمان جودته.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة |عنوان=Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3 μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice |الأخير1=Gerber |الأول1=Frederic |تاريخ=May 2004 |صحيفة=Journal of Chromatography |المجلد=1036 |العدد=2 |صفحات=127–33 |doi=10.1016/j.chroma.2004.02.056 |pmid=15146913 }}</ref> بينما يمكن أن تنتج تقانة HPLC منتجات عالية الجودة (نقية)، إلا أنه ليس دائمًا الطريقة الأساسية المستخدمة في إنتاج [[الأدوية|مواد الأدوية]] السائبة bulk drug materials.<ref name="مولد تلقائيا1">{{استشهاد بدورية محكمة |عنوان=Analytical techniques in pharmaceutical analysis: A review |صحيفة=Arabian Journal of Chemistry |المجلد=10 |صفحات=S1409–S1421 |doi=10.1016/j.arabjc.2013.04.016 |الأول1=Masoom Raza |الأخير1=Siddiqui |الأول2=Zeid A. |الأخير2=AlOthman |الأول3=Nafisur |الأخير3=Rahman|سنة=2013 |doi-access=free }}</ref> وفقًا لدستور الأدوية الأوروبي [http://European%20pharmacopoeia European pharmacopoeia]، يتم استخدام HPLC في 15.5٪ فقط من التركيبات ([[اصطناع عضوي|الاصطناعات]]) syntheses.<ref name="مولد تلقائيا1" /> According to the European pharmacopoeia, HPLC is used in only 15.5% of syntheses.<ref>''The European Pharmacopoeia'', 2002. fourth ed., Council of Europe, Strasbourg.</ref> ومع ذلك، فإنه يلعب دورًا في 44٪ من التركيبات في دستور الأدوية في الولايات المتحدة United States pharmacopoeia.<ref>''United States Pharmacopoeia'', 2004. 27th ed. The USP Convention Inc., Rockville, MD.</ref> قد يكون هذا بسبب الاختلافات في القيود النقدية والزمنية، حيث يمكن أن تكون تقانة HPLC على نطاق التطبيق الأوسع تقنية باهظة الثمن. إن الزيادة في الخصوصية والدقة والدقة التي تحدث مع تقانة HPLC تقابل للأسف زيادة في التكلفة.
=== في مجال الرقابة القانونية ===
تُستخدم هذه التقنية أيضًا للكشف عن العقاقير غير المشروعة في [[البول]]. الطريقة الأكثر شيوعًا للكشف عن المخدرات هي المقايسة المناعية [[مقايسة مناعية]].<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = An evaluation of the diagnostic accuracy of liquid chromatography-tandem mass spectrometry versus immunoassay drug testing in pain patients|مسار=http://www.painphysicianjournal.com/current/pdf?article=MTM1MQ%3D%3D&journal=55|صحيفة = Pain Physician|تاريخ = 2010-06-01|pmid = 20495592|صفحات = 273–281|المجلد = 13|العدد = 3|الأول = Amadeo|الأخير = Pesce|الأول2 = Murray|الأخير2 = Rosenthal|الأول3 = Robert|الأخير3 = West|الأول4 = Cameron|الأخير4 = West|الأول5 = Bridgit|الأخير5 = Crews|first6 = Charles|last6 = Mikel|first7 = Perla|last7 = Almazan|first8 = Sergey|last8 = Latyshev| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20200808125348/https://www.painphysicianjournal.com/current/pdf?article=MTM1MQ==&journal=55 | تاريخ أرشيف = 8 أغسطس 2020 }}</ref> هذه الطريقة أكثر ملاءمة. ومع ذلك، تأتي الراحة على حساب خصوصية وتغطية مجموعة واسعة من [[الأدوية]]. نظرًا لأن HPLC هي طريقة لتحديد (وربما زيادة) النقاء، فإن استخدام HPLC وحده في تقييم تراكيز الأدوية غير كافٍ إلى حد ما. مع هذا، غالبًا ما يتم إجراء تحليل HPLC في هذا السياق جنبًا إلى جنب مع قياس ا[[مطيافية الكتلة|لطيف الكتلي]] mass spectrometry (MS).<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Screening and confirmation of 62 drugs of abuse and metabolites in urine by ultra-high-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry|صحيفة = Journal of Analytical Toxicology|تاريخ = 2013-12-01|pmid = 24084874|صفحات = 642–651|المجلد = 37|العدد = 9|doi = 10.1093/jat/bkt083|الأول = I.-Lin|الأخير = Tsai|الأول2 = Te-I.|الأخير2 = Weng|الأول3 = Yufeng J.|الأخير3 = Tseng|الأول4 = Happy Kuy-Lok|الأخير4 = Tan|الأول5 = Hsiao-Ju|الأخير5 = Sun|first6 = Ching-Hua|last6 = Kuo|doi-access = free}}</ref> استخدام الكروماتوغرافيا السائلة بدلاً من كروماتوغرافيا الغاز بالتزامن مع مطيافية الكتلة MS يتحايل على ضرورة الاشتقاق باستخدام عوامل الأسيتيل أو الألكلة، والتي يمكن أن تكون خطوة إضافية مرهقة.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Automated solid-phase extraction and two-step derivatisation for simultaneous analysis of basic illicit drugs in serum by GC/MS|صحيفة = International Journal of Legal Medicine|تاريخ = 2000-01-01|pmid = 10929239|صفحات = 229–235|المجلد = 113|العدد = 4|الأول = W.|الأخير = Weinmann|الأول2 = M.|الأخير2 = Renz|الأول3 = S.|الأخير3 = Vogt|الأول4 = S.|الأخير4 = Pollak|doi=10.1007/s004149900098}}</ref> تم استخدام هذه التقنية للكشف عن مجموعة متنوعة من العوامل مثل [[المنشطات]] doping agents، ومستقلبات الأدوية ، وتقارن الجلوكورونيد glucuronide conjugates، و[[الأمفيتامينات]] amphetamines، والمواد [[الأفيونية]] opioids، [[الكوكايين|والكوكايين]] cocaine، و BZDs ، والكيتامين ketamine، و LSD ، والقنب cocaine، و[[المبيدات الحشرية]] pesticides.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = A general screening method for doping agents in human urine by solid phase extraction and liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry|صحيفة = Analytica Chimica Acta|تاريخ = 2007-02-28|pmid = 17386652|صفحات = 94–102|المجلد = 585|العدد = 1|doi = 10.1016/j.aca.2006.12.028|الأول = Marjo|الأخير = Kolmonen|الأول2 = Antti|الأخير2 = Leinonen|الأول3 = Anna|الأخير3 = Pelander|الأول4 = Ilkka|الأخير4 = Ojanperä}}</ref><ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Toxicological screening with formula-based metabolite identification by liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry|صحيفة = Analytical Chemistry|تاريخ = 2003-11-01|pmid = 14588010|صفحات = 5710–5718|المجلد = 75|العدد = 21|doi = 10.1021/ac030162o|الأول = Anna|الأخير = Pelander|الأول2 = Ilkka|الأخير2 = Ojanperä|الأول3 = Suvi|الأخير3 = Laks|الأول4 = Ilpo|الأخير4 = Rasanen|الأول5 = Erkki|الأخير5 = Vuori}}</ref> يؤدي أداء HPLC جنبًا إلى جنب مع قياس [[مطيافية الكتلة|الطيف الكتلي]] إلى تقليل الحاجة المطلقة إلى إجراء [[المعايرة]] standardization في عمليات التشغيل التجريبية لـ HPLC.
=== في مجال الابحاث ===
يمكن إجراء فحوصات مماثلة لأغراض البحث، والكشف عن تراكيز مواد السريرية المحتملة مثل الأدوية المضادة [[للفطريات]] anti-fungal [[الربو|والربو]] asthma drugs.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Metabolic profiling of a potential antifungal drug, 3-(4-bromophenyl)-5-acetoxymethyl-2,5-dihydrofuran-2-one, in mouse urine using high-performance liquid chromatography with UV photodiode-array and mass spectrometric detection|صحيفة = Journal of Chromatography B|تاريخ = 2007-06-15|pmid = 17400036|صفحات = 10–19|المجلد = 853|العدد = 1–2|doi = 10.1016/j.jchromb.2007.02.045|الأول = Milan|الأخير = Nobilis|الأول2 = Milan|الأخير2 = Pour|الأول3 = Petr|الأخير3 = Senel|الأول4 = Jan|الأخير4 = Pavlík|الأول5 = Jirí|الأخير5 = Kunes|first6 = Marie|last6 = Voprsalová|first7 = Lenka|last7 = Kolárová|first8 = Michal|last8 = Holcapek}}</ref> من الواضح أن هذه التقنية مفيدة في مراقبة الأنواع المتعددة في العينات التي تم جمعها أيضًا، ولكنها تتطلب استخدام محاليل عيارية قياسية [[محلول قياسي]] عند البحث عن معلومات حول هوية الأنواع. يتم استخدامه كطريقة لتأكيد نتائج [[اصطناع كيميائي|التفاعلات التركيبية]] synthesis reactions ، حيث أن [[النقاوة]] purity ضرورية في هذا النوع من البحث. ومع ذلك، لا يزال قياس الطيف الكتلي mass spectrometry هو الطريقة الأكثر موثوقية لتحديد الأنواع.
=== في المجال الطبي ===
يمكن أن يشمل الاستخدام الطبي لتقانة HPLC تحليل الأدوية drug analysis، ولكنه يقع بشكل وثيق ضمن فئة تحليل المغذيات nutrient analysis. في حين أن البول هو الوسيلة الأكثر شيوعًا لتحليل تركيزات الأدوية، فإن مصل الدم blood serum هو العينة التي يتم جمعها لمعظم التحليلات الطبية باستخدام HPLC.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = A high-sensitivity ultra-high performance liquid chromatography/high-resolution time-of-flight mass spectrometry (UHPLC-HR-TOFMS) method for screening synthetic cannabinoids and other drugs of abuse in urine|صحيفة = Analytical and Bioanalytical Chemistry|تاريخ = 2013-10-01|pmid = 23954996|صفحات = 8463–8474|المجلد = 405|العدد = 26|doi = 10.1007/s00216-013-7272-8|الأول = Mira|الأخير = Sundström|الأول2 = Anna|الأخير2 = Pelander|الأول3 = Verena|الأخير3 = Angerer|الأول4 = Melanie|الأخير4 = Hutter|الأول5 = Stefan|الأخير5 = Kneisel|first6 = Ilkka|last6 = Ojanperä}}</ref> تم اختبار طرق أخرى للكشف عن الجزيئات المفيدة للدراسات السريرية ضد HPLC ، وهي [[مقايسة مناعية|المقايسات المناعية]] immunoassays. في أحد الأمثلة على ذلك، تمت مقارنة [[تركيز المادة الموافق للتثبيط النصفي|فحوصات ربط البروتين التنافسية]] competitive protein binding assays (CPBA) و تقانة HPLC من أجل الحساسية في الكشف عن [[فيتامين د]]. مفيد في تشخيص نقص فيتامين د لدى الأطفال ، وقد وجد أن حساسية ونوعية هذا CPBA وصلت فقط إلى 40٪ و 60٪، على التوالي، من قدرة تحاليل HPLC.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Competitive Protein-binding assay-based Enzyme-immunoassay Method, Compared to High-pressure Liquid Chromatography, Has a Very Lower Diagnostic Value to Detect Vitamin D Deficiency in 9–12 Years Children|صحيفة = International Journal of Preventive Medicine|تاريخ = 2015-01-01|pmc = 4542329|pmid = 26330983|صفحة = 67|المجلد = 6|doi = 10.4103/2008-7802.161069|الأول = Maliheh|الأخير = Zahedi Rad|الأول2 = Tirang Reza|الأخير2 = Neyestani|الأول3 = Bahareh|الأخير3 = Nikooyeh|الأول4 = Nastaran|الأخير4 = Shariatzadeh|الأول5 = Ali|الأخير5 = Kalayi|first6 = Niloufar|last6 = Khalaji|first7 = Azam|last7 = Gharavi}}</ref> على الرغم من كونها أداة باهظة الثمن، إلا أن دقة تقانة HPLC لا مثيل لها تقريبًا.
== المراجع ==
{{مراجع}}
{{استشراب}}
{{كيمياء تحليلية}}
{{شريط بوابات|الكيمياء|الكيمياء الحيوية}}
{{تصنيف كومنز|High performance liquid chromatography}}
{{مصادر طبية}}
[[تصنيف:استشراب]]
[[تصنيف:تقانة علمية]]' |
نص الويكي الجديد للصفحة، بعد التعديل (new_wikitext) | '{{ترجمة|تاريخ=ديسمبر 2020}}
[[ملف:Hplc.JPG|تصغير|جهاز HPLC]]
[[ملف:Preparative HPLC.svg|تصغير|400px|جهاز (HPLC) تحضيري الكروموتغرافيا ذات الأداء العالي]]
'''الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء''' <ref>{{استشهاد ويب|مسار=https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/|عنوان=ترجمة و معنى high performance liquid chromatography بالعربي في قاموس المعاني. قاموس عربي انجليزي مصطلحات صفحة 1<!-- عنوان مولد بالبوت -->|تاريخ الوصول=2020-12-07| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20201207091340/https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/ | تاريخ أرشيف = 7 ديسمبر 2020 }}</ref> أو '''الاستشراب السائلي عالي الأداء'''<ref>{{استشهاد ويب|مسار=http://ldlp-dictionary.com/dictionaries/word/3317765/A%20New%20Illustrated%20Science%20Dictionary%20(En/Ar)/high-performance%20liquid%20chromatography|عنوان=القاموس العلمي المُصوّر الجديد|ناشر=|تاريخ الوصول=24 مارس 2017| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20171208004116/http://ldlp-dictionary.com/dictionaries/word/3317765/A%20New%20Illustrated%20Science%20Dictionary%20(En/Ar)/high-performance%20liquid%20chromatography | تاريخ أرشيف = 8 ديسمبر 2017 }}</ref> {{إنج|High performance liquid chromatography}}
الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء <ref>High-performance liquid chromatography (HPLC)[https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/],ترجمة و معنى high performance liquid chromatography في قاموس عربي انجليزي. {{Webarchive|url=https://web.archive.org/web/20201206114710/https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/ |date=6 ديسمبر 2020}}</ref>، التي كان يُشار إليها سابقًا بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الضغط high-pressure liquid chromatography، هي تقنية في [[الكيمياء التحليلية]] تُستخدم لفصل وتحديد وقياس كل مكون في خليط. يعتمد على المضخات لتمرير مذيب سائل مضغوط يحتوي على خليط العينة من خلال عمود مملوء بمادة ممتصة صلبة. يتفاعل كل مكون في العينة بشكل مختلف قليلاً مع المادة الممتزة، مما يتسبب في معدلات تدفق مختلفة للمكونات المختلفة ويؤدي إلى فصل المكونات أثناء تدفقها خارج العمود.
يجري استخدام تقنية HPLC في الصناعة (على سبيل المثال، أثناء عملية إنتاج المنتجات الصيدلانية والبيولوجية)، وفي مجال القانوني والرياضي والجنائي (على سبيل المثال، الكشف عن عقاقير تحسين الأداء في البول)، في مجال البحثي (على سبيل المثال، فصل مكونات عينة بيولوجية معقدة، أو مواد كيميائية اصطناعية مماثلة similar synthetic chemicals من بعضهما البعض) ، وفي المجال الطبي (على سبيل المثال، الكشف عن مستويات فيتامين د vitamin D في مصل الدم).<ref>{{استشهاد بدورية محكمة | الأخير1 = Gerber | الأول1 = F. | الأخير2 = Krummen | الأول2 = M. | الأخير3 = Potgeter | الأول3 = H. | الأخير4 = Roth | الأول4 = A. | الأخير5 = Siffrin | الأول5 = C. | last6 = Spoendlin | first6 = C. | doi = 10.1016/j.chroma.2004.02.056 | عنوان = Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice | صحيفة = Journal of Chromatography A | المجلد = 1036 | العدد = 2 | صفحات = 127–133 | سنة = 2004 | pmid = 15146913}}</ref>
يمكن وصف الكروماتوغرافيا بأنها عملية انتقال مادة mass transfer process تتضمن الامتزاز adsorption. تعتمد تقانة HPLC على المضخات لتمرير سائل مضغوط وخليط عينة عبر عمود مملوء بمادة ماصة adsorbent، مما يؤدي إلى فصل مكونات العينة. المكون النشط للعمود، الممتزات adsorbent، عادة ما يكون عبارة عن مادة حبيبية مصنوعة من جزيئات صلبة (مثل السيليكا والبوليمرات وما إلى ذلك)، بحجم 2-50 ميكرومتر. يتم فصل مكونات مزيج العينة عن بعضها بسبب اختلاف درجات تفاعلها مع جزيئات الامتصاص. السائل المضغوط عادة عبارة عن خليط من المذيبات (على سبيل المثال، ماء، أسيتونيتريل و/أو ميثانول) ويشار إليه باسم "الطور المتحرك" mobile phase. يلعب تكوينه ودرجة حرارته دورًا رئيسيًا في عملية الفصل من خلال التأثير على التفاعلات التي تحدث بين مكونات العينة والمواد الماصة. هذه التفاعلات فيزيائية بطبيعتها، مثل تأثيرات [[هيدروفوبية]] hydrophobic (تبعثري)(dispersive)، تأثيرات كهربائية [[ثنائي القطب]] dipole–dipole وأ[[يونية]] ionic، وغالبًا ما كون مزيجًا من تلك التأثيرات.
تتميز تقانة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) عن الكروماتوغرافيا السائلة التقليدية ("أو ذات الضغط المنخفض") traditional ("low pressure") liquid chromatography بأن ضغوط التشغيل للطور المتحرك عالية بكثير (50-350 بار)، بينما تعتمد كروماتوغرافيا السائل التقليدية (أو العادية) عادةً على قوة الجاذبية لتمرير الطور المتحرك عبر العمود. نظرًا لصغر كمية العينة المفصولة في تقانة HPLC التحليلية، فإن أبعاد العمود النموذجية تكون بحيث قيم نصف قطر العمود تقع ضمن المجال (2.1-4.6 ملم) وقيم طول العمود تنحصر ضمن المجال (30-250 ملم). كما أن أعمدة HPLC تملأ بحشوات من حبيبات أو دقائق ماصة صغيرة adsorbent particles (2-50 ميكرومتر في متوسط حجم الدقائق أو الحبيبات الدقيقة). هذه الأبعاد والخصائص الآنفة الذكر تعطي تقانة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) قدرة فصل resolving power فائقة (القدرة على التمييز بين مكونات المزيج المراد فصله) عند فصل الخلائط، مما يجعلها تقنية كروماتوغرافية شائعة الاستخدام وأكثر من باقي أنواع الكروماتوغرافيا السائلة الأخرى.
يشتمل المخطط التخطيطي لجهاز الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء HPLC بشكل نموذجي على مزيل الغازات degasser، وآخذ العينات (أو الحاقن) sampler، والمضخات pumps، والكاشف detector. يقوم جهاز حاقن العينات بإدخال خليط العينة إلى تيار الطور المتحرك الذي يحمله إلى العمود. وتقوم المضخات بتأمين التدفق المطلوب وتركيب الطور المتحرك عبر العمود من مزج مكونات الطور المتحرك (المحلّات). ويولد الكاشف إشارة تتناسب مع كمية كل مكون العينة الذي يخرج تباعاً من العمود، وبالتالي يسمح الكاشف ب[[التحليل الكمي]] quantitative analysis لمكونات العينة. يتحكم المعالج الميكرويّ الرقمي digital microprocessor وبرنامج المستخدم في جهاز HPLC ويوفّران تحليل البيانات.
يمكن لبعض نماذج [[المضخات]] الميكانيكية في جهاز HPLC أن تقوم بمزج عدة [[مذيبات]] (محلّات) معًا بنسب تتغير بمرور الوقت، مما يؤدي إلى توليد تدرج في تركيب في الطور المتحرك (وإلى تدرج في قطبية الطور المتحرك). هناك العديد من أجهزة الكشف شائعة الاستخدام، مثل كاشف الأشعة فوق البنفسجية/المرئية [[مطيافية الأشعة المرئية وفوق البنفسجية]]، أو كاشف مجموعة ثنائي الضوئي ([[ثنائي ضوئي]] (PDA أو كاشف يعتمد على قياس [[مطيافية الكتلة]] [[مطيافية الكتلة]]. تحتوي معظم أجهزة HPLC أيضًا على فرن العمود column oven يسمح بضبط درجة الحرارة التي يتم عندها إجراء الفصل والتحليل.
== شرح النظرية ==
يتم ادخال المادة المراد تحليلها في تيار الطور المتحرك. سرعة تحرك المادة المنحلة داخل العمود تتحدد بكم الروابط الفيزيائية أو الكيميائية بينها وبين الطور (الساكن أو الثابت). كمية المادة المنحلة المنحبسة تعتمد على تركيب المادة وتركيب الطور الثابت والطور الناقل أو المتحرك. الوقت الذي تستغرقه المادة المنحبسة داخل العمود لكي تصل للطرف الآخر للعمود وتظهر على الكاشف يسمي وقت الاحتباس أو الاحتفاظ.
إن أجهزة الـ HPLC متوفرة بسهولة لأنها تستخدم في مجالات متعددة منها مجال التقنية الحيوية والتقنية الطبية السريرية والتحاليل الصيدلانية. إضافة إلى استخدامها في الكيمياء ومستحضرات التجميل وفي في مجال الطاقة والبيئة والصناعات الغذائية. كما أن توافر أجهزة بأسعار مقبولة وذات كفاءة متطورة وموثوقة قد جعل أجهزة الـHPLC هي الطريقة المفضلة في التحاليل الصيدلانية وذلك بدءً من إنشاء تركيب الدواء أو فصل مكوناته أو ضبط جودته. لقد تطور استخدام الـHPLC بشكل كبير خلال العقود الماضية ففي الستينات تم وضع الأسس والمبادئ النظرية لهذه التقنية، وأدى التطور في مواد تعبئة عمود الاستشراب (أعمدة الكروماتوغرافيا) في السبعينات إلى تطور الاستشراب بالطور العكوس. وفي الثمانينات أدى التطور في الحواسيب والأتمتة والبرمجيات إلى سهولة استخدام الـ HPLC . وفي التسعينات طورت أعمدة الاستشراب الميكرونية (الصغيرة) وأعمدة الاستشراب المتخصصة لاستعمال محدد، والكواشف Detector المتنوعة، بالإضافة إمكانات الحصول على البيانات المتكاملة وتخزينها واسترجاعها، مما أدى إلى الزيادة الكبيرة في فعالية وسرعة أجهزة الـ HPLC.
== التطور التاريخي لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة HPLC ==
قبل أن يستخدم العلماء والخبراء في الكيمياء التحليلية تقنيات الكروماتوغرافية السائلة القياسية، كانت أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة غير فعالة إلى حد كبير بسبب معدل تدفق المذيبات التي تعتمد على الجاذبية. وكانت تستغرق عمليات الفصل الكروماتوغرافي ساعات عديدة، وأحيانًا أيامًا حتى تكتمل.<ref name=Karger>{{استشهاد بدورية محكمة|مؤلف=Karger, Barry L. |سنة=1997|عنوان=HPLC: Early and Recent Perspectives|صحيفة= Journal of Chemical Education |المجلد=74|العدد=1|صفحات=45|doi=10.1021/ed074p45|bibcode=1997JChEd..74...45K}}</ref> كانت كروماتوغرافيا الغازية (Gas chromatography (GC في ذلك الوقت أقوى من الكروماتوغرافيا السائلة (liquid chromatography (LC، ومع ذلك، كان يُعتقد أن فصل الطور الغازي وتحليل [[بوليمرات|البوليمرات الحيوية]] القطبية ذات الوزن الجزيئي العالي أمر مستحيل. كانت [[كروماتوغرافيا الغاز|كروماتوغرافيا الغازية]] GC غير فعالة بالنسبة للعديد من علماء الكيمياء الحيوية بسبب عدم الاستقرار الحراري للمواد المذابة المراد تحليلها.<ref name=Henry>Henry, Richard A. (1 February 2009) [http://www.chromatographyonline.com/early-days-hplc-dupont "The Early Days of HPLC at Dupont"]. Chromatography Online. Avanstar Communications Inc. {{Webarchive|url=https://web.archive.org/web/20200801185002/http://www.chromatographyonline.com/early-days-hplc-dupont |date=1 أغسطس 2020}}</ref> نتيجة لذلك، تم افتراض طرق بديلة والتي أدت مع الوقت إلى تطوير تقانة HPLC.
بعد العمل الأساسي الذي قام به Martin و Synge في عام 1941 ، تنبأ Cal Giddings و Josef Huber وآخرون في الستينيات من القرن التاسع العشر أنه يمكن تشغيل LC في وضع عالي الكفاءة عن طريق تقليل أقطار حبيبات التعبئة (الحشوة) إلى حد كبير أقل مما كان في حالة الكروماتوغرافيا السائلة LC النموذجية (وحالة الكروماتوغرافيا الغازية GC) التي تستخدم حبيبات بأقطار تصل لحوالي 150 ميكرومتر وأيضاً باستخدام ضغوط خارجية لزيادة سرعة الطور المتحرك.<ref name=Karger /> وخضعت هذه التنبؤات لتجارب ودراسات مكثفة لفترة امتدت من سنوات الستينيات إلى السبعينيات. وبدأت الأبحاث التطويرية المبكرة في تحسين حبيبات حشوة أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة LC، وكان اختراع حبيبات من نوع Zipax، وهو جسيم مسامي سطحيًا، واعدًا لتقنية HPLC.<ref>Iler, R.K. (1979) ''The Chemistry of Silica''. John Wiley & Sons. New York.</ref>
جلبت أعوام السبعينيات العديد من التطورات في [[الأجهزة]] و[[البرمجيات]] المتعلقة بتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي. بدأ الباحثون في استخدام المضخات والحاقن لعمل تصميم أولي لنظام تقانة HPLC.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|مؤلف1=Karger, B. L. |مؤلف2=Berry, L. V. |عنوان=Rapid liquid-chromatographic separation of steroids on columns heavily loaded with stationary phase |صحيفة=Clin. Chem. |المجلد=17 |العدد=8 |صفحات=757–64 |pmid=4254537|سنة=1971 }}</ref> كانت [[مضخة|مضخات تضخيم الغاز]] مثالية Gas amplifier pumps لأنها تعمل بضغط ثابت ولا تتطلب سدادات مانعة للتسرب leak-free seals أو صمامات فحص check valves لتدفق ثابت وكميات جيدة. <ref name=Henry/> تم وضع معالم الأجهزة في قسم البوليمرات الصناعية Dupont IPD (Industrial Polymers Division) مثل جهاز التدرج ذي الحجم المنخفض الذي يتم استخدامه بالإضافة إلى استبدال الحاقن الحاجز septum injector بصمام الحقن الحلقي loop injection valve.<ref name=Henry/>
بينما كانت التطورات مهمة على مستوى الأجهزة، فإن تاريخ تقانة HPLC يتعلق في المقام الأول بتاريخ وتطور تكنولوجيا الحبيبات أو الجسيمات [[particle technology]].<ref name=Henry/> بعد إدخال حبيبات ذات الطبقة المسامية porous layer particles، كان هناك اتجاه ثابت لتقليل حجم تلك الجسيمات لتحسين الكفاءة.<ref name=Henry/> ولكن مع تقليل حجم الجسيمات، نشأت مشاكل جديدة. نشأت المشاكل العملية من فرق الضغط المفرط اللازم لدفع السائل المتحرك عبر العمود وأيضاُ صعوبة تحضير حشوة منتظمة التراص والتعبئة من المواد الحبيبية الصغيرة للغاية.<ref>Giddings, J. Calvin (1965) ''Dynamics of Chromatography, Part I. Principles and Theory''. Marcel Dekker, Inc., New York. p. 281.</ref> في كل مرة يتم تقليل حجم الجسيمات بشكل كبير، يجب أن تحدث جولة أخرى من تطوير الأدوات والأجهزة للتعامل مع فرق الضغط الناشء بين طرفي العمود.<ref name=Henry/>
== مفاهيم وتعاريف أساسية، ونظرية الكروماتوغرافيا ==
'''الطور المتحرك (mobile phase):''' لفصل مكونات مزيج ما، ندخل السائل المراد فصل مكوناته في تدفق متتابع، وهذا ما يسمى بالطور المتحرك (mobile phase).
'''الطور الثابت أو الساكن (stationary phase)'''
وتترك الحلالة ( المادة المنحلة) لتعبر خلال طبقة عمود الاستشراب الحاوي على مواد ( جزيئات ) أقطارها صغيرة جداً مما يمنحها سطح تماس كبير، وهذا ما ندعوه بالطور الثابت stationary phase.
'''الماد المذابة أو الحلالة (الذوائب solutes)'''
وطالما تعبر جزيئات الحلالة عمود الاستشراب محمولة في الطور المتحرك فإنه يتم تأثر Interaction مستمر بين جزيئات الحلالة (أو الذوائب solutes) وبين الطور الثابت وكذلك أيضاً مع الطور المتحرك، وينتج عن هذا توازن ديناميكي dynamic equilibrium.
كما يؤدي اختلاف عمليات التوازن هذه إلى فصل مكونات هذا المزيج.
'''(الإمرار) المتماثل isocratic elution أو الشطف بالطور المتحرك ذي التركيب الثابت'''
وعندما تتم عملية فصل مواد المزيج مع المحافظة على التركيب الثابت لمكونات الطور المتحرك، فإننا ندعو هذه العملية بالشطف (الإمرار) المتماثل isocratic elution.
'''الشطف المتدرج gradient elution''' فهو التغير المستمر لتركيب الطور المتحرك كنسبة نوع أو أكثر من المذيبات في الطور المتحرك كتابع للزمن.
'''كاشف detector'''
عندما تخرج جزيئات الحلالة من مناطق الطور المتحرك فإنها تمر عبر كاشف detector أو سلسلة من الكواشف (المتحريات). وتستجيب إشارات الكاشف كدالة على تركيز الحليلة (المادة المذابة) في قطفات الطور المتحرك التي تخرج من العمود مع الزمن.
'''برامج تحليل بيانات data processors'''
ترسل هذه الإشارات إلى برامج تحليل بيانات data processors والذي يرسم الخطوط البيانية plot كدالة مع الزمن.
'''المخطط الاستشرابي chromatogram'''
ويدعى المخطط الذي يظهر هذه الإشارات بالمخطط الاستشرابي chromatogram، وتدعى مناطق المكونات لكل مركب بالقمم الاستشرابية chromatographic peaks . وتتميز هذه القمم بالمعايير (المتثابتات) parameters التالية : العرض، المساحة، ارتفاع القمة، ومدى التذييل tailing، وزمن العبور (الاحتفاظ) retention time. ويدعى الجهاز الذي يقوم بهذ العمل جهاز مخطط الاستشراب (مخطاط الاستشرابي) chromatograph.
'''المحقن injector'''
في الـ HPLC تدخل الجزيئات الذائبة ضمن سيل الطور المتحرك. ويمر هذا السيل عبر مدخل inlet وينبثق عبر مخرج outlet العمود.
'''المضخة عالية الضغط pump'''
وبما أن أبعاد الأجزاء صغيرة جداً (حوالي 10 ميكرون أو أقل) والعمود مملوء بشكل كامل فإنه لا بد من دفع حركة الطور المتحرك باستخدام مضخات عالية الضغط.
وإن الجزيئات الذائبة فقط هي التي تنتقل عبر الطور المتحرك. والجزيئات التي تتفاعل مع سطح العمود سيحدث لها عرقلة impeded بالخروج، والعصبة الناشئة عنها سيحدث لها لفظ متأخر عن لفظ العصبة التي تتثبت جزيئاتها بشكل أضعف. إن النزوح النسبي للذائبة يعتمد على خواصها الحركية والترموديناميكية.
وتختلف المضخات في سعة الضغط، ولكن يتم قياس أدائها على أساس قدرتها على إنتاج معدل تدفق حجمي ثابت وقابل للتكرار. قد يصل الضغط إلى 60 ميجا باسكال (6000 رطل/ بوصة 2)، أو حوالي 600 ضغط جوي. تم تحسين أنظمة HPLC الحديثة للعمل في ضغوط أعلى بكثير، وبالتالي فهي قادرة على استخدام أحجام جزيئات أصغر بكثير في الأعمدة (<2 ميكرومتر). يمكن أن تعمل أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء هذه أو UHPLCs بسرعة تصل إلى 120 ميجا باسكال (17405 رطل/بوصة 2) ، أو حوالي 1200 الغلاف الجوي المصطلح "UHPLCs" هو علامة تجارية لشركة Waters Corporation
=== الكواشف===
تنقسم أجهزة الكشف عن HPLC إلى فئتين رئيسيتين: عالمية أو انتقائية. تقيس أجهزة الكشف العالمية عادةً خاصية الكتلة (على سبيل المثال، معامل الانكسار) عن طريق قياس اختلاف الخاصية المادية بين الطور المتحرك والطور المتحرك باستخدام المذاب بينما تقيس الكاشفات الانتقائية خاصية المذاب (على سبيل المثال، امتصاص الأشعة فوق البنفسجية) عن طريق الاستجابة ببساطة إلى الخصائص الفيزيائية أو الكيميائية للمذاب. [18] يستخدم HPLC بشكل شائع كاشف امتصاص UV-Vis ، ومع ذلك، يمكن استخدام مجموعة واسعة من أجهزة الكشف عن اللوني. كاشف عالمي يكمل الكشف عن امتصاص الأشعة فوق البنفسجية المرئية هو كاشف الأيروسول المشحون (CAD). يشتمل نوع من الكاشفات المستخدمة بشكل شائع على كاشفات معامل الانكسار، والتي توفر قراءات عن طريق قياس التغيرات في معامل الانكسار للشاطف أثناء تحركه عبر خلية التدفق. في حالات معينة، من الممكن استخدام أجهزة كشف متعددة، على سبيل المثال LCMS يجمع عادةً بين UV-Vis مع مطياف الكتلة.
=== العوامل المؤثرة على كفاءة الفصل ===
إن مدى وكفاءة الفصل بين قمتي لفظ متقاربتين يعبَّر عنها ب'''عامل الاحتباس''' أو '''عامل السعة''' '''(retention (or capacity) factor (k’)''' ، و'''عامل الاصطفاء''' '''selectivity factor''' ، و '''عدد الطبقات النظرية N'''. إن عامل السعة هو قياس زمن التصاق جزيئات الذائبة بأجزاء العمود مقارنة مع زمن التصاقها بالطور المتحرك. لذلك كلما كبرت قيمة K’ كلما زاد التثبت على أجزاء العمود.<ref>{{استشهاد ويب| مسار = http://www.cem.msu.edu/~cem333/Week16.pdf| عنوان =| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20120617061134/http://www.cem.msu.edu/~cem333/Week16.pdf | تاريخ أرشيف = 17 يونيو 2012 }}</ref>
== أنواع الكروماتوغرافيا السائلة==
=== كروماتوغرافيا التقسيم Partition chromatography ===
[[File:HILIC Partition Method Graphic.png|thumb|300px|[[HILIC]] Partition Technique Useful Range]]
كانت كروماتوغرافيا التقسيم (التشارك أو التوزع) Partition chromatography أحد الأنواع الأولى للكروماتوغرافيا التي طورها الكيميائيون.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة| المجلد = 19| العدد = 5| صفحات = 506–512| الأخير = Ettre| الأول = C.| عنوان = Milestones in Chromatography: The Birth of Partition Chromatography| صحيفة = LCGC| تاريخ الوصول = 2016-02-26| تاريخ = 2001| مسار = http://images.alfresco.advanstar.com/alfresco_images/pharma/2014/08/22/1598ed6f-5bbe-400b-bc08-ff07d2c59826/article-2090.pdf| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20161006152921/http://images.alfresco.advanstar.com/alfresco_images/pharma/2014/08/22/1598ed6f-5bbe-400b-bc08-ff07d2c59826/article-2090.pdf | تاريخ أرشيف = 6 أكتوبر 2016 }}</ref> تم تطبيق مبدأ معامل التقسيم partition coefficient في [[استشراب ورقة|كروماتوغرافيا الورق]] و[[استشراب طبقة رقيقة|كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة]] والطور الغازي وتطبيقات فصل سائل ــ سائل. حصل Archer John Porter Martin و Richard Laurence Millington Synge على جائزة نوبل في الكيمياء لعام 1952 لتطويرهما لهذه التقنية، والتي كانت تستخدم لفصل الأحماض الأمينية.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة| المجلد = 35| العدد = 1–2| صفحات = 91–121| الأخير1 = Martin| الأول1 = A J P| الأخير2 = Synge| الأول2 = R L M| عنوان = Separation of the higher monoamino-acids by counter-current liquid-liquid extraction: the amino-acid composition of wool| صحيفة = Biochemical Journal| تاريخ = 1941| pmid = 16747393| doi=10.1042/bj0350091| pmc=1265473}}</ref> يستخدم كروماتوغرافيا التقسيم مذيبًا محتفظًا به، على السطح أو داخل حبيبات أو ألياف مصفوفة داعمة صلبة "خاملة" كما هو الحال مع كروماتوغرافيا الورق؛ أو يستفيد من بعض تأثيرات الكولومبية (الكهربائية الساكنة) و/ أو الهيدروجين مع الطور الثابت. تنقسم مكونات العينة بين الطور الثابت السائل والطور المتحرك eluent. تمامًا كما هو الحال في كروماتوغرافيا التفاعل المحبة للماء (HILIC ؛ تقنية فرعية داخل HPLC)، تفصل هذه الطريقة مكونات المزيج المراد تحليله بناءً على الاختلافات في قطبيتها. غالبًا ما يستخدم HILIC طورًا ثابتًا قطبيًا مرتبطًا وطورًا متحركًا مصنوعًا بشكل أساسي من الأسيتونيتريل مع الماء كمكون قوي. تم استخدام قسم HPLC تاريخيًا على دعامات السيليكا أو الألومينا غير المربوطة unbonded silica. يعمل كل منها بشكل فعال لفصل مكونات العينة المراد تحليلها عن طريق الاختلافات القطبية النسبية. تتميز الأطوار المرتبطة بـ HILIC بميزة فصل المواد المذابة الحمضية والقاعدية والمحايدة في مسار كروماتوغرافي واحد.<ref>{{استشهاد بكتاب|سنة=1987 |عنوان=High performance liquid chromatography |مسار=https://archive.org/details/highperformancel00lind |url-access=registration |ناشر=Wiley |مؤلف1=Lindsay, S. |مؤلف2=Kealey, D. |osti = 7013902}} from review {{استشهاد بدورية محكمة|صحيفة=J. Am. Chem. Soc. |المجلد=110 |العدد=11 |سنة=1988 |doi=10.1021/ac00162a003|عنوان=Theoretical and experimental foundation for surface-coverage programming in gas–solid chromatography with an adsorbable carrier gas|الأخير1=Hung|الأول1=L. B.|الأخير2=Parcher|الأول2=J. F.|الأخير3=Shores|الأول3=J. C.|الأخير4=Ward|الأول4=E. H.|صفحات=1090–1096}}</ref>
تنتشر المواد المنحلة القطبية polar analytes في طبقة مائية ثابتة مرتبطة بالطور القطبي الثابت، وبالتالي يتم الاحتفاظ بها. كلما زادت قوة التفاعلات بين المواد المنحلة القطبية والطور القطبي الثابت (بالنسبة إلى الطور المتحرك)، زاد وقت الشطف elution time. تعتمد قوة التأثير أو التفاعل على طبيعة جزء المجموعات الوظيفية من البنية الجزيئية للمواد المنحلة، مع مجموعات أكثر استقطابًا (على سبيل المثال، هيدروكسيل-) ومجموعات قادرة على الارتباط الهيدروجيني الذي يؤدي إلى مزيد من الاحتفاظ. يمكن أن تزيد التاثيرات الكولومبية (الكهروستاتيكية) أيضًا من الاحتفاظ. سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، بينما تميل إضافة المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى زيادة أوقات الاستبقاء.
===كروماتوغرافيا الطور العادي===
كان كروماتوغرافيا الطور الطبيعي أحد الأنواع الأولى من HPLC التي طورها الكيميائيون. تُعرف هذه الطريقة أيضًا باسم HPLC من النوع العادي (NP-HPLC) ، حيث تفصل هذه الطريقة المواد المنحلة المراد فصلها بناءً على تقاربها مع سطح قطبي ثابت مثل السيليكا، ومن ثم فهي تعتمد على قدرة التحليل على الانخراط في التأثيرات القطبية (مثل الترابط الهيدروجيني أو ثنائي القطب) مع السطح الماص. يستخدم NP-HPLC طورًا متحركًا غير قطبي وغير مائي (على سبيل المثال، الكلوروفورم)، ويعمل بشكل فعال لفصل المواد المنحلة القابلة للذوبان بسهولة في المذيبات غير القطبية. يرتبط التحليل بالطورالثابت القطبي ويتم الاحتفاظ بها. تزداد قوة الامتزاز مع زيادة قطبية المواد المنحلة. لا تعتمد قوة التأثير فقط على المجموعات الوظيفية الموجودة في بنية جزيء المواد المنحلة، بل تعتمد أيضًا على العوامل الاستراتجية. يسمح تأثير العائق الفراغي على قوة التأثير لهذه الطريقة بحل أيزومرات بنيوية (منفصلة).
سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، في حين تميل المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى إحداث شطف أبطأ (زيادة أوقات الاحتفاظ). تميل المذيبات القطبية للغاية مثل آثار الماء في الطور المتحرك إلى الامتصاص إلى السطح الصلب للطور الثابت مكونًا طبقة ثابتة (مائية) والتي تلعب دورًا نشطًا في الاحتفاظ. هذا السلوك غريب إلى حد ما بالنسبة لكروماتوغرافيا الطور الطبيعي لأنه محكوم بشكل حصري تقريبًا بآلية امتزاز (على سبيل المثال، تتفاعل المواد المنحلة مع سطح صلب بدلاً من الطبقة المذابة ليجند متصل بالسطح الماص؛ انظر أيضًا HPLC ذو المرحلة العكسية أدناه). لا يزال كروماتوغرافيا الامتزاز مستخدمة على نطاق واسع لفصل الأيزومرات الهيكلية في كل من تنسيقات كروماتوغرافيا العمود والطبقة الرقيقة على دعامات السيليكا أو الألومينا المنشط (المجفف).
فشلت أنواع الكروماتوغرافية التقسيمية و NP-HPLC في السبعينيات مع تطوير كروماتوغرافيا HPLC ذات الأطوار العكسية بسبب ضعف استنساخ نتائج أوقات الاحتفاظ بسبب وجود طبقة مذيبات عضوية مائية أو بروتونية على سطح السيليكا أو وسط كروماتوغراف الألومينا . تتغير هذه الطبقة مع أي تغييرات في تكوين الطور المتحرك (على سبيل المثال، مستوى الرطوبة) مما يتسبب في أوقات استبقاء الانجراف.
في الآونة الأخيرة، أصبح الفصل الكروماتوغرافي شائعًا مرة أخرى مع تطور مراحل الارتباط الهيليك "Hilic" التي تُظهر تحسين استنساخ نتائج، ونتيجة لفهم أفضل لنطاق فائدة هذه التقنية.
===كروماتوغرافيا الإزاحة===
المبدأ الأساسي لكروماتوغرافيا الإزاحة displacement chromatography هو: إن الجزيء ذو الألفة العالية لركازة الكروماتوغرافيا (المزيح displacer) سوف يتنافس بفعالية على مواقع الربط، وبالتالي يزيح جميع الجزيئات ذات الألفة الأقل.<ref>[http://www.sacheminc.com/industries/biotechnology/teaching-tools.html Displacement Chromatography]. Sacheminc.com. Retrieved 2011-06-07. {{webarchive |url=https://web.archive.org/web/20080915113736/http://www.sacheminc.com/industries/biotechnology/teaching-tools.html |date=September 15, 2008 }}</ref> هناك اختلافات واضحة بين كروماتوغرافيا الإزاحة وكروماتوغرافيا الشطف elution chromatography. في وضع كروماتوغرافيا الشطف، تظهر المواد عادةً من عمود في قمم غاوسية ضيقة Gaussian peaks. مطلوب فصل واسع للقمم، مفضل عن خط الأساس baseline، من أجل تحقيق أقصى تنقية. تعتمد السرعة التي ينتقل بها أي مكون من خليط إلى أسفل العمود في وضع كروماتوغرافيا الشطف على العديد من العوامل. ولكن لكي تنتقل مادتان بسرعات مختلفة، وبالتالي يتم حلهما، يجب أن تكون هناك اختلافات جوهرية في بعض التفاعلات بين الجزيئات الحيوية وركازة الكروماتوغرافيا. يتم ضبط متحولات التشغيل لتعظيم تأثير هذا الاختلاف. في كثير من الحالات، لا يمكن تحقيق الفصل الأساسي للقمم إلا من خلال شطف التدرج وتحميل العمود المنخفض. وبالتالي، هناك عيبان في كروماتوغرافيا وضع الشطف، خاصة في المقياس التحضيري، وهما التعقيد التشغيلي، بسبب ضخ المذيبات المتدرج، والإنتاجية المنخفضة، بسبب التحميل المنخفض للعمود. يتميز كروماتوغرافيا الإزاحة بمزايا تفوق كروماتوغرافيا الشطف حيث يتم حل المكونات في مناطق متتالية من المواد النقية بدلاً من "القمم". نظرًا لأن العملية تستفيد من عدم خطية متساوي الحرارة، يمكن فصل تغذية عمود أكبر على عمود معين مع استرداد المكونات النقية بتركيز أعلى بكثير.
=== كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي ===
[[File:Hplc-perfume-chromatogram.png|thumb|300px|A chromatogram of complex mixture (perfume water) obtained by reversed phase HPLC]]
{{تفاصيل|Reversed-phase chromatography}}
تحتوي HPLC ذات الطور العكسي (RP-HPLC) على طور ثابت غير قطبي وطور متحرك مائي قطبي معتدل. إحدى الأطور الثابتة الشائعة هي السيليكا التي تم تعديل سطحها باستخدام المادة RMe2SiCl، حيث R عبارة عن مجموعة ألكيل مستقيمة مثل C<sub>18</sub>H<sub>37</sub> أو C<sub>8</sub>H<sub>17</sub>. مع مثل هذه الأطوار الثابتة، يكون وقت الاستبقاء أطول للجزيئات الأقل قطبية، بينما يتم التخلص من الجزيئات القطبية بسهولة أكبر (في وقت مبكر من التحليل). يمكن للمحلل المخبري زيادة أوقات الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من الماء إلى الطور المتحرك؛ مما يجعل ألفة المادة التحليلية الكارهة للماء للطورالثابت الكاره للماء أقوى مقارنة بالطور المتحرك الأكثر مقاومة للماء الآن. وبالمثل، يمكن للمحلل المخبري تقليل وقت الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من المذيبات العضوية إلى الطور المتحرك eluent. يتم استخدام RP-HPLC بشكل شائع لدرجة أنه غالبًا ما يشار إليه بشكل غير صحيح باسم "HPLC" دون مزيد من المواصفات. تستخدم صناعة الأدوية بانتظام نوع الكروماتوغرافيا RP-HPLC لضمان جودة الأدوية قبل إطلاقها.
يعمل RP-HPLC على مبدأ التفاعلات الكارهة للماء، والتي تنشأ من التناظر العالي في بنية الماء ثنائي القطب ويلعب الدور الأكثر أهمية في جميع العمليات في علوم الحياة. يسمح RP-HPLC بقياس هذه القوى التفاعلية. يتناسب ارتباط المادة المنحلة بالطور الثابت مع مساحة سطح التلامس حول الجزء غير القطبي من جزيء المادة المنحلة عند الارتباط بالرابط في الطورالثابت. هذا التأثير المضاد للذوبان تهيمن عليه قوة الماء من أجل "تقليل التجويف" حول المادة المنحلة وسلسلة C18 مقابل مجمع كليهما. الطاقة المنبعثة في هذه العملية تتناسب طرديًا مع التوتر السطحي للشاطف (الماء: 7.3 × 10 /6 جول / سم 2 ، الميثانول: 2.2 × 10 /6 جول / سم 2) والسطح الكارهة للماء من الحليلة والمرتبطة (المعقد) ligand على التوالي . يمكن تقليل الاحتباس عن طريق إضافة مذيب أقل قطبية (ميثانول، أسيتونتريل) إلى الطور المتحرك لتقليل التوتر السطحي للماء. يستخدم شطف التدرج هذا التأثير عن طريق التقليل التلقائي للقطبية والتوتر السطحي للطور المتحرك المائية أثناء التحليل.
تلعب الخصائص الهيكلية للجزيء المادة المنحلة دورًا مهمًا في خصائص الاحتفاظ به. بشكل عام، يتم الاحتفاظ بالتحليل ذي المساحة السطحية الكارهة للماء (C-H ، C-C ، والروابط الذرية غير القطبية عمومًا، مثل S-S وغيرها) لفترة أطول لأنه لا يتفاعل مع بنية الماء. من ناحية أخرى، فإن المواد المنحلة ذات المساحة السطحية القطبية الأعلى (التي يمنحها وجود المجموعات القطبية، مثل -OH أو -NH2 أو COO− أو -NH3 + في هيكلها) أقل احتفاظًا بها حيث يتم دمجها بشكل أفضل في الماء. تخضع مثل هذه التفاعلات لتأثيرات فراغية في تلك الجزيئات الكبيرة جدًا قد يكون لها وصول محدود فقط إلى مسام الطورالثابت، حيث تحدث التفاعلات مع الروابط السطحية (سلاسل الألكيل). عادة ما ينتج عن عائق السطح هذا احتباس أقل.
يزيد وقت الاستبقاء مع مساحة السطح الكارهة للماء (غير القطبية). تتخلص مركبات السلاسل المتفرعة بسرعة أكبر من الأيزومرات الخطية المقابلة لها بسبب تناقص مساحة السطح الإجمالية. وبالمثل يتم التخلص من المركبات العضوية ذات الروابط C-C المفردة في وقت لاحق من تلك التي تحتوي على رابطة ثلاثية C = C أو C-C ، حيث أن الرابطة المزدوجة أو الثلاثية أقصر من رابطة C-C مفردة.
بصرف النظر عن التوتر السطحي للطور المتحرك (القوة التنظيمية في هيكل eluent) ، يمكن أن تؤثر معدلات الطور المتحرك الأخرى على الاحتفاظ بالمادة المنحلة. على سبيل المثال، تؤدي إضافة الأملاح غير العضوية إلى زيادة خطية معتدلة في التوتر السطحي للمحاليل المائية (حوالي 1.5 × 10 J7 جول/سم2 لكل مول لكلوريد الصوديوم، 2.5 × 10−7 جول/ سم2 لكل مول لـ (NH4) 2SO4)، ولأن إنتروبية entropy سطح التماس بين المذيبات والمادة المنحلة يتم التحكم فيها عن طريق التوتر السطحي، فإن إضافة الأملاح تميل إلى زيادة وقت الاستبقاء. تُستخدم هذه التقنية للفصل الطفيف واستعادة البروتينات وحماية نشاطها البيولوجي في تحليل البروتين (كروماتوغرافيا التفاعل الكارهة للماء، HIC).
عامل مهم آخر هو درجة الحموضة في الطور المتحرك لأنه يمكن أن يغير الطبيعة الكارهة للماء للمادة المنحلة. لهذا السبب، تستخدم معظم الطرق عامل تخزين مؤقت، مثل فوسفات الصوديوم، للتحكم في درجة الحموضة. تخدم المحاليل الموقية Buffers أغراضًا متعددة: التحكم في الأس الهيدروجيني، وتحييد الشحنة على سطح السيليكا في الطورالثابت والعمل كعوامل إقران أيون لتحييد شحنة التحليل. يضاف فورمات الأمونيوم بشكل شائع في قياس الطيف الكتلي لتحسين الكشف عن بعض المواد المنحلة عن طريق تكوين مقاربات الأمونيوم التحليلية. غالبًا ما يضاف حمض عضوي متطاير مثل حمض الأسيتيك، أو حمض الفورميك الأكثر شيوعًا، إلى الطور المتحرك إذا تم استخدام مقياس الطيف الكتلي لتحليل العمود المائل. يستخدم حمض Trifluoroacetic بشكل غير منتظم في تطبيقات قياس الطيف الكتلي نظرًا لثباته في الكاشف ونظام توصيل المذيبات، ولكن يمكن أن يكون فعالًا في تحسين الشبكية ntion من المواد المنحلة مثل الأحماض الكربوكسيلية في التطبيقات التي تستخدم أجهزة الكشف الأخرى، حيث أنه حمض عضوي قوي إلى حد ما. تختلف تأثيرات الأحماض والمحاليل الموقية باختلاف التطبيق ولكنها تعمل بشكل عام على تحسين دقة الكروماتوغرافيا.
من الصعب جدًا إتلاف أعمدة الطور المعكوس مقارنةً بأعمدة السيليكا العادية ؛ ومع ذلك، تتكون العديد من أعمدة الطور المعكوس من جزيئات السيليكا المشتقة من الألكيل ولا يجب استخدامها مع القواعد المائية لأنها ستدمر جسيم السيليكا الأساسي. يمكن استخدامها مع حمض مائي، ولكن لا ينبغي أن يتعرض العمود للحمض لفترة طويلة، حيث يمكن أن يؤدي ذلك إلى تآكل الأجزاء المعدنية لجهاز HPLC. يجب شطف أعمدة RP-HPLC بمذيب نظيف بعد استخدامها لإزالة الأحماض المتبقية أو المحاليل، وتخزينها في تركيبة مناسبة من المذيب. يجب أن يظل المحتوى المعدني لأعمدة HPLC منخفضًا إذا كان يجب الاحتفاظ بأفضل قدرة ممكنة لفصل المواد. الاختبار الجيد للمحتوى المعدني للعمود هو حقن عينة عبارة عن خليط من 2,2'- و 4,4'-bipyridine. نظرًا لأن 2,2'-bipy يمكن أن يخلب المعدن، فسيتم تشويه شكل ذروة 2,2'-bipy (ذيول) عندما توجد أيونات معدنية على سطح السيليكا. [بحاجة لمصدر] ..
=== كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي ===
كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC)، والمعروفة أيضًا باسم كروماتوغرافيا نفاذية الهلام أو كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي، تفصل الجسيمات على أساس الحجم الجزيئي (في الواقع بواسطة نصف قطر ستوكس للجسيم). وهو بشكل عام كروماتوغرافيا منخفضة الدقة، وبالتالي فإنه غالبًا ما يكون محجوزة لخطوة "التصفية" النهائية للتنقية. كما أنها مفيدة في تحديد البنية الثلاثية والبنية الرباعية للبروتينات المنقاة. تستخدم SEC بشكل أساسي لتحليل الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات أو البوليمرات. تعمل SEC عن طريق محاصرة هذه الجزيئات الأصغر في مسام الجسيم. تمر الجزيئات الأكبر ببساطة عبر المسام لأنها أكبر من أن تدخل المسام. وبالتالي، فإن الجزيئات الأكبر تتدفق عبر العمود بشكل أسرع من الجزيئات الأصغر، أي أنه كلما كان الجزيء أصغر، زاد وقت الاحتفاظ.
تستخدم هذه التقنية على نطاق واسع لتحديد الوزن الجزيئي للسكريات. SEC هي التقنية الرسمية (التي اقترحها دستور الأدوية الأوروبي) لمقارنة الوزن الجزيئي لمختلف الهيبارين منخفض الوزن الجزيئي المتاح تجاريًا.
===كروماتوغرافيا التبادل الأيوني===
في كروماتوغرافيا التبادل الأيوني (IC)، يعتمد الاستبقاء على التجاذب بين الأيونات المنحلة والمواقع المشحونة المرتبطة بالطور الثابت. يتم استبعاد الأيونات المذابة بنفس الشحنة مثل المواقع المشحونة بالعمود من الربط، بينما يتم الاحتفاظ بالأيونات المذابة للشحنة المعاكسة للمواقع المشحونة للطور الثابت في العمود. يمكن التخلص من الأيونات المذابة التي يتم الاحتفاظ بها في الطور الثابت من العمود عن طريق تغيير شروط المذيب في الطور المتحرك الشاطف (على سبيل المثال، زيادة التأثير الأيوني لنظام المذيب عن طريق زيادة تركيز الملح في المحلول، وزيادة درجة حرارة العمود، وتغيير الرقم الهيدروجيني للمذيب، إلخ).
تشمل أنواع المبادلات الأيونية راتنجات البوليسترين، ومبادلات أيونات السليلوز والديكستران (المواد الهلامية)، والزجاج ذي المسام الخاضعة للتحكم أو السيليكا المسامية. تسمح راتنجات البوليسترين بالربط المتقاطع الذي يزيد من ثبات السلسلة. يقلل الارتباط المتقاطع العالي من الانحراف، مما يزيد من وقت الموازنة ويحسن الانتقائية في النهاية. تمتلك مبادلات أيونات السليلوز والديكستران أحجام مسام أكبر وكثافة منخفضة الشحن مما يجعلها مناسبة لفصل البروتين.
بشكل عام، تفضل المبادلات الأيونية ربط الأيونات ذات الشحنة الأعلى ونصف القطر الأصغر.
زيادة تركيز الأيون المضاد (فيما يتعلق بالمجموعات الوظيفية في الراتنجات) يقلل من وقت الاستبقاء. يقلل انخفاض الرقم الهيدروجيني من وقت الاستبقاء في تبادل الكاتيونات بينما تقلل الزيادة في الرقم الهيدروجيني من وقت الاحتفاظ في تبادل الأنيون. عن طريق خفض الرقم الهيدروجيني للمذيب في عمود التبادل الكاتيوني، على سبيل المثال، يتوفر المزيد من أيونات الهيدروجين للتنافس على المواضع على الطور الثابت الأنيوني، وبالتالي سيتم شطف الكاتيونات ضعيفة الارتباط.
يستخدم هذا النمط من الكروماتوغرافيا على نطاق واسع في التطبيقات التالية: تنقية المياه، والتركيز المسبق للمكونات النزرة، وكروماتوغرافيا التبادل الترابطي، وكروماتوغرافيا التبادل الأيوني للبروتينات، وكروماتوغرافيا التبادل الأنيوني عالي الحموضة للكربوهيدرات والسكريات قليلة الحموضة، وغيرها.
===كروماتوغرافيا ذات الألفة الحيوية===
{{details|Affinity chromatography}}
تعتمد هذه العملية الكروماتوغرافية على خاصية المواد النشطة بيولوجيا لتشكيل معقدات complexes مستقرة ومحددة وقابلة للعكس. يتضمن تكوين هذه المعقدات مشاركة القوى الجزيئية المشتركة مثل تأثيرات قوى فاندر فالس Van der Waals والتأثير الكهروستاتيكي وتأثير ثنائي القطب والألفة الهيدروفيلية ورابطة الهيدروجين. يتم تكوين رابطة بيولوجية فعالة ونوعية من خلال اجتماع متضافر للعديد من هذه القوى في مواقع النشطة التفاعلية في الطور الكروماتوغرافي.
===كروماتوغرافيا الطور العادي المائي===
كروماتوغرافيا الطور العادي المائي وبالإنكليزية Aqueous normal-phase chromatography (ANP) هي تقنية كروماتوغرافية تشمل منطقة الطور المتحرك (خيارات تركيب الطور المتحرك) بين كروماتوغرافيا الطور العكسي reversed-phase chromatography (RP) __التي فيها الطور المتحرك هو أكثر قطبية من الطور الثابت__ وكروماتوغرافيا الطور الطبيعي العضوي organic normal phase chromatography (ONP) التي يتصف الطور المتحرك بقطبية أقل من الطور الثابت. تُستخدم هذه التقنية لتحقيق انتقائية فريدة للمركبات المحبة للماء (هيدروفيلية)، مما يُظهر قدرة الشطف للطور العادي باستخدام مذيبات عضوية عكسية الطور. [بحاجة لمصدر]
==الشطف مع طور متحرك إيزوقراطي ومتدرج==
بالإنكليزية (Isocratic and gradient elution)
[[File:HPLC extraction and use.jpg|thumb|في وحدة أبحاث استخدام المنتجات الطبيعية ARS في أكسفورد, يقوم عالم مساعد (يمين) باستخراج أصباغ نباتية سيتم تحليلها بواسطة اختصاصي فيزيولوجيا النبات (يسار) باستخدام نظام HPLC.]]
يُطلق على الفصل الذي يظل فيه تكوين الطور المتحرك ثابتًا طوال الإجراء اسمًا إيزوقراطيًا Isocratic(يعني التكوين الثابت). (على سبيل المثال، ستبقى النسبة المئوية للميثانول طوال الإجراء ثابتة ، أي 10٪) الكلمة صاغها [[سابا هورفاث]] [[سابا هورفاث|Csaba Horvath]] الذي كان أحد رواد تقانة HPLC. [بحاجة لمصدر]،
لا يجب أن يظل تكوين الطور المتحرك ثابتًا. يوصف الفصل الذي يتغير فيه تكوين الطور المتحرك أثناء عملية الفصل بأنه شطف متدرج. أحد الأمثلة هو التدرج اللوني الذي يبدأ عند 10٪ ميثانول وينتهي عند 90٪ ميثانول بعد 20 دقيقة. ويطلق على عنصري الطور المتحرك اسم "A" و "B" ؛ A هو المذيب "الضعيف" الذي يسمح للمذاب (المادة المنحلة) بالتخلص ببطء فقط، بينما B هو المذيب "القوي" الذي يزيل المواد المذابة بسرعة من العمود. في كروماتوغرافيا الطور العكسي، غالبًا ما يكون المذيب A عبارة عن ماء أو محلول مائي ، بينما B عبارة عن مذيب عضوي قابل للامتزاج بالماء، مثل الأسيتونتريل أو الميثانول أو [[رباعي هيدرو الفوران]] THF أو الأيزوبروبانول.
في الشطف المتساوي ، يزداد عرض الذروة مع زمن الاستبقاء خطيًا وفقًا لمعادلة N ، عدد الصفائح النظرية. هذا يؤدي إلى عيب أن القمم المتأخرة تصبح مسطحة وواسعة للغاية. قد يمنعها شكلها وعرضها من التعرف عليها على أنها قمم.
يقلل شطف التدرج من الاحتفاظ بمكونات التصفية اللاحقة بحيث تتم إزالتها بشكل أسرع، مما يعطي قممًا أضيق (وأطول) لمعظم المكونات. يعمل هذا أيضًا على تحسين شكل الذروة للقمم الذيلية ، حيث يدفع التركيز المتزايد للشاطف العضوي جزء الذيل من الذروة إلى الأمام. يؤدي هذا أيضًا إلى زيادة ارتفاع الذروة (تبدو القمة "أكثر حدة")، وهو أمر مهم في تحليل التتبع. قد يتضمن برنامج التدرج زيادات مفاجئة "خطوة" في النسبة المئوية للمكون العضوي ، أو منحدرات مختلفة في أوقات مختلفة - كل ذلك وفقًا للرغبة في الفصل الأمثل في أقل وقت ممكن.
[[File:Reverse Phase Gradient Elution Schematic.svg|thumb|220x220px|A schematic of gradient elution. . تؤدي زيادة قوة الطور المتحرك بشكل متسلسل إلى إزالة المواد المنحلة التي لها قوة تفاعل متفاوتة مع الطور الثابت.]]
في الشطف المتساوي ، لا تتغير الانتقائية إذا تغيرت أبعاد العمود (الطول والقطر الداخلي) - أي يتم فصل القمم بنفس الترتيب. في شطف التدرج ، قد يتغير ترتيب الشطف مع تغير الأبعاد أو معدل التدفق. [بحاجة لمصدر]
تنشأ القوة الدافعة في كروماتوغرافيا الطور المعكوس في الترتيب العالي لهيكل الماء. يتمثل دور المكون العضوي في الطور المتحرك في تقليل هذا الترتيب المرتفع وبالتالي تقليل قوة التثبيط للمكون المائي.
== التشغيل ==
يتم إدخال خليط العينة المراد فصله وتحليله، في حجم صغير منفصل (عادةً ميكروليتر)، في تيار الطور المتحرك المتسرب عبر العمود. تتحرك مكونات العينة عبر العمود بسرعات مختلفة، وهي تابعة لتأثيرات فيزيائية محددة مع مادة الامتصاص (وتسمى أيضًا الطور الساكن أو الثابت stationary phase). تعتمد سرعة كل مكون على طبيعته الكيميائية وعلى طبيعة الكيميائية للطور الساكن في العمود وعلى تركيب الطور المتحرك. يُطلق على الوقت الذي يتم فيه فصل مادة تحليلية معينة elution (يخرج من العمود) اسم وقت الاحتفاظ أو الاستبقاء retention time. وقت الاستبقاء المقاس في ظل ظروف معينة هو خاصية تعريف لتحليل معين.
تتوفر العديد من أنواع الأعمدة المختلفة، المليئة بمواد ممتزة متفاوتة في حجم الجسيمات وطبيعة سطحها ("كيمياء السطح"). يتطلب استخدام مواد التعبئة ذات الأحجام الصغيرة للجسيمات استخدام ضغط تشغيلي أعلى (الضغط الخلفي backpressure) وعادة ما يحسن دقة الفصل الكروماتوغرافية (درجة الفصل للذروة بين مكونات المتتالية الخارجة من العمود). قد تكون الجسيمات الممتزة كارهة للماء hydrophobic أو قطبية بطبيعتها.
تشتمل الأطوار المتحركة الشائعة الاستخدام على أي مزيج قابل للامتزاج من الماء مع المذيبات العضوية المختلفة (الأكثر شيوعًا هي الأسيتونيتريل والميثانول). تستخدم بعض تقنيات HPLC أطوار متحركة خالية من الماء (انظر كروماتوغرافيا الطور الطبيعي normal-phase chromatography أدناه). قد يحتوي المكون المائي للطور المتحرك على أحماض (مثل حمض الفورميك أو الفوسفوريك أو ثلاثي فلورو أسيتيك) أو أملاح للمساعدة في فصل مكونات العينة. قد يظل تركيب الطور المتحرك ثابتًا (وضع الشطف المتساوي isocratic elution mode) أو متغيراً (وضع الشطف المتدرج gradient elution mode) أثناء التحليل الكروماتوغرافي. عادة ما يكون الشطف المتساوي فعالًا في فصل مكونات العينة التي تختلف اختلافًا كبيرًا في ألفتها الكيميائية مع الطور الثابت. في الشطف المتدرج، يتنوع تركيب الطور المتحرك نموذجيًا من قوة الشطف المنخفضة إلى عالية. تنعكس قوة الشطف للطور المتحرك من خلال أزمنة احتفاظ ذات قوة تصفية عالية والتي تنتج شطفًا سريعًا (أزمنة احتفاظ قصيرة). نموذجياً يمكن أن يبدأ برنامج التدرج للطور المتحرك في كروماتوغرافيا الطور المعكوس عند 5٪ أسيتونيتريل (في الماء أو محلول موقي مائي aqueous buffer) ويرتفع خطيًا إلى 95٪ أسيتونيتريل خلال 5-25 دقيقة. قد تكون فترات ثبات تركيب الطور المتحرك جزءًا من برنامج التدرج التشغيلي. على سبيل المثال، يمكن الاحتفاظ بتركيب الطور المتحرك ثابتًا عند تركيب 5٪ أسيتونيتريل لمدة 1-3 دقائق، ثم يجري تغيير خطي يصل إلى 95٪ أسيتونيتريل.[[ملف:Fraction Collector Tube Rack.jpg|تصغير|جامع القطفات الدوراني. The system is being used to isolate a fraction containing [[Complex I]] from ''E. coli'' plasma membranes. About 50 litres of bacteria were needed to isolate this amount.<ref name="Fraction collector (post on Flickr)">{{استشهاد ويب|الأخير1=Morgan|الأول1=David J.|عنوان=Fraction collector (post on Flickr)|مسار=https://www.flickr.com/photos/tz1_1zt/112090380|موقع=Flickr|تاريخ الوصول=28 October 2015|تاريخ=2003-11-19| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20201207102226/https://www.flickr.com/photos/tz1_1zt/112090380 | تاريخ أرشيف = 7 ديسمبر 2020 }}</ref>]]
يعتمد التركيب المختار للطور المتحرك (ويسمى أيضًا الشاطف eluent) على شدة التفاعلات بين مكونات العينة المختلفة (analytes) والطور الساكن (على سبيل المثال، التفاعلات الكارهة للماء في كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور المعكوس). اعتمادًا على الفتهم الكيميائية مع الطورين المتحرك والساكن تتوزع partition مكونات العينة المختلفة بين الاثنين أثناء عملية الفصل التي تحدث في العمود. تشبه عملية التوزيع partition تلك التي تحدث أثناء الاستخلاص السائل ـ السائل liquid–liquid extraction ولكنها مستمرة وليست تتم عبر مراحل تشغيلية step-wise. في هذا المثال، باستخدام التدرج اللوني للماء/الأسيتونتريل، ستتم إزالة المزيد من المكونات الكارهة للماء (الهيدروفوبية) من الطور الساكن (أي تخرج من العمود) في وقت متأخر، بمجرد أن يصبح الطور المتحرك أكثر تركيزًا في الأسيتونيتريل (أي في الطور المتحرك ذي قوة التصفية العالية من جراء تزايد هيدروفوبية المحلول الشاطف).
يعتمد اختيار مكونات الطور المتحرك والإضافات (مثل الأملاح أو الأحماض) وشروط التدرج على طبيعة العمود ومكونات العينة. غالبًا ما يتم إجراء سلسلة من العمليات التجريبية مع العينة من أجل إيجاد طريقة HPLC التي تعطي فصلًا مناسبًا.
== التطبيقات ==
=== في مجال تصنيع المواد Manufacturing ===
هناك تطبيقات عديدة لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي HPLC في العلوم المختبرية والسريرية. إنها تقنية شائعة تستخدم في تطوير [[أدوية|المنتجات الصيدلانية]]، لأنها طريقة يمكن الاعتماد عليها للحصول على نقاوة المنتج وضمان جودته.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة |عنوان=Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3 μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice |الأخير1=Gerber |الأول1=Frederic |تاريخ=May 2004 |صحيفة=Journal of Chromatography |المجلد=1036 |العدد=2 |صفحات=127–33 |doi=10.1016/j.chroma.2004.02.056 |pmid=15146913 }}</ref> بينما يمكن أن تنتج تقانة HPLC منتجات عالية الجودة (نقية)، إلا أنه ليس دائمًا الطريقة الأساسية المستخدمة في إنتاج [[الأدوية|مواد الأدوية]] السائبة bulk drug materials.<ref name="مولد تلقائيا1">{{استشهاد بدورية محكمة |عنوان=Analytical techniques in pharmaceutical analysis: A review |صحيفة=Arabian Journal of Chemistry |المجلد=10 |صفحات=S1409–S1421 |doi=10.1016/j.arabjc.2013.04.016 |الأول1=Masoom Raza |الأخير1=Siddiqui |الأول2=Zeid A. |الأخير2=AlOthman |الأول3=Nafisur |الأخير3=Rahman|سنة=2013 |doi-access=free }}</ref> وفقًا لدستور الأدوية الأوروبي [http://European%20pharmacopoeia European pharmacopoeia]، يتم استخدام HPLC في 15.5٪ فقط من التركيبات ([[اصطناع عضوي|الاصطناعات]]) syntheses.<ref name="مولد تلقائيا1" /> According to the European pharmacopoeia, HPLC is used in only 15.5% of syntheses.<ref>''The European Pharmacopoeia'', 2002. fourth ed., Council of Europe, Strasbourg.</ref> ومع ذلك، فإنه يلعب دورًا في 44٪ من التركيبات في دستور الأدوية في الولايات المتحدة United States pharmacopoeia.<ref>''United States Pharmacopoeia'', 2004. 27th ed. The USP Convention Inc., Rockville, MD.</ref> قد يكون هذا بسبب الاختلافات في القيود النقدية والزمنية، حيث يمكن أن تكون تقانة HPLC على نطاق التطبيق الأوسع تقنية باهظة الثمن. إن الزيادة في الخصوصية والدقة والدقة التي تحدث مع تقانة HPLC تقابل للأسف زيادة في التكلفة.
=== في مجال الرقابة القانونية ===
تُستخدم هذه التقنية أيضًا للكشف عن العقاقير غير المشروعة في [[البول]]. الطريقة الأكثر شيوعًا للكشف عن المخدرات هي المقايسة المناعية [[مقايسة مناعية]].<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = An evaluation of the diagnostic accuracy of liquid chromatography-tandem mass spectrometry versus immunoassay drug testing in pain patients|مسار=http://www.painphysicianjournal.com/current/pdf?article=MTM1MQ%3D%3D&journal=55|صحيفة = Pain Physician|تاريخ = 2010-06-01|pmid = 20495592|صفحات = 273–281|المجلد = 13|العدد = 3|الأول = Amadeo|الأخير = Pesce|الأول2 = Murray|الأخير2 = Rosenthal|الأول3 = Robert|الأخير3 = West|الأول4 = Cameron|الأخير4 = West|الأول5 = Bridgit|الأخير5 = Crews|first6 = Charles|last6 = Mikel|first7 = Perla|last7 = Almazan|first8 = Sergey|last8 = Latyshev| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20200808125348/https://www.painphysicianjournal.com/current/pdf?article=MTM1MQ==&journal=55 | تاريخ أرشيف = 8 أغسطس 2020 }}</ref> هذه الطريقة أكثر ملاءمة. ومع ذلك، تأتي الراحة على حساب خصوصية وتغطية مجموعة واسعة من [[الأدوية]]. نظرًا لأن HPLC هي طريقة لتحديد (وربما زيادة) النقاء، فإن استخدام HPLC وحده في تقييم تراكيز الأدوية غير كافٍ إلى حد ما. مع هذا، غالبًا ما يتم إجراء تحليل HPLC في هذا السياق جنبًا إلى جنب مع قياس ا[[مطيافية الكتلة|لطيف الكتلي]] mass spectrometry (MS).<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Screening and confirmation of 62 drugs of abuse and metabolites in urine by ultra-high-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry|صحيفة = Journal of Analytical Toxicology|تاريخ = 2013-12-01|pmid = 24084874|صفحات = 642–651|المجلد = 37|العدد = 9|doi = 10.1093/jat/bkt083|الأول = I.-Lin|الأخير = Tsai|الأول2 = Te-I.|الأخير2 = Weng|الأول3 = Yufeng J.|الأخير3 = Tseng|الأول4 = Happy Kuy-Lok|الأخير4 = Tan|الأول5 = Hsiao-Ju|الأخير5 = Sun|first6 = Ching-Hua|last6 = Kuo|doi-access = free}}</ref> استخدام الكروماتوغرافيا السائلة بدلاً من كروماتوغرافيا الغاز بالتزامن مع مطيافية الكتلة MS يتحايل على ضرورة الاشتقاق باستخدام عوامل الأسيتيل أو الألكلة، والتي يمكن أن تكون خطوة إضافية مرهقة.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Automated solid-phase extraction and two-step derivatisation for simultaneous analysis of basic illicit drugs in serum by GC/MS|صحيفة = International Journal of Legal Medicine|تاريخ = 2000-01-01|pmid = 10929239|صفحات = 229–235|المجلد = 113|العدد = 4|الأول = W.|الأخير = Weinmann|الأول2 = M.|الأخير2 = Renz|الأول3 = S.|الأخير3 = Vogt|الأول4 = S.|الأخير4 = Pollak|doi=10.1007/s004149900098}}</ref> تم استخدام هذه التقنية للكشف عن مجموعة متنوعة من العوامل مثل [[المنشطات]] doping agents، ومستقلبات الأدوية ، وتقارن الجلوكورونيد glucuronide conjugates، و[[الأمفيتامينات]] amphetamines، والمواد [[الأفيونية]] opioids، [[الكوكايين|والكوكايين]] cocaine، و BZDs ، والكيتامين ketamine، و LSD ، والقنب cocaine، و[[المبيدات الحشرية]] pesticides.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = A general screening method for doping agents in human urine by solid phase extraction and liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry|صحيفة = Analytica Chimica Acta|تاريخ = 2007-02-28|pmid = 17386652|صفحات = 94–102|المجلد = 585|العدد = 1|doi = 10.1016/j.aca.2006.12.028|الأول = Marjo|الأخير = Kolmonen|الأول2 = Antti|الأخير2 = Leinonen|الأول3 = Anna|الأخير3 = Pelander|الأول4 = Ilkka|الأخير4 = Ojanperä}}</ref><ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Toxicological screening with formula-based metabolite identification by liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry|صحيفة = Analytical Chemistry|تاريخ = 2003-11-01|pmid = 14588010|صفحات = 5710–5718|المجلد = 75|العدد = 21|doi = 10.1021/ac030162o|الأول = Anna|الأخير = Pelander|الأول2 = Ilkka|الأخير2 = Ojanperä|الأول3 = Suvi|الأخير3 = Laks|الأول4 = Ilpo|الأخير4 = Rasanen|الأول5 = Erkki|الأخير5 = Vuori}}</ref> يؤدي أداء HPLC جنبًا إلى جنب مع قياس [[مطيافية الكتلة|الطيف الكتلي]] إلى تقليل الحاجة المطلقة إلى إجراء [[المعايرة]] standardization في عمليات التشغيل التجريبية لـ HPLC.
=== في مجال الابحاث ===
يمكن إجراء فحوصات مماثلة لأغراض البحث، والكشف عن تراكيز مواد السريرية المحتملة مثل الأدوية المضادة [[للفطريات]] anti-fungal [[الربو|والربو]] asthma drugs.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Metabolic profiling of a potential antifungal drug, 3-(4-bromophenyl)-5-acetoxymethyl-2,5-dihydrofuran-2-one, in mouse urine using high-performance liquid chromatography with UV photodiode-array and mass spectrometric detection|صحيفة = Journal of Chromatography B|تاريخ = 2007-06-15|pmid = 17400036|صفحات = 10–19|المجلد = 853|العدد = 1–2|doi = 10.1016/j.jchromb.2007.02.045|الأول = Milan|الأخير = Nobilis|الأول2 = Milan|الأخير2 = Pour|الأول3 = Petr|الأخير3 = Senel|الأول4 = Jan|الأخير4 = Pavlík|الأول5 = Jirí|الأخير5 = Kunes|first6 = Marie|last6 = Voprsalová|first7 = Lenka|last7 = Kolárová|first8 = Michal|last8 = Holcapek}}</ref> من الواضح أن هذه التقنية مفيدة في مراقبة الأنواع المتعددة في العينات التي تم جمعها أيضًا، ولكنها تتطلب استخدام محاليل عيارية قياسية [[محلول قياسي]] عند البحث عن معلومات حول هوية الأنواع. يتم استخدامه كطريقة لتأكيد نتائج [[اصطناع كيميائي|التفاعلات التركيبية]] synthesis reactions ، حيث أن [[النقاوة]] purity ضرورية في هذا النوع من البحث. ومع ذلك، لا يزال قياس الطيف الكتلي mass spectrometry هو الطريقة الأكثر موثوقية لتحديد الأنواع.
=== في المجال الطبي ===
يمكن أن يشمل الاستخدام الطبي لتقانة HPLC تحليل الأدوية drug analysis، ولكنه يقع بشكل وثيق ضمن فئة تحليل المغذيات nutrient analysis. في حين أن البول هو الوسيلة الأكثر شيوعًا لتحليل تركيزات الأدوية، فإن مصل الدم blood serum هو العينة التي يتم جمعها لمعظم التحليلات الطبية باستخدام HPLC.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = A high-sensitivity ultra-high performance liquid chromatography/high-resolution time-of-flight mass spectrometry (UHPLC-HR-TOFMS) method for screening synthetic cannabinoids and other drugs of abuse in urine|صحيفة = Analytical and Bioanalytical Chemistry|تاريخ = 2013-10-01|pmid = 23954996|صفحات = 8463–8474|المجلد = 405|العدد = 26|doi = 10.1007/s00216-013-7272-8|الأول = Mira|الأخير = Sundström|الأول2 = Anna|الأخير2 = Pelander|الأول3 = Verena|الأخير3 = Angerer|الأول4 = Melanie|الأخير4 = Hutter|الأول5 = Stefan|الأخير5 = Kneisel|first6 = Ilkka|last6 = Ojanperä}}</ref> تم اختبار طرق أخرى للكشف عن الجزيئات المفيدة للدراسات السريرية ضد HPLC ، وهي [[مقايسة مناعية|المقايسات المناعية]] immunoassays. في أحد الأمثلة على ذلك، تمت مقارنة [[تركيز المادة الموافق للتثبيط النصفي|فحوصات ربط البروتين التنافسية]] competitive protein binding assays (CPBA) و تقانة HPLC من أجل الحساسية في الكشف عن [[فيتامين د]]. مفيد في تشخيص نقص فيتامين د لدى الأطفال ، وقد وجد أن حساسية ونوعية هذا CPBA وصلت فقط إلى 40٪ و 60٪، على التوالي، من قدرة تحاليل HPLC.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان = Competitive Protein-binding assay-based Enzyme-immunoassay Method, Compared to High-pressure Liquid Chromatography, Has a Very Lower Diagnostic Value to Detect Vitamin D Deficiency in 9–12 Years Children|صحيفة = International Journal of Preventive Medicine|تاريخ = 2015-01-01|pmc = 4542329|pmid = 26330983|صفحة = 67|المجلد = 6|doi = 10.4103/2008-7802.161069|الأول = Maliheh|الأخير = Zahedi Rad|الأول2 = Tirang Reza|الأخير2 = Neyestani|الأول3 = Bahareh|الأخير3 = Nikooyeh|الأول4 = Nastaran|الأخير4 = Shariatzadeh|الأول5 = Ali|الأخير5 = Kalayi|first6 = Niloufar|last6 = Khalaji|first7 = Azam|last7 = Gharavi}}</ref> على الرغم من كونها أداة باهظة الثمن، إلا أن دقة تقانة HPLC لا مثيل لها تقريبًا.
== المراجع ==
{{مراجع}}
{{استشراب}}
{{كيمياء تحليلية}}
{{شريط بوابات|الكيمياء|الكيمياء الحيوية}}
{{تصنيف كومنز|High performance liquid chromatography}}
{{مصادر طبية}}
==Further reading==
* L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. W. Dolan, Introduction to Modern Liquid Chromatography, John Wiley & Sons, New York, 2009.
* M.W. Dong, Modern HPLC for practicing scientists. Wiley, 2006.
* L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. L. Glajch, Practical HPLC Method Development, John Wiley & Sons, New York, 1997.
* S. Ahuja and H. T. Rasmussen (ed), HPLC Method Development for Pharmaceuticals, Academic Press, 2007.
* S. Ahuja and M.W. Dong (ed), Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Elsevier/Academic Press, 2005.
* Y. V. Kazakevich and R. LoBrutto (ed.), HPLC for Pharmaceutical Scientists, Wiley, 2007.
* U. D. Neue, HPLC Columns: Theory, Technology, and Practice, Wiley-VCH, New York, 1997.
* M. C. McMaster, HPLC, a practical user's guide, Wiley, 2007.
==External links==
{{Commons category|High performance liquid chromatography}}
* [https://rxlalit.com/hplc-chromatography-principle-procedure-application/ '''HPLC Chromatography Principle'''<nowiki>, Application [Basic Note] – 2020.</nowiki>] at [https://rxlalit.com/ Rxlalit.com]
*{{Dmoz|/Science/Chemistry/Analytical/Separations_Science/Liquid_Chromatography|Liquid Chromatography}}
[[تصنيف:استشراب]]
[[تصنيف:تقانة علمية]]
[[الكيمياء التحليلية]]
[[الكيمياء العضوية]]' |
فرق موحد للتغييرات المصنوعة بواسطة التعديل (edit_diff) | '@@ -1,5 +1,5 @@
{{ترجمة|تاريخ=ديسمبر 2020}}
[[ملف:Hplc.JPG|تصغير|جهاز HPLC]]
-[[ملف:Preparative HPLC.svg|تصغير|400px|جهاز (HPLC)تحضيري الكروموتغرافيا ذات الأداء العالي]]
+[[ملف:Preparative HPLC.svg|تصغير|400px|جهاز (HPLC) تحضيري الكروموتغرافيا ذات الأداء العالي]]
'''الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء''' <ref>{{استشهاد ويب|مسار=https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/|عنوان=ترجمة و معنى high performance liquid chromatography بالعربي في قاموس المعاني. قاموس عربي انجليزي مصطلحات صفحة 1<!-- عنوان مولد بالبوت -->|تاريخ الوصول=2020-12-07| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20201207091340/https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/ | تاريخ أرشيف = 7 ديسمبر 2020 }}</ref> أو '''الاستشراب السائلي عالي الأداء'''<ref>{{استشهاد ويب|مسار=http://ldlp-dictionary.com/dictionaries/word/3317765/A%20New%20Illustrated%20Science%20Dictionary%20(En/Ar)/high-performance%20liquid%20chromatography|عنوان=القاموس العلمي المُصوّر الجديد|ناشر=|تاريخ الوصول=24 مارس 2017| مسار أرشيف = https://web.archive.org/web/20171208004116/http://ldlp-dictionary.com/dictionaries/word/3317765/A%20New%20Illustrated%20Science%20Dictionary%20(En/Ar)/high-performance%20liquid%20chromatography | تاريخ أرشيف = 8 ديسمبر 2017 }}</ref> {{إنج|High performance liquid chromatography}}
@@ -165,5 +165,27 @@
{{تصنيف كومنز|High performance liquid chromatography}}
{{مصادر طبية}}
+
+
+==Further reading==
+
+* L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. W. Dolan, Introduction to Modern Liquid Chromatography, John Wiley & Sons, New York, 2009.
+* M.W. Dong, Modern HPLC for practicing scientists. Wiley, 2006.
+* L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. L. Glajch, Practical HPLC Method Development, John Wiley & Sons, New York, 1997.
+* S. Ahuja and H. T. Rasmussen (ed), HPLC Method Development for Pharmaceuticals, Academic Press, 2007.
+* S. Ahuja and M.W. Dong (ed), Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Elsevier/Academic Press, 2005.
+* Y. V. Kazakevich and R. LoBrutto (ed.), HPLC for Pharmaceutical Scientists, Wiley, 2007.
+* U. D. Neue, HPLC Columns: Theory, Technology, and Practice, Wiley-VCH, New York, 1997.
+* M. C. McMaster, HPLC, a practical user's guide, Wiley, 2007.
+
+==External links==
+{{Commons category|High performance liquid chromatography}}
+
+* [https://rxlalit.com/hplc-chromatography-principle-procedure-application/ '''HPLC Chromatography Principle'''<nowiki>, Application [Basic Note] – 2020.</nowiki>] at [https://rxlalit.com/ Rxlalit.com]
+
+*{{Dmoz|/Science/Chemistry/Analytical/Separations_Science/Liquid_Chromatography|Liquid Chromatography}}
+
[[تصنيف:استشراب]]
[[تصنيف:تقانة علمية]]
+[[الكيمياء التحليلية]]
+[[الكيمياء العضوية]]
' |
حجم الصفحة الجديد (new_size) | 80607 |
حجم الصفحة القديم (old_size) | 79349 |
الحجم المتغير في التعديل (edit_delta) | 1258 |
السطور المضافة في التعديل (added_lines) | [
0 => '[[ملف:Preparative HPLC.svg|تصغير|400px|جهاز (HPLC) تحضيري الكروموتغرافيا ذات الأداء العالي]]',
1 => '',
2 => '',
3 => '==Further reading==',
4 => '',
5 => '* L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. W. Dolan, Introduction to Modern Liquid Chromatography, John Wiley & Sons, New York, 2009.',
6 => '* M.W. Dong, Modern HPLC for practicing scientists. Wiley, 2006.',
7 => '* L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. L. Glajch, Practical HPLC Method Development, John Wiley & Sons, New York, 1997.',
8 => '* S. Ahuja and H. T. Rasmussen (ed), HPLC Method Development for Pharmaceuticals, Academic Press, 2007.',
9 => '* S. Ahuja and M.W. Dong (ed), Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Elsevier/Academic Press, 2005.',
10 => '* Y. V. Kazakevich and R. LoBrutto (ed.), HPLC for Pharmaceutical Scientists, Wiley, 2007.',
11 => '* U. D. Neue, HPLC Columns: Theory, Technology, and Practice, Wiley-VCH, New York, 1997.',
12 => '* M. C. McMaster, HPLC, a practical user's guide, Wiley, 2007.',
13 => '',
14 => '==External links==',
15 => '{{Commons category|High performance liquid chromatography}}',
16 => '',
17 => '* [https://rxlalit.com/hplc-chromatography-principle-procedure-application/ '''HPLC Chromatography Principle'''<nowiki>, Application [Basic Note] – 2020.</nowiki>] at [https://rxlalit.com/ Rxlalit.com]',
18 => '',
19 => '*{{Dmoz|/Science/Chemistry/Analytical/Separations_Science/Liquid_Chromatography|Liquid Chromatography}}',
20 => '',
21 => '[[الكيمياء التحليلية]]',
22 => '[[الكيمياء العضوية]]'
] |
السطور المزالة في التعديل (removed_lines) | [
0 => '[[ملف:Preparative HPLC.svg|تصغير|400px|جهاز (HPLC)تحضيري الكروموتغرافيا ذات الأداء العالي]]'
] |
نص الصفحة الجديد، مجردا من أية تهيئة (new_text) | ' لا يزال النص الموجود في هذه الصفحة في مرحلة الترجمة إلى العربية. إذا كنت تعرف اللغة المستعملة، لا تتردد في الترجمة. (ديسمبر 2020)
جهاز HPLC
جهاز (HPLC) تحضيري الكروموتغرافيا ذات الأداء العالي
الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء [1] أو الاستشراب السائلي عالي الأداء[2] (بالإنجليزية: High performance liquid chromatography)
الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء [3]، التي كان يُشار إليها سابقًا بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الضغط high-pressure liquid chromatography، هي تقنية في الكيمياء التحليلية تُستخدم لفصل وتحديد وقياس كل مكون في خليط. يعتمد على المضخات لتمرير مذيب سائل مضغوط يحتوي على خليط العينة من خلال عمود مملوء بمادة ممتصة صلبة. يتفاعل كل مكون في العينة بشكل مختلف قليلاً مع المادة الممتزة، مما يتسبب في معدلات تدفق مختلفة للمكونات المختلفة ويؤدي إلى فصل المكونات أثناء تدفقها خارج العمود.
يجري استخدام تقنية HPLC في الصناعة (على سبيل المثال، أثناء عملية إنتاج المنتجات الصيدلانية والبيولوجية)، وفي مجال القانوني والرياضي والجنائي (على سبيل المثال، الكشف عن عقاقير تحسين الأداء في البول)، في مجال البحثي (على سبيل المثال، فصل مكونات عينة بيولوجية معقدة، أو مواد كيميائية اصطناعية مماثلة similar synthetic chemicals من بعضهما البعض) ، وفي المجال الطبي (على سبيل المثال، الكشف عن مستويات فيتامين د vitamin D في مصل الدم).[4]
يمكن وصف الكروماتوغرافيا بأنها عملية انتقال مادة mass transfer process تتضمن الامتزاز adsorption. تعتمد تقانة HPLC على المضخات لتمرير سائل مضغوط وخليط عينة عبر عمود مملوء بمادة ماصة adsorbent، مما يؤدي إلى فصل مكونات العينة. المكون النشط للعمود، الممتزات adsorbent، عادة ما يكون عبارة عن مادة حبيبية مصنوعة من جزيئات صلبة (مثل السيليكا والبوليمرات وما إلى ذلك)، بحجم 2-50 ميكرومتر. يتم فصل مكونات مزيج العينة عن بعضها بسبب اختلاف درجات تفاعلها مع جزيئات الامتصاص. السائل المضغوط عادة عبارة عن خليط من المذيبات (على سبيل المثال، ماء، أسيتونيتريل و/أو ميثانول) ويشار إليه باسم "الطور المتحرك" mobile phase. يلعب تكوينه ودرجة حرارته دورًا رئيسيًا في عملية الفصل من خلال التأثير على التفاعلات التي تحدث بين مكونات العينة والمواد الماصة. هذه التفاعلات فيزيائية بطبيعتها، مثل تأثيرات هيدروفوبية hydrophobic (تبعثري)(dispersive)، تأثيرات كهربائية ثنائي القطب dipole–dipole وأيونية ionic، وغالبًا ما كون مزيجًا من تلك التأثيرات.
تتميز تقانة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) عن الكروماتوغرافيا السائلة التقليدية ("أو ذات الضغط المنخفض") traditional ("low pressure") liquid chromatography بأن ضغوط التشغيل للطور المتحرك عالية بكثير (50-350 بار)، بينما تعتمد كروماتوغرافيا السائل التقليدية (أو العادية) عادةً على قوة الجاذبية لتمرير الطور المتحرك عبر العمود. نظرًا لصغر كمية العينة المفصولة في تقانة HPLC التحليلية، فإن أبعاد العمود النموذجية تكون بحيث قيم نصف قطر العمود تقع ضمن المجال (2.1-4.6 ملم) وقيم طول العمود تنحصر ضمن المجال (30-250 ملم). كما أن أعمدة HPLC تملأ بحشوات من حبيبات أو دقائق ماصة صغيرة adsorbent particles (2-50 ميكرومتر في متوسط حجم الدقائق أو الحبيبات الدقيقة). هذه الأبعاد والخصائص الآنفة الذكر تعطي تقانة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) قدرة فصل resolving power فائقة (القدرة على التمييز بين مكونات المزيج المراد فصله) عند فصل الخلائط، مما يجعلها تقنية كروماتوغرافية شائعة الاستخدام وأكثر من باقي أنواع الكروماتوغرافيا السائلة الأخرى.
يشتمل المخطط التخطيطي لجهاز الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء HPLC بشكل نموذجي على مزيل الغازات degasser، وآخذ العينات (أو الحاقن) sampler، والمضخات pumps، والكاشف detector. يقوم جهاز حاقن العينات بإدخال خليط العينة إلى تيار الطور المتحرك الذي يحمله إلى العمود. وتقوم المضخات بتأمين التدفق المطلوب وتركيب الطور المتحرك عبر العمود من مزج مكونات الطور المتحرك (المحلّات). ويولد الكاشف إشارة تتناسب مع كمية كل مكون العينة الذي يخرج تباعاً من العمود، وبالتالي يسمح الكاشف بالتحليل الكمي quantitative analysis لمكونات العينة. يتحكم المعالج الميكرويّ الرقمي digital microprocessor وبرنامج المستخدم في جهاز HPLC ويوفّران تحليل البيانات.
يمكن لبعض نماذج المضخات الميكانيكية في جهاز HPLC أن تقوم بمزج عدة مذيبات (محلّات) معًا بنسب تتغير بمرور الوقت، مما يؤدي إلى توليد تدرج في تركيب في الطور المتحرك (وإلى تدرج في قطبية الطور المتحرك). هناك العديد من أجهزة الكشف شائعة الاستخدام، مثل كاشف الأشعة فوق البنفسجية/المرئية مطيافية الأشعة المرئية وفوق البنفسجية، أو كاشف مجموعة ثنائي الضوئي (ثنائي ضوئي (PDA أو كاشف يعتمد على قياس مطيافية الكتلة مطيافية الكتلة. تحتوي معظم أجهزة HPLC أيضًا على فرن العمود column oven يسمح بضبط درجة الحرارة التي يتم عندها إجراء الفصل والتحليل.
محتويات
1 شرح النظرية
2 التطور التاريخي لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة HPLC
3 مفاهيم وتعاريف أساسية، ونظرية الكروماتوغرافيا
3.1 الكواشف
3.2 العوامل المؤثرة على كفاءة الفصل
4 أنواع الكروماتوغرافيا السائلة
4.1 كروماتوغرافيا التقسيم Partition chromatography
4.2 كروماتوغرافيا الطور العادي
4.3 كروماتوغرافيا الإزاحة
4.4 كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي
4.5 كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي
4.6 كروماتوغرافيا التبادل الأيوني
4.7 كروماتوغرافيا ذات الألفة الحيوية
4.8 كروماتوغرافيا الطور العادي المائي
5 الشطف مع طور متحرك إيزوقراطي ومتدرج
6 التشغيل
7 التطبيقات
7.1 في مجال تصنيع المواد Manufacturing
7.2 في مجال الرقابة القانونية
7.3 في مجال الابحاث
7.4 في المجال الطبي
8 المراجع
9 Further reading
10 External links
شرح النظرية[عدل المصدر]
يتم ادخال المادة المراد تحليلها في تيار الطور المتحرك. سرعة تحرك المادة المنحلة داخل العمود تتحدد بكم الروابط الفيزيائية أو الكيميائية بينها وبين الطور (الساكن أو الثابت). كمية المادة المنحلة المنحبسة تعتمد على تركيب المادة وتركيب الطور الثابت والطور الناقل أو المتحرك. الوقت الذي تستغرقه المادة المنحبسة داخل العمود لكي تصل للطرف الآخر للعمود وتظهر على الكاشف يسمي وقت الاحتباس أو الاحتفاظ.
إن أجهزة الـ HPLC متوفرة بسهولة لأنها تستخدم في مجالات متعددة منها مجال التقنية الحيوية والتقنية الطبية السريرية والتحاليل الصيدلانية. إضافة إلى استخدامها في الكيمياء ومستحضرات التجميل وفي في مجال الطاقة والبيئة والصناعات الغذائية. كما أن توافر أجهزة بأسعار مقبولة وذات كفاءة متطورة وموثوقة قد جعل أجهزة الـHPLC هي الطريقة المفضلة في التحاليل الصيدلانية وذلك بدءً من إنشاء تركيب الدواء أو فصل مكوناته أو ضبط جودته. لقد تطور استخدام الـHPLC بشكل كبير خلال العقود الماضية ففي الستينات تم وضع الأسس والمبادئ النظرية لهذه التقنية، وأدى التطور في مواد تعبئة عمود الاستشراب (أعمدة الكروماتوغرافيا) في السبعينات إلى تطور الاستشراب بالطور العكوس. وفي الثمانينات أدى التطور في الحواسيب والأتمتة والبرمجيات إلى سهولة استخدام الـ HPLC . وفي التسعينات طورت أعمدة الاستشراب الميكرونية (الصغيرة) وأعمدة الاستشراب المتخصصة لاستعمال محدد، والكواشف Detector المتنوعة، بالإضافة إمكانات الحصول على البيانات المتكاملة وتخزينها واسترجاعها، مما أدى إلى الزيادة الكبيرة في فعالية وسرعة أجهزة الـ HPLC.
التطور التاريخي لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة HPLC[عدل المصدر]
قبل أن يستخدم العلماء والخبراء في الكيمياء التحليلية تقنيات الكروماتوغرافية السائلة القياسية، كانت أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة غير فعالة إلى حد كبير بسبب معدل تدفق المذيبات التي تعتمد على الجاذبية. وكانت تستغرق عمليات الفصل الكروماتوغرافي ساعات عديدة، وأحيانًا أيامًا حتى تكتمل.[5] كانت كروماتوغرافيا الغازية (Gas chromatography (GC في ذلك الوقت أقوى من الكروماتوغرافيا السائلة (liquid chromatography (LC، ومع ذلك، كان يُعتقد أن فصل الطور الغازي وتحليل البوليمرات الحيوية القطبية ذات الوزن الجزيئي العالي أمر مستحيل. كانت كروماتوغرافيا الغازية GC غير فعالة بالنسبة للعديد من علماء الكيمياء الحيوية بسبب عدم الاستقرار الحراري للمواد المذابة المراد تحليلها.[6] نتيجة لذلك، تم افتراض طرق بديلة والتي أدت مع الوقت إلى تطوير تقانة HPLC.
بعد العمل الأساسي الذي قام به Martin و Synge في عام 1941 ، تنبأ Cal Giddings و Josef Huber وآخرون في الستينيات من القرن التاسع العشر أنه يمكن تشغيل LC في وضع عالي الكفاءة عن طريق تقليل أقطار حبيبات التعبئة (الحشوة) إلى حد كبير أقل مما كان في حالة الكروماتوغرافيا السائلة LC النموذجية (وحالة الكروماتوغرافيا الغازية GC) التي تستخدم حبيبات بأقطار تصل لحوالي 150 ميكرومتر وأيضاً باستخدام ضغوط خارجية لزيادة سرعة الطور المتحرك.[5] وخضعت هذه التنبؤات لتجارب ودراسات مكثفة لفترة امتدت من سنوات الستينيات إلى السبعينيات. وبدأت الأبحاث التطويرية المبكرة في تحسين حبيبات حشوة أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة LC، وكان اختراع حبيبات من نوع Zipax، وهو جسيم مسامي سطحيًا، واعدًا لتقنية HPLC.[7]
جلبت أعوام السبعينيات العديد من التطورات في الأجهزة والبرمجيات المتعلقة بتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي. بدأ الباحثون في استخدام المضخات والحاقن لعمل تصميم أولي لنظام تقانة HPLC.[8] كانت مضخات تضخيم الغاز مثالية Gas amplifier pumps لأنها تعمل بضغط ثابت ولا تتطلب سدادات مانعة للتسرب leak-free seals أو صمامات فحص check valves لتدفق ثابت وكميات جيدة. [6] تم وضع معالم الأجهزة في قسم البوليمرات الصناعية Dupont IPD (Industrial Polymers Division) مثل جهاز التدرج ذي الحجم المنخفض الذي يتم استخدامه بالإضافة إلى استبدال الحاقن الحاجز septum injector بصمام الحقن الحلقي loop injection valve.[6]
بينما كانت التطورات مهمة على مستوى الأجهزة، فإن تاريخ تقانة HPLC يتعلق في المقام الأول بتاريخ وتطور تكنولوجيا الحبيبات أو الجسيمات particle technology.[6] بعد إدخال حبيبات ذات الطبقة المسامية porous layer particles، كان هناك اتجاه ثابت لتقليل حجم تلك الجسيمات لتحسين الكفاءة.[6] ولكن مع تقليل حجم الجسيمات، نشأت مشاكل جديدة. نشأت المشاكل العملية من فرق الضغط المفرط اللازم لدفع السائل المتحرك عبر العمود وأيضاُ صعوبة تحضير حشوة منتظمة التراص والتعبئة من المواد الحبيبية الصغيرة للغاية.[9] في كل مرة يتم تقليل حجم الجسيمات بشكل كبير، يجب أن تحدث جولة أخرى من تطوير الأدوات والأجهزة للتعامل مع فرق الضغط الناشء بين طرفي العمود.[6]
مفاهيم وتعاريف أساسية، ونظرية الكروماتوغرافيا[عدل المصدر]
الطور المتحرك (mobile phase): لفصل مكونات مزيج ما، ندخل السائل المراد فصل مكوناته في تدفق متتابع، وهذا ما يسمى بالطور المتحرك (mobile phase).
الطور الثابت أو الساكن (stationary phase)
وتترك الحلالة ( المادة المنحلة) لتعبر خلال طبقة عمود الاستشراب الحاوي على مواد ( جزيئات ) أقطارها صغيرة جداً مما يمنحها سطح تماس كبير، وهذا ما ندعوه بالطور الثابت stationary phase.
الماد المذابة أو الحلالة (الذوائب solutes)
وطالما تعبر جزيئات الحلالة عمود الاستشراب محمولة في الطور المتحرك فإنه يتم تأثر Interaction مستمر بين جزيئات الحلالة (أو الذوائب solutes) وبين الطور الثابت وكذلك أيضاً مع الطور المتحرك، وينتج عن هذا توازن ديناميكي dynamic equilibrium.
كما يؤدي اختلاف عمليات التوازن هذه إلى فصل مكونات هذا المزيج.
(الإمرار) المتماثل isocratic elution أو الشطف بالطور المتحرك ذي التركيب الثابت
وعندما تتم عملية فصل مواد المزيج مع المحافظة على التركيب الثابت لمكونات الطور المتحرك، فإننا ندعو هذه العملية بالشطف (الإمرار) المتماثل isocratic elution.
الشطف المتدرج gradient elution فهو التغير المستمر لتركيب الطور المتحرك كنسبة نوع أو أكثر من المذيبات في الطور المتحرك كتابع للزمن.
كاشف detector
عندما تخرج جزيئات الحلالة من مناطق الطور المتحرك فإنها تمر عبر كاشف detector أو سلسلة من الكواشف (المتحريات). وتستجيب إشارات الكاشف كدالة على تركيز الحليلة (المادة المذابة) في قطفات الطور المتحرك التي تخرج من العمود مع الزمن.
برامج تحليل بيانات data processors
ترسل هذه الإشارات إلى برامج تحليل بيانات data processors والذي يرسم الخطوط البيانية plot كدالة مع الزمن.
المخطط الاستشرابي chromatogram
ويدعى المخطط الذي يظهر هذه الإشارات بالمخطط الاستشرابي chromatogram، وتدعى مناطق المكونات لكل مركب بالقمم الاستشرابية chromatographic peaks . وتتميز هذه القمم بالمعايير (المتثابتات) parameters التالية : العرض، المساحة، ارتفاع القمة، ومدى التذييل tailing، وزمن العبور (الاحتفاظ) retention time. ويدعى الجهاز الذي يقوم بهذ العمل جهاز مخطط الاستشراب (مخطاط الاستشرابي) chromatograph.
المحقن injector
في الـ HPLC تدخل الجزيئات الذائبة ضمن سيل الطور المتحرك. ويمر هذا السيل عبر مدخل inlet وينبثق عبر مخرج outlet العمود.
المضخة عالية الضغط pump
وبما أن أبعاد الأجزاء صغيرة جداً (حوالي 10 ميكرون أو أقل) والعمود مملوء بشكل كامل فإنه لا بد من دفع حركة الطور المتحرك باستخدام مضخات عالية الضغط.
وإن الجزيئات الذائبة فقط هي التي تنتقل عبر الطور المتحرك. والجزيئات التي تتفاعل مع سطح العمود سيحدث لها عرقلة impeded بالخروج، والعصبة الناشئة عنها سيحدث لها لفظ متأخر عن لفظ العصبة التي تتثبت جزيئاتها بشكل أضعف. إن النزوح النسبي للذائبة يعتمد على خواصها الحركية والترموديناميكية.
وتختلف المضخات في سعة الضغط، ولكن يتم قياس أدائها على أساس قدرتها على إنتاج معدل تدفق حجمي ثابت وقابل للتكرار. قد يصل الضغط إلى 60 ميجا باسكال (6000 رطل/ بوصة 2)، أو حوالي 600 ضغط جوي. تم تحسين أنظمة HPLC الحديثة للعمل في ضغوط أعلى بكثير، وبالتالي فهي قادرة على استخدام أحجام جزيئات أصغر بكثير في الأعمدة (<2 ميكرومتر). يمكن أن تعمل أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء هذه أو UHPLCs بسرعة تصل إلى 120 ميجا باسكال (17405 رطل/بوصة 2) ، أو حوالي 1200 الغلاف الجوي المصطلح "UHPLCs" هو علامة تجارية لشركة Waters Corporation
الكواشف[عدل المصدر]
تنقسم أجهزة الكشف عن HPLC إلى فئتين رئيسيتين: عالمية أو انتقائية. تقيس أجهزة الكشف العالمية عادةً خاصية الكتلة (على سبيل المثال، معامل الانكسار) عن طريق قياس اختلاف الخاصية المادية بين الطور المتحرك والطور المتحرك باستخدام المذاب بينما تقيس الكاشفات الانتقائية خاصية المذاب (على سبيل المثال، امتصاص الأشعة فوق البنفسجية) عن طريق الاستجابة ببساطة إلى الخصائص الفيزيائية أو الكيميائية للمذاب. [18] يستخدم HPLC بشكل شائع كاشف امتصاص UV-Vis ، ومع ذلك، يمكن استخدام مجموعة واسعة من أجهزة الكشف عن اللوني. كاشف عالمي يكمل الكشف عن امتصاص الأشعة فوق البنفسجية المرئية هو كاشف الأيروسول المشحون (CAD). يشتمل نوع من الكاشفات المستخدمة بشكل شائع على كاشفات معامل الانكسار، والتي توفر قراءات عن طريق قياس التغيرات في معامل الانكسار للشاطف أثناء تحركه عبر خلية التدفق. في حالات معينة، من الممكن استخدام أجهزة كشف متعددة، على سبيل المثال LCMS يجمع عادةً بين UV-Vis مع مطياف الكتلة.
العوامل المؤثرة على كفاءة الفصل[عدل المصدر]
إن مدى وكفاءة الفصل بين قمتي لفظ متقاربتين يعبَّر عنها بعامل الاحتباس أو عامل السعة (retention (or capacity) factor (k’) ، وعامل الاصطفاء selectivity factor ، و عدد الطبقات النظرية N. إن عامل السعة هو قياس زمن التصاق جزيئات الذائبة بأجزاء العمود مقارنة مع زمن التصاقها بالطور المتحرك. لذلك كلما كبرت قيمة K’ كلما زاد التثبت على أجزاء العمود.[10]
أنواع الكروماتوغرافيا السائلة[عدل المصدر]
كروماتوغرافيا التقسيم Partition chromatography[عدل المصدر]
HILIC Partition Technique Useful Range
كانت كروماتوغرافيا التقسيم (التشارك أو التوزع) Partition chromatography أحد الأنواع الأولى للكروماتوغرافيا التي طورها الكيميائيون.[11] تم تطبيق مبدأ معامل التقسيم partition coefficient في كروماتوغرافيا الورق وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة والطور الغازي وتطبيقات فصل سائل ــ سائل. حصل Archer John Porter Martin و Richard Laurence Millington Synge على جائزة نوبل في الكيمياء لعام 1952 لتطويرهما لهذه التقنية، والتي كانت تستخدم لفصل الأحماض الأمينية.[12] يستخدم كروماتوغرافيا التقسيم مذيبًا محتفظًا به، على السطح أو داخل حبيبات أو ألياف مصفوفة داعمة صلبة "خاملة" كما هو الحال مع كروماتوغرافيا الورق؛ أو يستفيد من بعض تأثيرات الكولومبية (الكهربائية الساكنة) و/ أو الهيدروجين مع الطور الثابت. تنقسم مكونات العينة بين الطور الثابت السائل والطور المتحرك eluent. تمامًا كما هو الحال في كروماتوغرافيا التفاعل المحبة للماء (HILIC ؛ تقنية فرعية داخل HPLC)، تفصل هذه الطريقة مكونات المزيج المراد تحليله بناءً على الاختلافات في قطبيتها. غالبًا ما يستخدم HILIC طورًا ثابتًا قطبيًا مرتبطًا وطورًا متحركًا مصنوعًا بشكل أساسي من الأسيتونيتريل مع الماء كمكون قوي. تم استخدام قسم HPLC تاريخيًا على دعامات السيليكا أو الألومينا غير المربوطة unbonded silica. يعمل كل منها بشكل فعال لفصل مكونات العينة المراد تحليلها عن طريق الاختلافات القطبية النسبية. تتميز الأطوار المرتبطة بـ HILIC بميزة فصل المواد المذابة الحمضية والقاعدية والمحايدة في مسار كروماتوغرافي واحد.[13]
تنتشر المواد المنحلة القطبية polar analytes في طبقة مائية ثابتة مرتبطة بالطور القطبي الثابت، وبالتالي يتم الاحتفاظ بها. كلما زادت قوة التفاعلات بين المواد المنحلة القطبية والطور القطبي الثابت (بالنسبة إلى الطور المتحرك)، زاد وقت الشطف elution time. تعتمد قوة التأثير أو التفاعل على طبيعة جزء المجموعات الوظيفية من البنية الجزيئية للمواد المنحلة، مع مجموعات أكثر استقطابًا (على سبيل المثال، هيدروكسيل-) ومجموعات قادرة على الارتباط الهيدروجيني الذي يؤدي إلى مزيد من الاحتفاظ. يمكن أن تزيد التاثيرات الكولومبية (الكهروستاتيكية) أيضًا من الاحتفاظ. سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، بينما تميل إضافة المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى زيادة أوقات الاستبقاء.
كروماتوغرافيا الطور العادي[عدل المصدر]
كان كروماتوغرافيا الطور الطبيعي أحد الأنواع الأولى من HPLC التي طورها الكيميائيون. تُعرف هذه الطريقة أيضًا باسم HPLC من النوع العادي (NP-HPLC) ، حيث تفصل هذه الطريقة المواد المنحلة المراد فصلها بناءً على تقاربها مع سطح قطبي ثابت مثل السيليكا، ومن ثم فهي تعتمد على قدرة التحليل على الانخراط في التأثيرات القطبية (مثل الترابط الهيدروجيني أو ثنائي القطب) مع السطح الماص. يستخدم NP-HPLC طورًا متحركًا غير قطبي وغير مائي (على سبيل المثال، الكلوروفورم)، ويعمل بشكل فعال لفصل المواد المنحلة القابلة للذوبان بسهولة في المذيبات غير القطبية. يرتبط التحليل بالطورالثابت القطبي ويتم الاحتفاظ بها. تزداد قوة الامتزاز مع زيادة قطبية المواد المنحلة. لا تعتمد قوة التأثير فقط على المجموعات الوظيفية الموجودة في بنية جزيء المواد المنحلة، بل تعتمد أيضًا على العوامل الاستراتجية. يسمح تأثير العائق الفراغي على قوة التأثير لهذه الطريقة بحل أيزومرات بنيوية (منفصلة).
سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، في حين تميل المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى إحداث شطف أبطأ (زيادة أوقات الاحتفاظ). تميل المذيبات القطبية للغاية مثل آثار الماء في الطور المتحرك إلى الامتصاص إلى السطح الصلب للطور الثابت مكونًا طبقة ثابتة (مائية) والتي تلعب دورًا نشطًا في الاحتفاظ. هذا السلوك غريب إلى حد ما بالنسبة لكروماتوغرافيا الطور الطبيعي لأنه محكوم بشكل حصري تقريبًا بآلية امتزاز (على سبيل المثال، تتفاعل المواد المنحلة مع سطح صلب بدلاً من الطبقة المذابة ليجند متصل بالسطح الماص؛ انظر أيضًا HPLC ذو المرحلة العكسية أدناه). لا يزال كروماتوغرافيا الامتزاز مستخدمة على نطاق واسع لفصل الأيزومرات الهيكلية في كل من تنسيقات كروماتوغرافيا العمود والطبقة الرقيقة على دعامات السيليكا أو الألومينا المنشط (المجفف).
فشلت أنواع الكروماتوغرافية التقسيمية و NP-HPLC في السبعينيات مع تطوير كروماتوغرافيا HPLC ذات الأطوار العكسية بسبب ضعف استنساخ نتائج أوقات الاحتفاظ بسبب وجود طبقة مذيبات عضوية مائية أو بروتونية على سطح السيليكا أو وسط كروماتوغراف الألومينا . تتغير هذه الطبقة مع أي تغييرات في تكوين الطور المتحرك (على سبيل المثال، مستوى الرطوبة) مما يتسبب في أوقات استبقاء الانجراف.
في الآونة الأخيرة، أصبح الفصل الكروماتوغرافي شائعًا مرة أخرى مع تطور مراحل الارتباط الهيليك "Hilic" التي تُظهر تحسين استنساخ نتائج، ونتيجة لفهم أفضل لنطاق فائدة هذه التقنية.
كروماتوغرافيا الإزاحة[عدل المصدر]
المبدأ الأساسي لكروماتوغرافيا الإزاحة displacement chromatography هو: إن الجزيء ذو الألفة العالية لركازة الكروماتوغرافيا (المزيح displacer) سوف يتنافس بفعالية على مواقع الربط، وبالتالي يزيح جميع الجزيئات ذات الألفة الأقل.[14] هناك اختلافات واضحة بين كروماتوغرافيا الإزاحة وكروماتوغرافيا الشطف elution chromatography. في وضع كروماتوغرافيا الشطف، تظهر المواد عادةً من عمود في قمم غاوسية ضيقة Gaussian peaks. مطلوب فصل واسع للقمم، مفضل عن خط الأساس baseline، من أجل تحقيق أقصى تنقية. تعتمد السرعة التي ينتقل بها أي مكون من خليط إلى أسفل العمود في وضع كروماتوغرافيا الشطف على العديد من العوامل. ولكن لكي تنتقل مادتان بسرعات مختلفة، وبالتالي يتم حلهما، يجب أن تكون هناك اختلافات جوهرية في بعض التفاعلات بين الجزيئات الحيوية وركازة الكروماتوغرافيا. يتم ضبط متحولات التشغيل لتعظيم تأثير هذا الاختلاف. في كثير من الحالات، لا يمكن تحقيق الفصل الأساسي للقمم إلا من خلال شطف التدرج وتحميل العمود المنخفض. وبالتالي، هناك عيبان في كروماتوغرافيا وضع الشطف، خاصة في المقياس التحضيري، وهما التعقيد التشغيلي، بسبب ضخ المذيبات المتدرج، والإنتاجية المنخفضة، بسبب التحميل المنخفض للعمود. يتميز كروماتوغرافيا الإزاحة بمزايا تفوق كروماتوغرافيا الشطف حيث يتم حل المكونات في مناطق متتالية من المواد النقية بدلاً من "القمم". نظرًا لأن العملية تستفيد من عدم خطية متساوي الحرارة، يمكن فصل تغذية عمود أكبر على عمود معين مع استرداد المكونات النقية بتركيز أعلى بكثير.
كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي[عدل المصدر]
A chromatogram of complex mixture (perfume water) obtained by reversed phase HPLC
لتفاصيل أكثر عن هذا الموضوع، انظر Reversed-phase chromatography.
تحتوي HPLC ذات الطور العكسي (RP-HPLC) على طور ثابت غير قطبي وطور متحرك مائي قطبي معتدل. إحدى الأطور الثابتة الشائعة هي السيليكا التي تم تعديل سطحها باستخدام المادة RMe2SiCl، حيث R عبارة عن مجموعة ألكيل مستقيمة مثل C18H37 أو C8H17. مع مثل هذه الأطوار الثابتة، يكون وقت الاستبقاء أطول للجزيئات الأقل قطبية، بينما يتم التخلص من الجزيئات القطبية بسهولة أكبر (في وقت مبكر من التحليل). يمكن للمحلل المخبري زيادة أوقات الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من الماء إلى الطور المتحرك؛ مما يجعل ألفة المادة التحليلية الكارهة للماء للطورالثابت الكاره للماء أقوى مقارنة بالطور المتحرك الأكثر مقاومة للماء الآن. وبالمثل، يمكن للمحلل المخبري تقليل وقت الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من المذيبات العضوية إلى الطور المتحرك eluent. يتم استخدام RP-HPLC بشكل شائع لدرجة أنه غالبًا ما يشار إليه بشكل غير صحيح باسم "HPLC" دون مزيد من المواصفات. تستخدم صناعة الأدوية بانتظام نوع الكروماتوغرافيا RP-HPLC لضمان جودة الأدوية قبل إطلاقها.
يعمل RP-HPLC على مبدأ التفاعلات الكارهة للماء، والتي تنشأ من التناظر العالي في بنية الماء ثنائي القطب ويلعب الدور الأكثر أهمية في جميع العمليات في علوم الحياة. يسمح RP-HPLC بقياس هذه القوى التفاعلية. يتناسب ارتباط المادة المنحلة بالطور الثابت مع مساحة سطح التلامس حول الجزء غير القطبي من جزيء المادة المنحلة عند الارتباط بالرابط في الطورالثابت. هذا التأثير المضاد للذوبان تهيمن عليه قوة الماء من أجل "تقليل التجويف" حول المادة المنحلة وسلسلة C18 مقابل مجمع كليهما. الطاقة المنبعثة في هذه العملية تتناسب طرديًا مع التوتر السطحي للشاطف (الماء: 7.3 × 10 /6 جول / سم 2 ، الميثانول: 2.2 × 10 /6 جول / سم 2) والسطح الكارهة للماء من الحليلة والمرتبطة (المعقد) ligand على التوالي . يمكن تقليل الاحتباس عن طريق إضافة مذيب أقل قطبية (ميثانول، أسيتونتريل) إلى الطور المتحرك لتقليل التوتر السطحي للماء. يستخدم شطف التدرج هذا التأثير عن طريق التقليل التلقائي للقطبية والتوتر السطحي للطور المتحرك المائية أثناء التحليل.
تلعب الخصائص الهيكلية للجزيء المادة المنحلة دورًا مهمًا في خصائص الاحتفاظ به. بشكل عام، يتم الاحتفاظ بالتحليل ذي المساحة السطحية الكارهة للماء (C-H ، C-C ، والروابط الذرية غير القطبية عمومًا، مثل S-S وغيرها) لفترة أطول لأنه لا يتفاعل مع بنية الماء. من ناحية أخرى، فإن المواد المنحلة ذات المساحة السطحية القطبية الأعلى (التي يمنحها وجود المجموعات القطبية، مثل -OH أو -NH2 أو COO− أو -NH3 + في هيكلها) أقل احتفاظًا بها حيث يتم دمجها بشكل أفضل في الماء. تخضع مثل هذه التفاعلات لتأثيرات فراغية في تلك الجزيئات الكبيرة جدًا قد يكون لها وصول محدود فقط إلى مسام الطورالثابت، حيث تحدث التفاعلات مع الروابط السطحية (سلاسل الألكيل). عادة ما ينتج عن عائق السطح هذا احتباس أقل.
يزيد وقت الاستبقاء مع مساحة السطح الكارهة للماء (غير القطبية). تتخلص مركبات السلاسل المتفرعة بسرعة أكبر من الأيزومرات الخطية المقابلة لها بسبب تناقص مساحة السطح الإجمالية. وبالمثل يتم التخلص من المركبات العضوية ذات الروابط C-C المفردة في وقت لاحق من تلك التي تحتوي على رابطة ثلاثية C = C أو C-C ، حيث أن الرابطة المزدوجة أو الثلاثية أقصر من رابطة C-C مفردة.
بصرف النظر عن التوتر السطحي للطور المتحرك (القوة التنظيمية في هيكل eluent) ، يمكن أن تؤثر معدلات الطور المتحرك الأخرى على الاحتفاظ بالمادة المنحلة. على سبيل المثال، تؤدي إضافة الأملاح غير العضوية إلى زيادة خطية معتدلة في التوتر السطحي للمحاليل المائية (حوالي 1.5 × 10 J7 جول/سم2 لكل مول لكلوريد الصوديوم، 2.5 × 10−7 جول/ سم2 لكل مول لـ (NH4) 2SO4)، ولأن إنتروبية entropy سطح التماس بين المذيبات والمادة المنحلة يتم التحكم فيها عن طريق التوتر السطحي، فإن إضافة الأملاح تميل إلى زيادة وقت الاستبقاء. تُستخدم هذه التقنية للفصل الطفيف واستعادة البروتينات وحماية نشاطها البيولوجي في تحليل البروتين (كروماتوغرافيا التفاعل الكارهة للماء، HIC).
عامل مهم آخر هو درجة الحموضة في الطور المتحرك لأنه يمكن أن يغير الطبيعة الكارهة للماء للمادة المنحلة. لهذا السبب، تستخدم معظم الطرق عامل تخزين مؤقت، مثل فوسفات الصوديوم، للتحكم في درجة الحموضة. تخدم المحاليل الموقية Buffers أغراضًا متعددة: التحكم في الأس الهيدروجيني، وتحييد الشحنة على سطح السيليكا في الطورالثابت والعمل كعوامل إقران أيون لتحييد شحنة التحليل. يضاف فورمات الأمونيوم بشكل شائع في قياس الطيف الكتلي لتحسين الكشف عن بعض المواد المنحلة عن طريق تكوين مقاربات الأمونيوم التحليلية. غالبًا ما يضاف حمض عضوي متطاير مثل حمض الأسيتيك، أو حمض الفورميك الأكثر شيوعًا، إلى الطور المتحرك إذا تم استخدام مقياس الطيف الكتلي لتحليل العمود المائل. يستخدم حمض Trifluoroacetic بشكل غير منتظم في تطبيقات قياس الطيف الكتلي نظرًا لثباته في الكاشف ونظام توصيل المذيبات، ولكن يمكن أن يكون فعالًا في تحسين الشبكية ntion من المواد المنحلة مثل الأحماض الكربوكسيلية في التطبيقات التي تستخدم أجهزة الكشف الأخرى، حيث أنه حمض عضوي قوي إلى حد ما. تختلف تأثيرات الأحماض والمحاليل الموقية باختلاف التطبيق ولكنها تعمل بشكل عام على تحسين دقة الكروماتوغرافيا.
من الصعب جدًا إتلاف أعمدة الطور المعكوس مقارنةً بأعمدة السيليكا العادية ؛ ومع ذلك، تتكون العديد من أعمدة الطور المعكوس من جزيئات السيليكا المشتقة من الألكيل ولا يجب استخدامها مع القواعد المائية لأنها ستدمر جسيم السيليكا الأساسي. يمكن استخدامها مع حمض مائي، ولكن لا ينبغي أن يتعرض العمود للحمض لفترة طويلة، حيث يمكن أن يؤدي ذلك إلى تآكل الأجزاء المعدنية لجهاز HPLC. يجب شطف أعمدة RP-HPLC بمذيب نظيف بعد استخدامها لإزالة الأحماض المتبقية أو المحاليل، وتخزينها في تركيبة مناسبة من المذيب. يجب أن يظل المحتوى المعدني لأعمدة HPLC منخفضًا إذا كان يجب الاحتفاظ بأفضل قدرة ممكنة لفصل المواد. الاختبار الجيد للمحتوى المعدني للعمود هو حقن عينة عبارة عن خليط من 2,2'- و 4,4'-bipyridine. نظرًا لأن 2,2'-bipy يمكن أن يخلب المعدن، فسيتم تشويه شكل ذروة 2,2'-bipy (ذيول) عندما توجد أيونات معدنية على سطح السيليكا. [بحاجة لمصدر] ..
كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي[عدل المصدر]
كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC)، والمعروفة أيضًا باسم كروماتوغرافيا نفاذية الهلام أو كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي، تفصل الجسيمات على أساس الحجم الجزيئي (في الواقع بواسطة نصف قطر ستوكس للجسيم). وهو بشكل عام كروماتوغرافيا منخفضة الدقة، وبالتالي فإنه غالبًا ما يكون محجوزة لخطوة "التصفية" النهائية للتنقية. كما أنها مفيدة في تحديد البنية الثلاثية والبنية الرباعية للبروتينات المنقاة. تستخدم SEC بشكل أساسي لتحليل الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات أو البوليمرات. تعمل SEC عن طريق محاصرة هذه الجزيئات الأصغر في مسام الجسيم. تمر الجزيئات الأكبر ببساطة عبر المسام لأنها أكبر من أن تدخل المسام. وبالتالي، فإن الجزيئات الأكبر تتدفق عبر العمود بشكل أسرع من الجزيئات الأصغر، أي أنه كلما كان الجزيء أصغر، زاد وقت الاحتفاظ.
تستخدم هذه التقنية على نطاق واسع لتحديد الوزن الجزيئي للسكريات. SEC هي التقنية الرسمية (التي اقترحها دستور الأدوية الأوروبي) لمقارنة الوزن الجزيئي لمختلف الهيبارين منخفض الوزن الجزيئي المتاح تجاريًا.
كروماتوغرافيا التبادل الأيوني[عدل المصدر]
في كروماتوغرافيا التبادل الأيوني (IC)، يعتمد الاستبقاء على التجاذب بين الأيونات المنحلة والمواقع المشحونة المرتبطة بالطور الثابت. يتم استبعاد الأيونات المذابة بنفس الشحنة مثل المواقع المشحونة بالعمود من الربط، بينما يتم الاحتفاظ بالأيونات المذابة للشحنة المعاكسة للمواقع المشحونة للطور الثابت في العمود. يمكن التخلص من الأيونات المذابة التي يتم الاحتفاظ بها في الطور الثابت من العمود عن طريق تغيير شروط المذيب في الطور المتحرك الشاطف (على سبيل المثال، زيادة التأثير الأيوني لنظام المذيب عن طريق زيادة تركيز الملح في المحلول، وزيادة درجة حرارة العمود، وتغيير الرقم الهيدروجيني للمذيب، إلخ).
تشمل أنواع المبادلات الأيونية راتنجات البوليسترين، ومبادلات أيونات السليلوز والديكستران (المواد الهلامية)، والزجاج ذي المسام الخاضعة للتحكم أو السيليكا المسامية. تسمح راتنجات البوليسترين بالربط المتقاطع الذي يزيد من ثبات السلسلة. يقلل الارتباط المتقاطع العالي من الانحراف، مما يزيد من وقت الموازنة ويحسن الانتقائية في النهاية. تمتلك مبادلات أيونات السليلوز والديكستران أحجام مسام أكبر وكثافة منخفضة الشحن مما يجعلها مناسبة لفصل البروتين.
بشكل عام، تفضل المبادلات الأيونية ربط الأيونات ذات الشحنة الأعلى ونصف القطر الأصغر.
زيادة تركيز الأيون المضاد (فيما يتعلق بالمجموعات الوظيفية في الراتنجات) يقلل من وقت الاستبقاء. يقلل انخفاض الرقم الهيدروجيني من وقت الاستبقاء في تبادل الكاتيونات بينما تقلل الزيادة في الرقم الهيدروجيني من وقت الاحتفاظ في تبادل الأنيون. عن طريق خفض الرقم الهيدروجيني للمذيب في عمود التبادل الكاتيوني، على سبيل المثال، يتوفر المزيد من أيونات الهيدروجين للتنافس على المواضع على الطور الثابت الأنيوني، وبالتالي سيتم شطف الكاتيونات ضعيفة الارتباط.
يستخدم هذا النمط من الكروماتوغرافيا على نطاق واسع في التطبيقات التالية: تنقية المياه، والتركيز المسبق للمكونات النزرة، وكروماتوغرافيا التبادل الترابطي، وكروماتوغرافيا التبادل الأيوني للبروتينات، وكروماتوغرافيا التبادل الأنيوني عالي الحموضة للكربوهيدرات والسكريات قليلة الحموضة، وغيرها.
كروماتوغرافيا ذات الألفة الحيوية[عدل المصدر]
لتفاصيل أكثر عن هذا الموضوع، انظر Affinity chromatography.
تعتمد هذه العملية الكروماتوغرافية على خاصية المواد النشطة بيولوجيا لتشكيل معقدات complexes مستقرة ومحددة وقابلة للعكس. يتضمن تكوين هذه المعقدات مشاركة القوى الجزيئية المشتركة مثل تأثيرات قوى فاندر فالس Van der Waals والتأثير الكهروستاتيكي وتأثير ثنائي القطب والألفة الهيدروفيلية ورابطة الهيدروجين. يتم تكوين رابطة بيولوجية فعالة ونوعية من خلال اجتماع متضافر للعديد من هذه القوى في مواقع النشطة التفاعلية في الطور الكروماتوغرافي.
كروماتوغرافيا الطور العادي المائي[عدل المصدر]
كروماتوغرافيا الطور العادي المائي وبالإنكليزية Aqueous normal-phase chromatography (ANP) هي تقنية كروماتوغرافية تشمل منطقة الطور المتحرك (خيارات تركيب الطور المتحرك) بين كروماتوغرافيا الطور العكسي reversed-phase chromatography (RP) __التي فيها الطور المتحرك هو أكثر قطبية من الطور الثابت__ وكروماتوغرافيا الطور الطبيعي العضوي organic normal phase chromatography (ONP) التي يتصف الطور المتحرك بقطبية أقل من الطور الثابت. تُستخدم هذه التقنية لتحقيق انتقائية فريدة للمركبات المحبة للماء (هيدروفيلية)، مما يُظهر قدرة الشطف للطور العادي باستخدام مذيبات عضوية عكسية الطور. [بحاجة لمصدر]
الشطف مع طور متحرك إيزوقراطي ومتدرج[عدل المصدر]
بالإنكليزية (Isocratic and gradient elution)
في وحدة أبحاث استخدام المنتجات الطبيعية ARS في أكسفورد, يقوم عالم مساعد (يمين) باستخراج أصباغ نباتية سيتم تحليلها بواسطة اختصاصي فيزيولوجيا النبات (يسار) باستخدام نظام HPLC.
يُطلق على الفصل الذي يظل فيه تكوين الطور المتحرك ثابتًا طوال الإجراء اسمًا إيزوقراطيًا Isocratic(يعني التكوين الثابت). (على سبيل المثال، ستبقى النسبة المئوية للميثانول طوال الإجراء ثابتة ، أي 10٪) الكلمة صاغها سابا هورفاث Csaba Horvath الذي كان أحد رواد تقانة HPLC. [بحاجة لمصدر]،
لا يجب أن يظل تكوين الطور المتحرك ثابتًا. يوصف الفصل الذي يتغير فيه تكوين الطور المتحرك أثناء عملية الفصل بأنه شطف متدرج. أحد الأمثلة هو التدرج اللوني الذي يبدأ عند 10٪ ميثانول وينتهي عند 90٪ ميثانول بعد 20 دقيقة. ويطلق على عنصري الطور المتحرك اسم "A" و "B" ؛ A هو المذيب "الضعيف" الذي يسمح للمذاب (المادة المنحلة) بالتخلص ببطء فقط، بينما B هو المذيب "القوي" الذي يزيل المواد المذابة بسرعة من العمود. في كروماتوغرافيا الطور العكسي، غالبًا ما يكون المذيب A عبارة عن ماء أو محلول مائي ، بينما B عبارة عن مذيب عضوي قابل للامتزاج بالماء، مثل الأسيتونتريل أو الميثانول أو رباعي هيدرو الفوران THF أو الأيزوبروبانول.
في الشطف المتساوي ، يزداد عرض الذروة مع زمن الاستبقاء خطيًا وفقًا لمعادلة N ، عدد الصفائح النظرية. هذا يؤدي إلى عيب أن القمم المتأخرة تصبح مسطحة وواسعة للغاية. قد يمنعها شكلها وعرضها من التعرف عليها على أنها قمم.
يقلل شطف التدرج من الاحتفاظ بمكونات التصفية اللاحقة بحيث تتم إزالتها بشكل أسرع، مما يعطي قممًا أضيق (وأطول) لمعظم المكونات. يعمل هذا أيضًا على تحسين شكل الذروة للقمم الذيلية ، حيث يدفع التركيز المتزايد للشاطف العضوي جزء الذيل من الذروة إلى الأمام. يؤدي هذا أيضًا إلى زيادة ارتفاع الذروة (تبدو القمة "أكثر حدة")، وهو أمر مهم في تحليل التتبع. قد يتضمن برنامج التدرج زيادات مفاجئة "خطوة" في النسبة المئوية للمكون العضوي ، أو منحدرات مختلفة في أوقات مختلفة - كل ذلك وفقًا للرغبة في الفصل الأمثل في أقل وقت ممكن.
A schematic of gradient elution. . تؤدي زيادة قوة الطور المتحرك بشكل متسلسل إلى إزالة المواد المنحلة التي لها قوة تفاعل متفاوتة مع الطور الثابت.
في الشطف المتساوي ، لا تتغير الانتقائية إذا تغيرت أبعاد العمود (الطول والقطر الداخلي) - أي يتم فصل القمم بنفس الترتيب. في شطف التدرج ، قد يتغير ترتيب الشطف مع تغير الأبعاد أو معدل التدفق. [بحاجة لمصدر]
تنشأ القوة الدافعة في كروماتوغرافيا الطور المعكوس في الترتيب العالي لهيكل الماء. يتمثل دور المكون العضوي في الطور المتحرك في تقليل هذا الترتيب المرتفع وبالتالي تقليل قوة التثبيط للمكون المائي.
التشغيل[عدل المصدر]
يتم إدخال خليط العينة المراد فصله وتحليله، في حجم صغير منفصل (عادةً ميكروليتر)، في تيار الطور المتحرك المتسرب عبر العمود. تتحرك مكونات العينة عبر العمود بسرعات مختلفة، وهي تابعة لتأثيرات فيزيائية محددة مع مادة الامتصاص (وتسمى أيضًا الطور الساكن أو الثابت stationary phase). تعتمد سرعة كل مكون على طبيعته الكيميائية وعلى طبيعة الكيميائية للطور الساكن في العمود وعلى تركيب الطور المتحرك. يُطلق على الوقت الذي يتم فيه فصل مادة تحليلية معينة elution (يخرج من العمود) اسم وقت الاحتفاظ أو الاستبقاء retention time. وقت الاستبقاء المقاس في ظل ظروف معينة هو خاصية تعريف لتحليل معين.
تتوفر العديد من أنواع الأعمدة المختلفة، المليئة بمواد ممتزة متفاوتة في حجم الجسيمات وطبيعة سطحها ("كيمياء السطح"). يتطلب استخدام مواد التعبئة ذات الأحجام الصغيرة للجسيمات استخدام ضغط تشغيلي أعلى (الضغط الخلفي backpressure) وعادة ما يحسن دقة الفصل الكروماتوغرافية (درجة الفصل للذروة بين مكونات المتتالية الخارجة من العمود). قد تكون الجسيمات الممتزة كارهة للماء hydrophobic أو قطبية بطبيعتها.
تشتمل الأطوار المتحركة الشائعة الاستخدام على أي مزيج قابل للامتزاج من الماء مع المذيبات العضوية المختلفة (الأكثر شيوعًا هي الأسيتونيتريل والميثانول). تستخدم بعض تقنيات HPLC أطوار متحركة خالية من الماء (انظر كروماتوغرافيا الطور الطبيعي normal-phase chromatography أدناه). قد يحتوي المكون المائي للطور المتحرك على أحماض (مثل حمض الفورميك أو الفوسفوريك أو ثلاثي فلورو أسيتيك) أو أملاح للمساعدة في فصل مكونات العينة. قد يظل تركيب الطور المتحرك ثابتًا (وضع الشطف المتساوي isocratic elution mode) أو متغيراً (وضع الشطف المتدرج gradient elution mode) أثناء التحليل الكروماتوغرافي. عادة ما يكون الشطف المتساوي فعالًا في فصل مكونات العينة التي تختلف اختلافًا كبيرًا في ألفتها الكيميائية مع الطور الثابت. في الشطف المتدرج، يتنوع تركيب الطور المتحرك نموذجيًا من قوة الشطف المنخفضة إلى عالية. تنعكس قوة الشطف للطور المتحرك من خلال أزمنة احتفاظ ذات قوة تصفية عالية والتي تنتج شطفًا سريعًا (أزمنة احتفاظ قصيرة). نموذجياً يمكن أن يبدأ برنامج التدرج للطور المتحرك في كروماتوغرافيا الطور المعكوس عند 5٪ أسيتونيتريل (في الماء أو محلول موقي مائي aqueous buffer) ويرتفع خطيًا إلى 95٪ أسيتونيتريل خلال 5-25 دقيقة. قد تكون فترات ثبات تركيب الطور المتحرك جزءًا من برنامج التدرج التشغيلي. على سبيل المثال، يمكن الاحتفاظ بتركيب الطور المتحرك ثابتًا عند تركيب 5٪ أسيتونيتريل لمدة 1-3 دقائق، ثم يجري تغيير خطي يصل إلى 95٪ أسيتونيتريل. جامع القطفات الدوراني. The system is being used to isolate a fraction containing Complex I from E. coli plasma membranes. About 50 litres of bacteria were needed to isolate this amount.[15]
يعتمد التركيب المختار للطور المتحرك (ويسمى أيضًا الشاطف eluent) على شدة التفاعلات بين مكونات العينة المختلفة (analytes) والطور الساكن (على سبيل المثال، التفاعلات الكارهة للماء في كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور المعكوس). اعتمادًا على الفتهم الكيميائية مع الطورين المتحرك والساكن تتوزع partition مكونات العينة المختلفة بين الاثنين أثناء عملية الفصل التي تحدث في العمود. تشبه عملية التوزيع partition تلك التي تحدث أثناء الاستخلاص السائل ـ السائل liquid–liquid extraction ولكنها مستمرة وليست تتم عبر مراحل تشغيلية step-wise. في هذا المثال، باستخدام التدرج اللوني للماء/الأسيتونتريل، ستتم إزالة المزيد من المكونات الكارهة للماء (الهيدروفوبية) من الطور الساكن (أي تخرج من العمود) في وقت متأخر، بمجرد أن يصبح الطور المتحرك أكثر تركيزًا في الأسيتونيتريل (أي في الطور المتحرك ذي قوة التصفية العالية من جراء تزايد هيدروفوبية المحلول الشاطف).
يعتمد اختيار مكونات الطور المتحرك والإضافات (مثل الأملاح أو الأحماض) وشروط التدرج على طبيعة العمود ومكونات العينة. غالبًا ما يتم إجراء سلسلة من العمليات التجريبية مع العينة من أجل إيجاد طريقة HPLC التي تعطي فصلًا مناسبًا.
التطبيقات[عدل المصدر]
في مجال تصنيع المواد Manufacturing[عدل المصدر]
هناك تطبيقات عديدة لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي HPLC في العلوم المختبرية والسريرية. إنها تقنية شائعة تستخدم في تطوير المنتجات الصيدلانية، لأنها طريقة يمكن الاعتماد عليها للحصول على نقاوة المنتج وضمان جودته.[16] بينما يمكن أن تنتج تقانة HPLC منتجات عالية الجودة (نقية)، إلا أنه ليس دائمًا الطريقة الأساسية المستخدمة في إنتاج مواد الأدوية السائبة bulk drug materials.[17] وفقًا لدستور الأدوية الأوروبي European pharmacopoeia، يتم استخدام HPLC في 15.5٪ فقط من التركيبات (الاصطناعات) syntheses.[17] According to the European pharmacopoeia, HPLC is used in only 15.5% of syntheses.[18] ومع ذلك، فإنه يلعب دورًا في 44٪ من التركيبات في دستور الأدوية في الولايات المتحدة United States pharmacopoeia.[19] قد يكون هذا بسبب الاختلافات في القيود النقدية والزمنية، حيث يمكن أن تكون تقانة HPLC على نطاق التطبيق الأوسع تقنية باهظة الثمن. إن الزيادة في الخصوصية والدقة والدقة التي تحدث مع تقانة HPLC تقابل للأسف زيادة في التكلفة.
في مجال الرقابة القانونية[عدل المصدر]
تُستخدم هذه التقنية أيضًا للكشف عن العقاقير غير المشروعة في البول. الطريقة الأكثر شيوعًا للكشف عن المخدرات هي المقايسة المناعية مقايسة مناعية.[20] هذه الطريقة أكثر ملاءمة. ومع ذلك، تأتي الراحة على حساب خصوصية وتغطية مجموعة واسعة من الأدوية. نظرًا لأن HPLC هي طريقة لتحديد (وربما زيادة) النقاء، فإن استخدام HPLC وحده في تقييم تراكيز الأدوية غير كافٍ إلى حد ما. مع هذا، غالبًا ما يتم إجراء تحليل HPLC في هذا السياق جنبًا إلى جنب مع قياس الطيف الكتلي mass spectrometry (MS).[21] استخدام الكروماتوغرافيا السائلة بدلاً من كروماتوغرافيا الغاز بالتزامن مع مطيافية الكتلة MS يتحايل على ضرورة الاشتقاق باستخدام عوامل الأسيتيل أو الألكلة، والتي يمكن أن تكون خطوة إضافية مرهقة.[22] تم استخدام هذه التقنية للكشف عن مجموعة متنوعة من العوامل مثل المنشطات doping agents، ومستقلبات الأدوية ، وتقارن الجلوكورونيد glucuronide conjugates، والأمفيتامينات amphetamines، والمواد الأفيونية opioids، والكوكايين cocaine، و BZDs ، والكيتامين ketamine، و LSD ، والقنب cocaine، والمبيدات الحشرية pesticides.[23][24] يؤدي أداء HPLC جنبًا إلى جنب مع قياس الطيف الكتلي إلى تقليل الحاجة المطلقة إلى إجراء المعايرة standardization في عمليات التشغيل التجريبية لـ HPLC.
في مجال الابحاث[عدل المصدر]
يمكن إجراء فحوصات مماثلة لأغراض البحث، والكشف عن تراكيز مواد السريرية المحتملة مثل الأدوية المضادة للفطريات anti-fungal والربو asthma drugs.[25] من الواضح أن هذه التقنية مفيدة في مراقبة الأنواع المتعددة في العينات التي تم جمعها أيضًا، ولكنها تتطلب استخدام محاليل عيارية قياسية محلول قياسي عند البحث عن معلومات حول هوية الأنواع. يتم استخدامه كطريقة لتأكيد نتائج التفاعلات التركيبية synthesis reactions ، حيث أن النقاوة purity ضرورية في هذا النوع من البحث. ومع ذلك، لا يزال قياس الطيف الكتلي mass spectrometry هو الطريقة الأكثر موثوقية لتحديد الأنواع.
في المجال الطبي[عدل المصدر]
يمكن أن يشمل الاستخدام الطبي لتقانة HPLC تحليل الأدوية drug analysis، ولكنه يقع بشكل وثيق ضمن فئة تحليل المغذيات nutrient analysis. في حين أن البول هو الوسيلة الأكثر شيوعًا لتحليل تركيزات الأدوية، فإن مصل الدم blood serum هو العينة التي يتم جمعها لمعظم التحليلات الطبية باستخدام HPLC.[26] تم اختبار طرق أخرى للكشف عن الجزيئات المفيدة للدراسات السريرية ضد HPLC ، وهي المقايسات المناعية immunoassays. في أحد الأمثلة على ذلك، تمت مقارنة فحوصات ربط البروتين التنافسية competitive protein binding assays (CPBA) و تقانة HPLC من أجل الحساسية في الكشف عن فيتامين د. مفيد في تشخيص نقص فيتامين د لدى الأطفال ، وقد وجد أن حساسية ونوعية هذا CPBA وصلت فقط إلى 40٪ و 60٪، على التوالي، من قدرة تحاليل HPLC.[27] على الرغم من كونها أداة باهظة الثمن، إلا أن دقة تقانة HPLC لا مثيل لها تقريبًا.
المراجع[عدل المصدر]
^ "ترجمة و معنى high performance liquid chromatography بالعربي في قاموس المعاني. قاموس عربي انجليزي مصطلحات صفحة 1". مؤرشف من الأصل في 7 ديسمبر 2020. اطلع عليه بتاريخ 07 ديسمبر 2020. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة).mw-parser-output cite.citation{font-style:inherit}.mw-parser-output .citation q{quotes:"\"""\"""'""'"}.mw-parser-output .id-lock-free a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-free a{background-image:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/6/65/Lock-green.svg/9px-Lock-green.svg.png");background-image:linear-gradient(transparent,transparent),url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/65/Lock-green.svg");background-repeat:no-repeat;background-size:9px;background-position:right .1em center}.mw-parser-output .id-lock-limited a,.mw-parser-output .id-lock-registration a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-limited a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-registration a{background-image:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/d/d6/Lock-gray-alt-2.svg/9px-Lock-gray-alt-2.svg.png");background-image:linear-gradient(transparent,transparent),url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/d6/Lock-gray-alt-2.svg");background-repeat:no-repeat;background-size:9px;background-position:right .1em center}.mw-parser-output .id-lock-subscription a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-subscription a{background-image:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/aa/Lock-red-alt-2.svg/9px-Lock-red-alt-2.svg.png");background-image:linear-gradient(transparent,transparent),url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/aa/Lock-red-alt-2.svg");background-repeat:no-repeat;background-size:9px;background-position:right .1em center}.mw-parser-output .cs1-subscription,.mw-parser-output .cs1-registration{color:#555}.mw-parser-output .cs1-subscription span,.mw-parser-output .cs1-registration span{border-bottom:1px dotted;cursor:help}.mw-parser-output .cs1-ws-icon a{background-image:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4c/Wikisource-logo.svg/12px-Wikisource-logo.svg.png");background-image:linear-gradient(transparent,transparent),url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/4c/Wikisource-logo.svg");background-repeat:no-repeat;background-size:12px;background-position:right .1em center}.mw-parser-output code.cs1-code{color:inherit;background:inherit;border:inherit;padding:inherit}.mw-parser-output .cs1-hidden-error{display:none;font-size:100%}.mw-parser-output .cs1-visible-error{font-size:100%}.mw-parser-output .cs1-maint{display:none;color:#33aa33;margin-left:0.3em}.mw-parser-output .cs1-subscription,.mw-parser-output .cs1-registration,.mw-parser-output .cs1-format{font-size:95%}.mw-parser-output .cs1-kern-left,.mw-parser-output .cs1-kern-wl-left{padding-left:0.2em}.mw-parser-output .cs1-kern-right,.mw-parser-output .cs1-kern-wl-right{padding-right:0.2em}.mw-parser-output .citation .mw-selflink{font-weight:inherit}
^ "القاموس العلمي المُصوّر الجديد". مؤرشف من الأصل في 8 ديسمبر 2017. اطلع عليه بتاريخ 24 مارس 2017. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ High-performance liquid chromatography (HPLC)[1],ترجمة و معنى high performance liquid chromatography في قاموس عربي انجليزي. نسخة محفوظة 6 ديسمبر 2020 على موقع واي باك مشين.
^ Gerber, F.; Krummen, M.; Potgeter, H.; Roth, A.; Siffrin, C.; Spoendlin, C. (2004). "Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice". Journal of Chromatography A. 1036 (2): 127–133. doi:10.1016/j.chroma.2004.02.056. PMID 15146913. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
↑ أ ب Karger, Barry L. (1997). "HPLC: Early and Recent Perspectives". Journal of Chemical Education. 74 (1): 45. Bibcode:1997JChEd..74...45K. doi:10.1021/ed074p45. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
↑ أ ب ت ث ج ح Henry, Richard A. (1 February 2009) "The Early Days of HPLC at Dupont". Chromatography Online. Avanstar Communications Inc. نسخة محفوظة 1 أغسطس 2020 على موقع واي باك مشين.
^ Iler, R.K. (1979) The Chemistry of Silica. John Wiley & Sons. New York.
^ Karger, B. L.; Berry, L. V. (1971). "Rapid liquid-chromatographic separation of steroids on columns heavily loaded with stationary phase". Clin. Chem. 17 (8): 757–64. PMID 4254537. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Giddings, J. Calvin (1965) Dynamics of Chromatography, Part I. Principles and Theory. Marcel Dekker, Inc., New York. p. 281.
^ (PDF) https://web.archive.org/web/20120617061134/http://www.cem.msu.edu/~cem333/Week16.pdf. مؤرشف من الأصل (PDF) في 17 يونيو 2012. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة); مفقود أو فارغ |title= (مساعدة)
^ Ettre, C. (2001). "Milestones in Chromatography: The Birth of Partition Chromatography" (PDF). LCGC. 19 (5): 506–512. مؤرشف من الأصل (PDF) في 6 أكتوبر 2016. اطلع عليه بتاريخ 26 فبراير 2016. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Martin, A J P; Synge, R L M (1941). "Separation of the higher monoamino-acids by counter-current liquid-liquid extraction: the amino-acid composition of wool". Biochemical Journal. 35 (1–2): 91–121. doi:10.1042/bj0350091. PMC 1265473. PMID 16747393. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Lindsay, S.; Kealey, D. (1987). High performance liquid chromatography. Wiley. OSTI 7013902. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة) from review Hung, L. B.; Parcher, J. F.; Shores, J. C.; Ward, E. H. (1988). "Theoretical and experimental foundation for surface-coverage programming in gas–solid chromatography with an adsorbable carrier gas". J. Am. Chem. Soc. 110 (11): 1090–1096. doi:10.1021/ac00162a003. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Displacement Chromatography. Sacheminc.com. Retrieved 2011-06-07. نسخة محفوظة September 15, 2008, على موقع واي باك مشين.
^ Morgan, David J. (2003-11-19). "Fraction collector (post on Flickr)". Flickr. مؤرشف من الأصل في 7 ديسمبر 2020. اطلع عليه بتاريخ 28 أكتوبر 2015. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Gerber, Frederic (May 2004). "Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3 μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice". Journal of Chromatography. 1036 (2): 127–33. doi:10.1016/j.chroma.2004.02.056. PMID 15146913. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
↑ أ ب Siddiqui, Masoom Raza; AlOthman, Zeid A.; Rahman, Nafisur (2013). "Analytical techniques in pharmaceutical analysis: A review". Arabian Journal of Chemistry. 10: S1409–S1421. doi:10.1016/j.arabjc.2013.04.016. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ The European Pharmacopoeia, 2002. fourth ed., Council of Europe, Strasbourg.
^ United States Pharmacopoeia, 2004. 27th ed. The USP Convention Inc., Rockville, MD.
^ Pesce, Amadeo; Rosenthal, Murray; West, Robert; West, Cameron; Crews, Bridgit; Mikel, Charles; Almazan, Perla; Latyshev, Sergey (2010-06-01). "An evaluation of the diagnostic accuracy of liquid chromatography-tandem mass spectrometry versus immunoassay drug testing in pain patients". Pain Physician. 13 (3): 273–281. PMID 20495592. مؤرشف من الأصل في 8 أغسطس 2020. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Tsai, I.-Lin; Weng, Te-I.; Tseng, Yufeng J.; Tan, Happy Kuy-Lok; Sun, Hsiao-Ju; Kuo, Ching-Hua (2013-12-01). "Screening and confirmation of 62 drugs of abuse and metabolites in urine by ultra-high-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry". Journal of Analytical Toxicology. 37 (9): 642–651. doi:10.1093/jat/bkt083. PMID 24084874. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Weinmann, W.; Renz, M.; Vogt, S.; Pollak, S. (2000-01-01). "Automated solid-phase extraction and two-step derivatisation for simultaneous analysis of basic illicit drugs in serum by GC/MS". International Journal of Legal Medicine. 113 (4): 229–235. doi:10.1007/s004149900098. PMID 10929239. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Kolmonen, Marjo; Leinonen, Antti; Pelander, Anna; Ojanperä, Ilkka (2007-02-28). "A general screening method for doping agents in human urine by solid phase extraction and liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry". Analytica Chimica Acta. 585 (1): 94–102. doi:10.1016/j.aca.2006.12.028. PMID 17386652. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Pelander, Anna; Ojanperä, Ilkka; Laks, Suvi; Rasanen, Ilpo; Vuori, Erkki (2003-11-01). "Toxicological screening with formula-based metabolite identification by liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry". Analytical Chemistry. 75 (21): 5710–5718. doi:10.1021/ac030162o. PMID 14588010. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Nobilis, Milan; Pour, Milan; Senel, Petr; Pavlík, Jan; Kunes, Jirí; Voprsalová, Marie; Kolárová, Lenka; Holcapek, Michal (2007-06-15). "Metabolic profiling of a potential antifungal drug, 3-(4-bromophenyl)-5-acetoxymethyl-2,5-dihydrofuran-2-one, in mouse urine using high-performance liquid chromatography with UV photodiode-array and mass spectrometric detection". Journal of Chromatography B. 853 (1–2): 10–19. doi:10.1016/j.jchromb.2007.02.045. PMID 17400036. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Sundström, Mira; Pelander, Anna; Angerer, Verena; Hutter, Melanie; Kneisel, Stefan; Ojanperä, Ilkka (2013-10-01). "A high-sensitivity ultra-high performance liquid chromatography/high-resolution time-of-flight mass spectrometry (UHPLC-HR-TOFMS) method for screening synthetic cannabinoids and other drugs of abuse in urine". Analytical and Bioanalytical Chemistry. 405 (26): 8463–8474. doi:10.1007/s00216-013-7272-8. PMID 23954996. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
^ Zahedi Rad, Maliheh; Neyestani, Tirang Reza; Nikooyeh, Bahareh; Shariatzadeh, Nastaran; Kalayi, Ali; Khalaji, Niloufar; Gharavi, Azam (2015-01-01). "Competitive Protein-binding assay-based Enzyme-immunoassay Method, Compared to High-pressure Liquid Chromatography, Has a Very Lower Diagnostic Value to Detect Vitamin D Deficiency in 9–12 Years Children". International Journal of Preventive Medicine. 6: 67. doi:10.4103/2008-7802.161069. PMC 4542329. PMID 26330983. الوسيط |CitationClass= تم تجاهله (مساعدة)
عنتاستشرابالتقنيات
استشراب انجذابي
استشراب عمود
استشراب ازاحة
استشراب كهربي
استشراب غازي
استشراب السائل رفيع الإنجاز
استشراب كهربي شعري
استشراب التبادل الأيوني
كروماتوغرافيا حركية كهربية Micellar
استشراب الطور العادي
كروموتوغرافيا الورقة
استشراب طور عكسي
استشراب حجم مستبعد
الاستشراب بالطبقة الرقيقة
استشراب ثنائي الابعاد
الطرق المتصلة
استشراب غازي-مطياف كتلة
استشراب سائل عالي الأداء-مطياف كتلة
انحلال حراري–استشراب غازي–مطياف كتلة
النظريات
ثابت التوزيع
معادلة فروندليتش
Kovats retention index
عامل الاحتباس
معادلة فان ديميتر
المنشورات البارزة
الكروماتوغرافيا الطبية الحيوية
مجلة العلوم الكروماتوغرافية
مجلة الكروماتوغرافيا A
مجلة الكروماتوغرافيا B
مجلة الكروماتوجرافيا السائلة وصلاتها التكنولوجية
مجلة علوم الفصل
الكيمياء التحليلية
عنتالكيمياء التحليليةأدواتمطياف الامتصاص الذري ·  مطيافية رامان ذات السطح المحسن  ·  مطياف إصدار اللهب ·  كروماتوغرافيا غازية · كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة  ·  استشراب السائل رفيع الإنجاز ·  مطيافية الأشعة تحت الحمراء  ·  مطيافية الكتلة ·  جهاز تحديد نقطة الانصهار  ·  مجهر  ·  مطياف  ·  قياس الضوء الطيفيتقنياتمسعرية  ·  قياسيات كيميائية  ·  كروماتوغرافيا ·  كيمياء كهربائية ·  تحليل وزنيأخذ العيناتالتشكيل الهرمي والتربيع  ·  تمديد  ·  ذوبان  ·  ترشيح ·  تقنيع ·  سحق وتنعيم ·  تحضير العينة ·  عمليات الفصل ·  تحت-الاستعيانمنشورات بارزة
المحلل
أناليتيكا كيميكا اكتا
الكيمياءالتحليلية والتحليلية الحيوية
الكيمياء التحليلية
التحليلية الكيمياء الحيوية (مجلة) نشرات تحليلية فى الكيمياء الحيوية
كيمياء
بوابة الكيمياء
بوابة الكيمياء الحيوية
في كومنز صور وملفات عن: استشراب السائل رفيع الإنجاز
التصنيفات الطبية
MeSH ID: D002851 
Further reading[عدل المصدر]
L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. W. Dolan, Introduction to Modern Liquid Chromatography, John Wiley & Sons, New York, 2009.
M.W. Dong, Modern HPLC for practicing scientists. Wiley, 2006.
L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. L. Glajch, Practical HPLC Method Development, John Wiley & Sons, New York, 1997.
S. Ahuja and H. T. Rasmussen (ed), HPLC Method Development for Pharmaceuticals, Academic Press, 2007.
S. Ahuja and M.W. Dong (ed), Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Elsevier/Academic Press, 2005.
Y. V. Kazakevich and R. LoBrutto (ed.), HPLC for Pharmaceutical Scientists, Wiley, 2007.
U. D. Neue, HPLC Columns: Theory, Technology, and Practice, Wiley-VCH, New York, 1997.
M. C. McMaster, HPLC, a practical user's guide, Wiley, 2007.
External links[عدل المصدر]
في كومنز صور وملفات عن: استشراب السائل رفيع الإنجاز
HPLC Chromatography Principle, Application [Basic Note] – 2020. at Rxlalit.com
Liquid Chromatography على مشروع الدليل المفتوح
الكيمياء التحليلية
الكيمياء العضوية' |
مصدر HTML المعروض للمراجعة الجديدة (new_html) | '<div class="mw-parser-output"><div class="إعلام محتوى" style=""><div class="صورة" style="display:inline"><img alt="Other languages square icon.svg" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/9/9c/Other_languages_square_icon.svg/25px-Other_languages_square_icon.svg.png" decoding="async" width="25" height="25" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/9/9c/Other_languages_square_icon.svg/38px-Other_languages_square_icon.svg.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/9/9c/Other_languages_square_icon.svg/50px-Other_languages_square_icon.svg.png 2x" data-file-width="110" data-file-height="110" /></div> <div style="display:inline"><span class="script-arabic">لا يزال النص الموجود في هذه الصفحة في مرحلة الترجمة إلى <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%84%D8%BA%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%B9%D8%B1%D8%A8%D9%8A%D8%A9" title="اللغة العربية">العربية</a>. إذا كنت تعرف اللغة المستعملة، لا تتردد في <a class="external text" href="https://ar.wikipedia.org/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit">الترجمة</a>. <small>(ديسمبر 2020)</small></span></div></div>
<div class="thumb tleft"><div class="thumbinner" style="width:222px;"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Hplc.JPG" class="image"><img alt="" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/e/e2/Hplc.JPG/220px-Hplc.JPG" decoding="async" width="220" height="165" class="thumbimage" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/e/e2/Hplc.JPG/330px-Hplc.JPG 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/e/e2/Hplc.JPG/440px-Hplc.JPG 2x" data-file-width="2272" data-file-height="1704" /></a> <div class="thumbcaption"><div class="magnify"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Hplc.JPG" class="internal" title="كبّر"></a></div>جهاز HPLC</div></div></div>
<div class="thumb tleft"><div class="thumbinner" style="width:402px;"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Preparative_HPLC.svg" class="image"><img alt="" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/6/63/Preparative_HPLC.svg/400px-Preparative_HPLC.svg.png" decoding="async" width="400" height="213" class="thumbimage" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/6/63/Preparative_HPLC.svg/600px-Preparative_HPLC.svg.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/6/63/Preparative_HPLC.svg/800px-Preparative_HPLC.svg.png 2x" data-file-width="1280" data-file-height="680" /></a> <div class="thumbcaption"><div class="magnify"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Preparative_HPLC.svg" class="internal" title="كبّر"></a></div>جهاز (HPLC) تحضيري الكروموتغرافيا ذات الأداء العالي</div></div></div>
<p><b>الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء</b> <sup id="cite_ref-1" class="reference"><a href="#cite_note-1">[1]</a></sup> أو <b>الاستشراب السائلي عالي الأداء</b><sup id="cite_ref-2" class="reference"><a href="#cite_note-2">[2]</a></sup> (<a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%84%D8%BA%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D9%84%D9%8A%D8%B2%D9%8A%D8%A9" title="اللغة الإنجليزية">بالإنجليزية</a>: <span class="mw-content-ltr" lang="en">High performance liquid chromatography</span>)
</p><p>الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء <sup id="cite_ref-3" class="reference"><a href="#cite_note-3">[3]</a></sup>، التي كان يُشار إليها سابقًا بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الضغط high-pressure liquid chromatography، هي تقنية في <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="الكيمياء التحليلية">الكيمياء التحليلية</a> تُستخدم لفصل وتحديد وقياس كل مكون في خليط. يعتمد على المضخات لتمرير مذيب سائل مضغوط يحتوي على خليط العينة من خلال عمود مملوء بمادة ممتصة صلبة. يتفاعل كل مكون في العينة بشكل مختلف قليلاً مع المادة الممتزة، مما يتسبب في معدلات تدفق مختلفة للمكونات المختلفة ويؤدي إلى فصل المكونات أثناء تدفقها خارج العمود.
يجري استخدام تقنية HPLC في الصناعة (على سبيل المثال، أثناء عملية إنتاج المنتجات الصيدلانية والبيولوجية)، وفي مجال القانوني والرياضي والجنائي (على سبيل المثال، الكشف عن عقاقير تحسين الأداء في البول)، في مجال البحثي (على سبيل المثال، فصل مكونات عينة بيولوجية معقدة، أو مواد كيميائية اصطناعية مماثلة similar synthetic chemicals من بعضهما البعض) ، وفي المجال الطبي (على سبيل المثال، الكشف عن مستويات فيتامين د vitamin D في مصل الدم).<sup id="cite_ref-4" class="reference"><a href="#cite_note-4">[4]</a></sup>
يمكن وصف الكروماتوغرافيا بأنها عملية انتقال مادة mass transfer process تتضمن الامتزاز adsorption. تعتمد تقانة HPLC على المضخات لتمرير سائل مضغوط وخليط عينة عبر عمود مملوء بمادة ماصة adsorbent، مما يؤدي إلى فصل مكونات العينة. المكون النشط للعمود، الممتزات adsorbent، عادة ما يكون عبارة عن مادة حبيبية مصنوعة من جزيئات صلبة (مثل السيليكا والبوليمرات وما إلى ذلك)، بحجم 2-50 ميكرومتر. يتم فصل مكونات مزيج العينة عن بعضها بسبب اختلاف درجات تفاعلها مع جزيئات الامتصاص. السائل المضغوط عادة عبارة عن خليط من المذيبات (على سبيل المثال، ماء، أسيتونيتريل و/أو ميثانول) ويشار إليه باسم "الطور المتحرك" mobile phase. يلعب تكوينه ودرجة حرارته دورًا رئيسيًا في عملية الفصل من خلال التأثير على التفاعلات التي تحدث بين مكونات العينة والمواد الماصة. هذه التفاعلات فيزيائية بطبيعتها، مثل تأثيرات <a href="/wiki/%D9%87%D9%8A%D8%AF%D8%B1%D9%88%D9%81%D9%88%D8%A8%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="هيدروفوبية">هيدروفوبية</a> hydrophobic (تبعثري)(dispersive)، تأثيرات كهربائية <a href="/wiki/%D8%AB%D9%86%D8%A7%D8%A6%D9%8A_%D8%A7%D9%84%D9%82%D8%B7%D8%A8" class="mw-redirect" title="ثنائي القطب">ثنائي القطب</a> dipole–dipole <a href="/wiki/%D9%8A%D9%88%D9%86%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="يونية">وأيونية</a> ionic، وغالبًا ما كون مزيجًا من تلك التأثيرات.
تتميز تقانة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) عن الكروماتوغرافيا السائلة التقليدية ("أو ذات الضغط المنخفض") traditional ("low pressure") liquid chromatography بأن ضغوط التشغيل للطور المتحرك عالية بكثير (50-350 بار)، بينما تعتمد كروماتوغرافيا السائل التقليدية (أو العادية) عادةً على قوة الجاذبية لتمرير الطور المتحرك عبر العمود. نظرًا لصغر كمية العينة المفصولة في تقانة HPLC التحليلية، فإن أبعاد العمود النموذجية تكون بحيث قيم نصف قطر العمود تقع ضمن المجال (2.1-4.6 ملم) وقيم طول العمود تنحصر ضمن المجال (30-250 ملم). كما أن أعمدة HPLC تملأ بحشوات من حبيبات أو دقائق ماصة صغيرة adsorbent particles (2-50 ميكرومتر في متوسط حجم الدقائق أو الحبيبات الدقيقة). هذه الأبعاد والخصائص الآنفة الذكر تعطي تقانة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) قدرة فصل resolving power فائقة (القدرة على التمييز بين مكونات المزيج المراد فصله) عند فصل الخلائط، مما يجعلها تقنية كروماتوغرافية شائعة الاستخدام وأكثر من باقي أنواع الكروماتوغرافيا السائلة الأخرى.
يشتمل المخطط التخطيطي لجهاز الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء HPLC بشكل نموذجي على مزيل الغازات degasser، وآخذ العينات (أو الحاقن) sampler، والمضخات pumps، والكاشف detector. يقوم جهاز حاقن العينات بإدخال خليط العينة إلى تيار الطور المتحرك الذي يحمله إلى العمود. وتقوم المضخات بتأمين التدفق المطلوب وتركيب الطور المتحرك عبر العمود من مزج مكونات الطور المتحرك (المحلّات). ويولد الكاشف إشارة تتناسب مع كمية كل مكون العينة الذي يخرج تباعاً من العمود، وبالتالي يسمح الكاشف <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84_%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%85%D9%8A" class="mw-redirect" title="التحليل الكمي">بالتحليل الكمي</a> quantitative analysis لمكونات العينة. يتحكم المعالج الميكرويّ الرقمي digital microprocessor وبرنامج المستخدم في جهاز HPLC ويوفّران تحليل البيانات.
يمكن لبعض نماذج <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%B6%D8%AE%D8%A7%D8%AA" class="mw-redirect" title="المضخات">المضخات</a> الميكانيكية في جهاز HPLC أن تقوم بمزج عدة <a href="/wiki/%D9%85%D8%B0%D9%8A%D8%A8%D8%A7%D8%AA" class="mw-redirect" title="مذيبات">مذيبات</a> (محلّات) معًا بنسب تتغير بمرور الوقت، مما يؤدي إلى توليد تدرج في تركيب في الطور المتحرك (وإلى تدرج في قطبية الطور المتحرك). هناك العديد من أجهزة الكشف شائعة الاستخدام، مثل كاشف الأشعة فوق البنفسجية/المرئية <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D8%B4%D8%B9%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%B1%D8%A6%D9%8A%D8%A9_%D9%88%D9%81%D9%88%D9%82_%D8%A7%D9%84%D8%A8%D9%86%D9%81%D8%B3%D8%AC%D9%8A%D8%A9" title="مطيافية الأشعة المرئية وفوق البنفسجية">مطيافية الأشعة المرئية وفوق البنفسجية</a>، أو كاشف مجموعة ثنائي الضوئي (<a href="/wiki/%D8%AB%D9%86%D8%A7%D8%A6%D9%8A_%D8%B6%D9%88%D8%A6%D9%8A" title="ثنائي ضوئي">ثنائي ضوئي</a> (PDA أو كاشف يعتمد على قياس <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%AA%D9%84%D8%A9" title="مطيافية الكتلة">مطيافية الكتلة</a> <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%AA%D9%84%D8%A9" title="مطيافية الكتلة">مطيافية الكتلة</a>. تحتوي معظم أجهزة HPLC أيضًا على فرن العمود column oven يسمح بضبط درجة الحرارة التي يتم عندها إجراء الفصل والتحليل.
</p>
<div id="toc" class="toc" role="navigation" aria-labelledby="mw-toc-heading"><input type="checkbox" role="button" id="toctogglecheckbox" class="toctogglecheckbox" style="display:none" /><div class="toctitle" lang="ar" dir="rtl"><h2 id="mw-toc-heading">محتويات</h2><span class="toctogglespan"><label class="toctogglelabel" for="toctogglecheckbox"></label></span></div>
<ul>
<li class="toclevel-1 tocsection-1"><a href="#شرح_النظرية"><span class="tocnumber">1</span> <span class="toctext">شرح النظرية</span></a></li>
<li class="toclevel-1 tocsection-2"><a href="#التطور_التاريخي_لتقانة_الكروماتوغرافيا_السائلة_HPLC"><span class="tocnumber">2</span> <span class="toctext">التطور التاريخي لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة HPLC</span></a></li>
<li class="toclevel-1 tocsection-3"><a href="#مفاهيم_وتعاريف_أساسية،_ونظرية_الكروماتوغرافيا"><span class="tocnumber">3</span> <span class="toctext">مفاهيم وتعاريف أساسية، ونظرية الكروماتوغرافيا</span></a>
<ul>
<li class="toclevel-2 tocsection-4"><a href="#الكواشف"><span class="tocnumber">3.1</span> <span class="toctext">الكواشف</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-5"><a href="#العوامل_المؤثرة_على_كفاءة_الفصل"><span class="tocnumber">3.2</span> <span class="toctext">العوامل المؤثرة على كفاءة الفصل</span></a></li>
</ul>
</li>
<li class="toclevel-1 tocsection-6"><a href="#أنواع_الكروماتوغرافيا_السائلة"><span class="tocnumber">4</span> <span class="toctext">أنواع الكروماتوغرافيا السائلة</span></a>
<ul>
<li class="toclevel-2 tocsection-7"><a href="#كروماتوغرافيا_التقسيم_Partition_chromatography"><span class="tocnumber">4.1</span> <span class="toctext">كروماتوغرافيا التقسيم Partition chromatography</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-8"><a href="#كروماتوغرافيا_الطور_العادي"><span class="tocnumber">4.2</span> <span class="toctext">كروماتوغرافيا الطور العادي</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-9"><a href="#كروماتوغرافيا_الإزاحة"><span class="tocnumber">4.3</span> <span class="toctext">كروماتوغرافيا الإزاحة</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-10"><a href="#كروماتوغرافيا_السائلة_ذات_الطور_العكسي"><span class="tocnumber">4.4</span> <span class="toctext">كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-11"><a href="#كروماتوغرافيا_الاستبعاد_الحجمي"><span class="tocnumber">4.5</span> <span class="toctext">كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-12"><a href="#كروماتوغرافيا_التبادل_الأيوني"><span class="tocnumber">4.6</span> <span class="toctext">كروماتوغرافيا التبادل الأيوني</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-13"><a href="#كروماتوغرافيا_ذات_الألفة_الحيوية"><span class="tocnumber">4.7</span> <span class="toctext">كروماتوغرافيا ذات الألفة الحيوية</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-14"><a href="#كروماتوغرافيا_الطور_العادي_المائي"><span class="tocnumber">4.8</span> <span class="toctext">كروماتوغرافيا الطور العادي المائي</span></a></li>
</ul>
</li>
<li class="toclevel-1 tocsection-15"><a href="#الشطف_مع_طور_متحرك_إيزوقراطي_ومتدرج"><span class="tocnumber">5</span> <span class="toctext">الشطف مع طور متحرك إيزوقراطي ومتدرج</span></a></li>
<li class="toclevel-1 tocsection-16"><a href="#التشغيل"><span class="tocnumber">6</span> <span class="toctext">التشغيل</span></a></li>
<li class="toclevel-1 tocsection-17"><a href="#التطبيقات"><span class="tocnumber">7</span> <span class="toctext">التطبيقات</span></a>
<ul>
<li class="toclevel-2 tocsection-18"><a href="#في_مجال_تصنيع_المواد_Manufacturing"><span class="tocnumber">7.1</span> <span class="toctext">في مجال تصنيع المواد Manufacturing</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-19"><a href="#في_مجال_الرقابة_القانونية"><span class="tocnumber">7.2</span> <span class="toctext">في مجال الرقابة القانونية</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-20"><a href="#في_مجال_الابحاث"><span class="tocnumber">7.3</span> <span class="toctext">في مجال الابحاث</span></a></li>
<li class="toclevel-2 tocsection-21"><a href="#في_المجال_الطبي"><span class="tocnumber">7.4</span> <span class="toctext">في المجال الطبي</span></a></li>
</ul>
</li>
<li class="toclevel-1 tocsection-22"><a href="#المراجع"><span class="tocnumber">8</span> <span class="toctext">المراجع</span></a></li>
<li class="toclevel-1 tocsection-23"><a href="#Further_reading"><span class="tocnumber">9</span> <span class="toctext">Further reading</span></a></li>
<li class="toclevel-1 tocsection-24"><a href="#External_links"><span class="tocnumber">10</span> <span class="toctext">External links</span></a></li>
</ul>
</div>
<h2><span id=".D8.B4.D8.B1.D8.AD_.D8.A7.D9.84.D9.86.D8.B8.D8.B1.D9.8A.D8.A9"></span><span class="mw-headline" id="شرح_النظرية">شرح النظرية</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=1" title="عدل القسم: شرح النظرية">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<p>يتم ادخال المادة المراد تحليلها في تيار الطور المتحرك. سرعة تحرك المادة المنحلة داخل العمود تتحدد بكم الروابط الفيزيائية أو الكيميائية بينها وبين الطور (الساكن أو الثابت). كمية المادة المنحلة المنحبسة تعتمد على تركيب المادة وتركيب الطور الثابت والطور الناقل أو المتحرك. الوقت الذي تستغرقه المادة المنحبسة داخل العمود لكي تصل للطرف الآخر للعمود وتظهر على الكاشف يسمي وقت الاحتباس أو الاحتفاظ.
</p><p>إن أجهزة الـ HPLC متوفرة بسهولة لأنها تستخدم في مجالات متعددة منها مجال التقنية الحيوية والتقنية الطبية السريرية والتحاليل الصيدلانية. إضافة إلى استخدامها في الكيمياء ومستحضرات التجميل وفي في مجال الطاقة والبيئة والصناعات الغذائية. كما أن توافر أجهزة بأسعار مقبولة وذات كفاءة متطورة وموثوقة قد جعل أجهزة الـHPLC هي الطريقة المفضلة في التحاليل الصيدلانية وذلك بدءً من إنشاء تركيب الدواء أو فصل مكوناته أو ضبط جودته. لقد تطور استخدام الـHPLC بشكل كبير خلال العقود الماضية ففي الستينات تم وضع الأسس والمبادئ النظرية لهذه التقنية، وأدى التطور في مواد تعبئة عمود الاستشراب (أعمدة الكروماتوغرافيا) في السبعينات إلى تطور الاستشراب بالطور العكوس. وفي الثمانينات أدى التطور في الحواسيب والأتمتة والبرمجيات إلى سهولة استخدام الـ HPLC . وفي التسعينات طورت أعمدة الاستشراب الميكرونية (الصغيرة) وأعمدة الاستشراب المتخصصة لاستعمال محدد، والكواشف Detector المتنوعة، بالإضافة إمكانات الحصول على البيانات المتكاملة وتخزينها واسترجاعها، مما أدى إلى الزيادة الكبيرة في فعالية وسرعة أجهزة الـ HPLC.
</p>
<h2><span id=".D8.A7.D9.84.D8.AA.D8.B7.D9.88.D8.B1_.D8.A7.D9.84.D8.AA.D8.A7.D8.B1.D9.8A.D8.AE.D9.8A_.D9.84.D8.AA.D9.82.D8.A7.D9.86.D8.A9_.D8.A7.D9.84.D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.B3.D8.A7.D8.A6.D9.84.D8.A9_HPLC"></span><span class="mw-headline" id="التطور_التاريخي_لتقانة_الكروماتوغرافيا_السائلة_HPLC">التطور التاريخي لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة HPLC</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=2" title="عدل القسم: التطور التاريخي لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة HPLC">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<p>قبل أن يستخدم العلماء والخبراء في الكيمياء التحليلية تقنيات الكروماتوغرافية السائلة القياسية، كانت أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة غير فعالة إلى حد كبير بسبب معدل تدفق المذيبات التي تعتمد على الجاذبية. وكانت تستغرق عمليات الفصل الكروماتوغرافي ساعات عديدة، وأحيانًا أيامًا حتى تكتمل.<sup id="cite_ref-Karger_5-0" class="reference"><a href="#cite_note-Karger-5">[5]</a></sup> كانت كروماتوغرافيا الغازية (Gas chromatography (GC في ذلك الوقت أقوى من الكروماتوغرافيا السائلة (liquid chromatography (LC، ومع ذلك، كان يُعتقد أن فصل الطور الغازي وتحليل <a href="/wiki/%D8%A8%D9%88%D9%84%D9%8A%D9%85%D8%B1%D8%A7%D8%AA" class="mw-redirect" title="بوليمرات">البوليمرات الحيوية</a> القطبية ذات الوزن الجزيئي العالي أمر مستحيل. كانت <a href="/wiki/%D9%83%D8%B1%D9%88%D9%85%D8%A7%D8%AA%D9%88%D8%BA%D8%B1%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A7_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%A7%D8%B2" class="mw-redirect" title="كروماتوغرافيا الغاز">كروماتوغرافيا الغازية</a> GC غير فعالة بالنسبة للعديد من علماء الكيمياء الحيوية بسبب عدم الاستقرار الحراري للمواد المذابة المراد تحليلها.<sup id="cite_ref-Henry_6-0" class="reference"><a href="#cite_note-Henry-6">[6]</a></sup> نتيجة لذلك، تم افتراض طرق بديلة والتي أدت مع الوقت إلى تطوير تقانة HPLC.
بعد العمل الأساسي الذي قام به Martin و Synge في عام 1941 ، تنبأ Cal Giddings و Josef Huber وآخرون في الستينيات من القرن التاسع العشر أنه يمكن تشغيل LC في وضع عالي الكفاءة عن طريق تقليل أقطار حبيبات التعبئة (الحشوة) إلى حد كبير أقل مما كان في حالة الكروماتوغرافيا السائلة LC النموذجية (وحالة الكروماتوغرافيا الغازية GC) التي تستخدم حبيبات بأقطار تصل لحوالي 150 ميكرومتر وأيضاً باستخدام ضغوط خارجية لزيادة سرعة الطور المتحرك.<sup id="cite_ref-Karger_5-1" class="reference"><a href="#cite_note-Karger-5">[5]</a></sup> وخضعت هذه التنبؤات لتجارب ودراسات مكثفة لفترة امتدت من سنوات الستينيات إلى السبعينيات. وبدأت الأبحاث التطويرية المبكرة في تحسين حبيبات حشوة أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة LC، وكان اختراع حبيبات من نوع Zipax، وهو جسيم مسامي سطحيًا، واعدًا لتقنية HPLC.<sup id="cite_ref-7" class="reference"><a href="#cite_note-7">[7]</a></sup>
جلبت أعوام السبعينيات العديد من التطورات في <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%A3%D8%AC%D9%87%D8%B2%D8%A9" class="mw-redirect" title="الأجهزة">الأجهزة</a> <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%A8%D8%B1%D9%85%D8%AC%D9%8A%D8%A7%D8%AA" class="mw-redirect" title="البرمجيات">والبرمجيات</a> المتعلقة بتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي. بدأ الباحثون في استخدام المضخات والحاقن لعمل تصميم أولي لنظام تقانة HPLC.<sup id="cite_ref-8" class="reference"><a href="#cite_note-8">[8]</a></sup> كانت <a href="/wiki/%D9%85%D8%B6%D8%AE%D8%A9" title="مضخة">مضخات تضخيم الغاز</a> مثالية Gas amplifier pumps لأنها تعمل بضغط ثابت ولا تتطلب سدادات مانعة للتسرب leak-free seals أو صمامات فحص check valves لتدفق ثابت وكميات جيدة. <sup id="cite_ref-Henry_6-1" class="reference"><a href="#cite_note-Henry-6">[6]</a></sup> تم وضع معالم الأجهزة في قسم البوليمرات الصناعية Dupont IPD (Industrial Polymers Division) مثل جهاز التدرج ذي الحجم المنخفض الذي يتم استخدامه بالإضافة إلى استبدال الحاقن الحاجز septum injector بصمام الحقن الحلقي loop injection valve.<sup id="cite_ref-Henry_6-2" class="reference"><a href="#cite_note-Henry-6">[6]</a></sup>
</p><p>بينما كانت التطورات مهمة على مستوى الأجهزة، فإن تاريخ تقانة HPLC يتعلق في المقام الأول بتاريخ وتطور تكنولوجيا الحبيبات أو الجسيمات <a href="/w/index.php?title=Particle_technology&action=edit&redlink=1" class="new" title="Particle technology (الصفحة غير موجودة)">particle technology</a>.<sup id="cite_ref-Henry_6-3" class="reference"><a href="#cite_note-Henry-6">[6]</a></sup> بعد إدخال حبيبات ذات الطبقة المسامية porous layer particles، كان هناك اتجاه ثابت لتقليل حجم تلك الجسيمات لتحسين الكفاءة.<sup id="cite_ref-Henry_6-4" class="reference"><a href="#cite_note-Henry-6">[6]</a></sup> ولكن مع تقليل حجم الجسيمات، نشأت مشاكل جديدة. نشأت المشاكل العملية من فرق الضغط المفرط اللازم لدفع السائل المتحرك عبر العمود وأيضاُ صعوبة تحضير حشوة منتظمة التراص والتعبئة من المواد الحبيبية الصغيرة للغاية.<sup id="cite_ref-9" class="reference"><a href="#cite_note-9">[9]</a></sup> في كل مرة يتم تقليل حجم الجسيمات بشكل كبير، يجب أن تحدث جولة أخرى من تطوير الأدوات والأجهزة للتعامل مع فرق الضغط الناشء بين طرفي العمود.<sup id="cite_ref-Henry_6-5" class="reference"><a href="#cite_note-Henry-6">[6]</a></sup>
</p>
<h2><span id=".D9.85.D9.81.D8.A7.D9.87.D9.8A.D9.85_.D9.88.D8.AA.D8.B9.D8.A7.D8.B1.D9.8A.D9.81_.D8.A3.D8.B3.D8.A7.D8.B3.D9.8A.D8.A9.D8.8C_.D9.88.D9.86.D8.B8.D8.B1.D9.8A.D8.A9_.D8.A7.D9.84.D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7"></span><span class="mw-headline" id="مفاهيم_وتعاريف_أساسية،_ونظرية_الكروماتوغرافيا">مفاهيم وتعاريف أساسية، ونظرية الكروماتوغرافيا</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=3" title="عدل القسم: مفاهيم وتعاريف أساسية، ونظرية الكروماتوغرافيا">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<p><b>الطور المتحرك (mobile phase):</b> لفصل مكونات مزيج ما، ندخل السائل المراد فصل مكوناته في تدفق متتابع، وهذا ما يسمى بالطور المتحرك (mobile phase).
</p><p><b>الطور الثابت أو الساكن (stationary phase)</b>
وتترك الحلالة ( المادة المنحلة) لتعبر خلال طبقة عمود الاستشراب الحاوي على مواد ( جزيئات ) أقطارها صغيرة جداً مما يمنحها سطح تماس كبير، وهذا ما ندعوه بالطور الثابت stationary phase.
</p><p><b>الماد المذابة أو الحلالة (الذوائب solutes)</b>
وطالما تعبر جزيئات الحلالة عمود الاستشراب محمولة في الطور المتحرك فإنه يتم تأثر Interaction مستمر بين جزيئات الحلالة (أو الذوائب solutes) وبين الطور الثابت وكذلك أيضاً مع الطور المتحرك، وينتج عن هذا توازن ديناميكي dynamic equilibrium.
كما يؤدي اختلاف عمليات التوازن هذه إلى فصل مكونات هذا المزيج.
</p><p><b>(الإمرار) المتماثل isocratic elution أو الشطف بالطور المتحرك ذي التركيب الثابت</b>
وعندما تتم عملية فصل مواد المزيج مع المحافظة على التركيب الثابت لمكونات الطور المتحرك، فإننا ندعو هذه العملية بالشطف (الإمرار) المتماثل isocratic elution.
</p><p><b>الشطف المتدرج gradient elution</b> فهو التغير المستمر لتركيب الطور المتحرك كنسبة نوع أو أكثر من المذيبات في الطور المتحرك كتابع للزمن.
</p><p><b>كاشف detector</b>
عندما تخرج جزيئات الحلالة من مناطق الطور المتحرك فإنها تمر عبر كاشف detector أو سلسلة من الكواشف (المتحريات). وتستجيب إشارات الكاشف كدالة على تركيز الحليلة (المادة المذابة) في قطفات الطور المتحرك التي تخرج من العمود مع الزمن.
</p><p><b>برامج تحليل بيانات data processors</b>
ترسل هذه الإشارات إلى برامج تحليل بيانات data processors والذي يرسم الخطوط البيانية plot كدالة مع الزمن.
</p><p><b>المخطط الاستشرابي chromatogram</b>
ويدعى المخطط الذي يظهر هذه الإشارات بالمخطط الاستشرابي chromatogram، وتدعى مناطق المكونات لكل مركب بالقمم الاستشرابية chromatographic peaks . وتتميز هذه القمم بالمعايير (المتثابتات) parameters التالية : العرض، المساحة، ارتفاع القمة، ومدى التذييل tailing، وزمن العبور (الاحتفاظ) retention time. ويدعى الجهاز الذي يقوم بهذ العمل جهاز مخطط الاستشراب (مخطاط الاستشرابي) chromatograph.
<b>المحقن injector</b>
في الـ HPLC تدخل الجزيئات الذائبة ضمن سيل الطور المتحرك. ويمر هذا السيل عبر مدخل inlet وينبثق عبر مخرج outlet العمود.
</p><p><b>المضخة عالية الضغط pump</b>
وبما أن أبعاد الأجزاء صغيرة جداً (حوالي 10 ميكرون أو أقل) والعمود مملوء بشكل كامل فإنه لا بد من دفع حركة الطور المتحرك باستخدام مضخات عالية الضغط.
وإن الجزيئات الذائبة فقط هي التي تنتقل عبر الطور المتحرك. والجزيئات التي تتفاعل مع سطح العمود سيحدث لها عرقلة impeded بالخروج، والعصبة الناشئة عنها سيحدث لها لفظ متأخر عن لفظ العصبة التي تتثبت جزيئاتها بشكل أضعف. إن النزوح النسبي للذائبة يعتمد على خواصها الحركية والترموديناميكية.
</p><p>وتختلف المضخات في سعة الضغط، ولكن يتم قياس أدائها على أساس قدرتها على إنتاج معدل تدفق حجمي ثابت وقابل للتكرار. قد يصل الضغط إلى 60 ميجا باسكال (6000 رطل/ بوصة 2)، أو حوالي 600 ضغط جوي. تم تحسين أنظمة HPLC الحديثة للعمل في ضغوط أعلى بكثير، وبالتالي فهي قادرة على استخدام أحجام جزيئات أصغر بكثير في الأعمدة (<2 ميكرومتر). يمكن أن تعمل أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء هذه أو UHPLCs بسرعة تصل إلى 120 ميجا باسكال (17405 رطل/بوصة 2) ، أو حوالي 1200 الغلاف الجوي المصطلح "UHPLCs" هو علامة تجارية لشركة Waters Corporation
</p><p><br />
</p>
<h3><span id=".D8.A7.D9.84.D9.83.D9.88.D8.A7.D8.B4.D9.81"></span><span class="mw-headline" id="الكواشف">الكواشف</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=4" title="عدل القسم: الكواشف">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>تنقسم أجهزة الكشف عن HPLC إلى فئتين رئيسيتين: عالمية أو انتقائية. تقيس أجهزة الكشف العالمية عادةً خاصية الكتلة (على سبيل المثال، معامل الانكسار) عن طريق قياس اختلاف الخاصية المادية بين الطور المتحرك والطور المتحرك باستخدام المذاب بينما تقيس الكاشفات الانتقائية خاصية المذاب (على سبيل المثال، امتصاص الأشعة فوق البنفسجية) عن طريق الاستجابة ببساطة إلى الخصائص الفيزيائية أو الكيميائية للمذاب. [18] يستخدم HPLC بشكل شائع كاشف امتصاص UV-Vis ، ومع ذلك، يمكن استخدام مجموعة واسعة من أجهزة الكشف عن اللوني. كاشف عالمي يكمل الكشف عن امتصاص الأشعة فوق البنفسجية المرئية هو كاشف الأيروسول المشحون (CAD). يشتمل نوع من الكاشفات المستخدمة بشكل شائع على كاشفات معامل الانكسار، والتي توفر قراءات عن طريق قياس التغيرات في معامل الانكسار للشاطف أثناء تحركه عبر خلية التدفق. في حالات معينة، من الممكن استخدام أجهزة كشف متعددة، على سبيل المثال LCMS يجمع عادةً بين UV-Vis مع مطياف الكتلة.
</p>
<h3><span id=".D8.A7.D9.84.D8.B9.D9.88.D8.A7.D9.85.D9.84_.D8.A7.D9.84.D9.85.D8.A4.D8.AB.D8.B1.D8.A9_.D8.B9.D9.84.D9.89_.D9.83.D9.81.D8.A7.D8.A1.D8.A9_.D8.A7.D9.84.D9.81.D8.B5.D9.84"></span><span class="mw-headline" id="العوامل_المؤثرة_على_كفاءة_الفصل">العوامل المؤثرة على كفاءة الفصل</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=5" title="عدل القسم: العوامل المؤثرة على كفاءة الفصل">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>إن مدى وكفاءة الفصل بين قمتي لفظ متقاربتين يعبَّر عنها ب<b>عامل الاحتباس</b> أو <b>عامل السعة</b> <b>(retention (or capacity) factor (k’)</b> ، و<b>عامل الاصطفاء</b> <b>selectivity factor</b> ، و <b>عدد الطبقات النظرية N</b>. إن عامل السعة هو قياس زمن التصاق جزيئات الذائبة بأجزاء العمود مقارنة مع زمن التصاقها بالطور المتحرك. لذلك كلما كبرت قيمة K’ كلما زاد التثبت على أجزاء العمود.<sup id="cite_ref-10" class="reference"><a href="#cite_note-10">[10]</a></sup>
</p>
<h2><span id=".D8.A3.D9.86.D9.88.D8.A7.D8.B9_.D8.A7.D9.84.D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.B3.D8.A7.D8.A6.D9.84.D8.A9"></span><span class="mw-headline" id="أنواع_الكروماتوغرافيا_السائلة">أنواع الكروماتوغرافيا السائلة</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=6" title="عدل القسم: أنواع الكروماتوغرافيا السائلة">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<h3><span id=".D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.AA.D9.82.D8.B3.D9.8A.D9.85_Partition_chromatography"></span><span class="mw-headline" id="كروماتوغرافيا_التقسيم_Partition_chromatography">كروماتوغرافيا التقسيم Partition chromatography</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=7" title="عدل القسم: كروماتوغرافيا التقسيم Partition chromatography">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<div class="thumb tleft"><div class="thumbinner" style="width:302px;"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:HILIC_Partition_Method_Graphic.png" class="image"><img alt="" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/f/f2/HILIC_Partition_Method_Graphic.png/300px-HILIC_Partition_Method_Graphic.png" decoding="async" width="300" height="221" class="thumbimage" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/f/f2/HILIC_Partition_Method_Graphic.png/450px-HILIC_Partition_Method_Graphic.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/f/f2/HILIC_Partition_Method_Graphic.png/600px-HILIC_Partition_Method_Graphic.png 2x" data-file-width="1636" data-file-height="1206" /></a> <div class="thumbcaption"><div class="magnify"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:HILIC_Partition_Method_Graphic.png" class="internal" title="كبّر"></a></div><a href="/w/index.php?title=HILIC&action=edit&redlink=1" class="new" title="HILIC (الصفحة غير موجودة)">HILIC</a> Partition Technique Useful Range</div></div></div>
<p>كانت كروماتوغرافيا التقسيم (التشارك أو التوزع) Partition chromatography أحد الأنواع الأولى للكروماتوغرافيا التي طورها الكيميائيون.<sup id="cite_ref-11" class="reference"><a href="#cite_note-11">[11]</a></sup> تم تطبيق مبدأ معامل التقسيم partition coefficient في <a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D9%88%D8%B1%D9%82%D8%A9" title="استشراب ورقة">كروماتوغرافيا الورق</a> <a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%B7%D8%A8%D9%82%D8%A9_%D8%B1%D9%82%D9%8A%D9%82%D8%A9" title="استشراب طبقة رقيقة">وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة</a> والطور الغازي وتطبيقات فصل سائل ــ سائل. حصل Archer John Porter Martin و Richard Laurence Millington Synge على جائزة نوبل في الكيمياء لعام 1952 لتطويرهما لهذه التقنية، والتي كانت تستخدم لفصل الأحماض الأمينية.<sup id="cite_ref-12" class="reference"><a href="#cite_note-12">[12]</a></sup> يستخدم كروماتوغرافيا التقسيم مذيبًا محتفظًا به، على السطح أو داخل حبيبات أو ألياف مصفوفة داعمة صلبة "خاملة" كما هو الحال مع كروماتوغرافيا الورق؛ أو يستفيد من بعض تأثيرات الكولومبية (الكهربائية الساكنة) و/ أو الهيدروجين مع الطور الثابت. تنقسم مكونات العينة بين الطور الثابت السائل والطور المتحرك eluent. تمامًا كما هو الحال في كروماتوغرافيا التفاعل المحبة للماء (HILIC ؛ تقنية فرعية داخل HPLC)، تفصل هذه الطريقة مكونات المزيج المراد تحليله بناءً على الاختلافات في قطبيتها. غالبًا ما يستخدم HILIC طورًا ثابتًا قطبيًا مرتبطًا وطورًا متحركًا مصنوعًا بشكل أساسي من الأسيتونيتريل مع الماء كمكون قوي. تم استخدام قسم HPLC تاريخيًا على دعامات السيليكا أو الألومينا غير المربوطة unbonded silica. يعمل كل منها بشكل فعال لفصل مكونات العينة المراد تحليلها عن طريق الاختلافات القطبية النسبية. تتميز الأطوار المرتبطة بـ HILIC بميزة فصل المواد المذابة الحمضية والقاعدية والمحايدة في مسار كروماتوغرافي واحد.<sup id="cite_ref-13" class="reference"><a href="#cite_note-13">[13]</a></sup>
</p><p>تنتشر المواد المنحلة القطبية polar analytes في طبقة مائية ثابتة مرتبطة بالطور القطبي الثابت، وبالتالي يتم الاحتفاظ بها. كلما زادت قوة التفاعلات بين المواد المنحلة القطبية والطور القطبي الثابت (بالنسبة إلى الطور المتحرك)، زاد وقت الشطف elution time. تعتمد قوة التأثير أو التفاعل على طبيعة جزء المجموعات الوظيفية من البنية الجزيئية للمواد المنحلة، مع مجموعات أكثر استقطابًا (على سبيل المثال، هيدروكسيل-) ومجموعات قادرة على الارتباط الهيدروجيني الذي يؤدي إلى مزيد من الاحتفاظ. يمكن أن تزيد التاثيرات الكولومبية (الكهروستاتيكية) أيضًا من الاحتفاظ. سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، بينما تميل إضافة المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى زيادة أوقات الاستبقاء.
</p>
<h3><span id=".D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.B7.D9.88.D8.B1_.D8.A7.D9.84.D8.B9.D8.A7.D8.AF.D9.8A"></span><span class="mw-headline" id="كروماتوغرافيا_الطور_العادي">كروماتوغرافيا الطور العادي</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=8" title="عدل القسم: كروماتوغرافيا الطور العادي">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>كان كروماتوغرافيا الطور الطبيعي أحد الأنواع الأولى من HPLC التي طورها الكيميائيون. تُعرف هذه الطريقة أيضًا باسم HPLC من النوع العادي (NP-HPLC) ، حيث تفصل هذه الطريقة المواد المنحلة المراد فصلها بناءً على تقاربها مع سطح قطبي ثابت مثل السيليكا، ومن ثم فهي تعتمد على قدرة التحليل على الانخراط في التأثيرات القطبية (مثل الترابط الهيدروجيني أو ثنائي القطب) مع السطح الماص. يستخدم NP-HPLC طورًا متحركًا غير قطبي وغير مائي (على سبيل المثال، الكلوروفورم)، ويعمل بشكل فعال لفصل المواد المنحلة القابلة للذوبان بسهولة في المذيبات غير القطبية. يرتبط التحليل بالطورالثابت القطبي ويتم الاحتفاظ بها. تزداد قوة الامتزاز مع زيادة قطبية المواد المنحلة. لا تعتمد قوة التأثير فقط على المجموعات الوظيفية الموجودة في بنية جزيء المواد المنحلة، بل تعتمد أيضًا على العوامل الاستراتجية. يسمح تأثير العائق الفراغي على قوة التأثير لهذه الطريقة بحل أيزومرات بنيوية (منفصلة).
سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، في حين تميل المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى إحداث شطف أبطأ (زيادة أوقات الاحتفاظ). تميل المذيبات القطبية للغاية مثل آثار الماء في الطور المتحرك إلى الامتصاص إلى السطح الصلب للطور الثابت مكونًا طبقة ثابتة (مائية) والتي تلعب دورًا نشطًا في الاحتفاظ. هذا السلوك غريب إلى حد ما بالنسبة لكروماتوغرافيا الطور الطبيعي لأنه محكوم بشكل حصري تقريبًا بآلية امتزاز (على سبيل المثال، تتفاعل المواد المنحلة مع سطح صلب بدلاً من الطبقة المذابة ليجند متصل بالسطح الماص؛ انظر أيضًا HPLC ذو المرحلة العكسية أدناه). لا يزال كروماتوغرافيا الامتزاز مستخدمة على نطاق واسع لفصل الأيزومرات الهيكلية في كل من تنسيقات كروماتوغرافيا العمود والطبقة الرقيقة على دعامات السيليكا أو الألومينا المنشط (المجفف).
فشلت أنواع الكروماتوغرافية التقسيمية و NP-HPLC في السبعينيات مع تطوير كروماتوغرافيا HPLC ذات الأطوار العكسية بسبب ضعف استنساخ نتائج أوقات الاحتفاظ بسبب وجود طبقة مذيبات عضوية مائية أو بروتونية على سطح السيليكا أو وسط كروماتوغراف الألومينا . تتغير هذه الطبقة مع أي تغييرات في تكوين الطور المتحرك (على سبيل المثال، مستوى الرطوبة) مما يتسبب في أوقات استبقاء الانجراف.
في الآونة الأخيرة، أصبح الفصل الكروماتوغرافي شائعًا مرة أخرى مع تطور مراحل الارتباط الهيليك "Hilic" التي تُظهر تحسين استنساخ نتائج، ونتيجة لفهم أفضل لنطاق فائدة هذه التقنية.
</p>
<h3><span id=".D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.A5.D8.B2.D8.A7.D8.AD.D8.A9"></span><span class="mw-headline" id="كروماتوغرافيا_الإزاحة">كروماتوغرافيا الإزاحة</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=9" title="عدل القسم: كروماتوغرافيا الإزاحة">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>المبدأ الأساسي لكروماتوغرافيا الإزاحة displacement chromatography هو: إن الجزيء ذو الألفة العالية لركازة الكروماتوغرافيا (المزيح displacer) سوف يتنافس بفعالية على مواقع الربط، وبالتالي يزيح جميع الجزيئات ذات الألفة الأقل.<sup id="cite_ref-14" class="reference"><a href="#cite_note-14">[14]</a></sup> هناك اختلافات واضحة بين كروماتوغرافيا الإزاحة وكروماتوغرافيا الشطف elution chromatography. في وضع كروماتوغرافيا الشطف، تظهر المواد عادةً من عمود في قمم غاوسية ضيقة Gaussian peaks. مطلوب فصل واسع للقمم، مفضل عن خط الأساس baseline، من أجل تحقيق أقصى تنقية. تعتمد السرعة التي ينتقل بها أي مكون من خليط إلى أسفل العمود في وضع كروماتوغرافيا الشطف على العديد من العوامل. ولكن لكي تنتقل مادتان بسرعات مختلفة، وبالتالي يتم حلهما، يجب أن تكون هناك اختلافات جوهرية في بعض التفاعلات بين الجزيئات الحيوية وركازة الكروماتوغرافيا. يتم ضبط متحولات التشغيل لتعظيم تأثير هذا الاختلاف. في كثير من الحالات، لا يمكن تحقيق الفصل الأساسي للقمم إلا من خلال شطف التدرج وتحميل العمود المنخفض. وبالتالي، هناك عيبان في كروماتوغرافيا وضع الشطف، خاصة في المقياس التحضيري، وهما التعقيد التشغيلي، بسبب ضخ المذيبات المتدرج، والإنتاجية المنخفضة، بسبب التحميل المنخفض للعمود. يتميز كروماتوغرافيا الإزاحة بمزايا تفوق كروماتوغرافيا الشطف حيث يتم حل المكونات في مناطق متتالية من المواد النقية بدلاً من "القمم". نظرًا لأن العملية تستفيد من عدم خطية متساوي الحرارة، يمكن فصل تغذية عمود أكبر على عمود معين مع استرداد المكونات النقية بتركيز أعلى بكثير.
</p>
<h3><span id=".D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.B3.D8.A7.D8.A6.D9.84.D8.A9_.D8.B0.D8.A7.D8.AA_.D8.A7.D9.84.D8.B7.D9.88.D8.B1_.D8.A7.D9.84.D8.B9.D9.83.D8.B3.D9.8A"></span><span class="mw-headline" id="كروماتوغرافيا_السائلة_ذات_الطور_العكسي">كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=10" title="عدل القسم: كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<div class="thumb tleft"><div class="thumbinner" style="width:302px;"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Hplc-perfume-chromatogram.png" class="image"><img alt="" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/6/69/Hplc-perfume-chromatogram.png/300px-Hplc-perfume-chromatogram.png" decoding="async" width="300" height="189" class="thumbimage" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/6/69/Hplc-perfume-chromatogram.png/450px-Hplc-perfume-chromatogram.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/6/69/Hplc-perfume-chromatogram.png/600px-Hplc-perfume-chromatogram.png 2x" data-file-width="3196" data-file-height="2012" /></a> <div class="thumbcaption"><div class="magnify"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Hplc-perfume-chromatogram.png" class="internal" title="كبّر"></a></div>A chromatogram of complex mixture (perfume water) obtained by reversed phase HPLC</div></div></div>
<div class="rellink">لتفاصيل أكثر عن هذا الموضوع، انظر <a href="/w/index.php?title=Reversed-phase_chromatography&action=edit&redlink=1" class="new" title="Reversed-phase chromatography (الصفحة غير موجودة)"><b>Reversed-phase chromatography</b></a>.</div>
<p>تحتوي HPLC ذات الطور العكسي (RP-HPLC) على طور ثابت غير قطبي وطور متحرك مائي قطبي معتدل. إحدى الأطور الثابتة الشائعة هي السيليكا التي تم تعديل سطحها باستخدام المادة RMe2SiCl، حيث R عبارة عن مجموعة ألكيل مستقيمة مثل C<sub>18</sub>H<sub>37</sub> أو C<sub>8</sub>H<sub>17</sub>. مع مثل هذه الأطوار الثابتة، يكون وقت الاستبقاء أطول للجزيئات الأقل قطبية، بينما يتم التخلص من الجزيئات القطبية بسهولة أكبر (في وقت مبكر من التحليل). يمكن للمحلل المخبري زيادة أوقات الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من الماء إلى الطور المتحرك؛ مما يجعل ألفة المادة التحليلية الكارهة للماء للطورالثابت الكاره للماء أقوى مقارنة بالطور المتحرك الأكثر مقاومة للماء الآن. وبالمثل، يمكن للمحلل المخبري تقليل وقت الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من المذيبات العضوية إلى الطور المتحرك eluent. يتم استخدام RP-HPLC بشكل شائع لدرجة أنه غالبًا ما يشار إليه بشكل غير صحيح باسم "HPLC" دون مزيد من المواصفات. تستخدم صناعة الأدوية بانتظام نوع الكروماتوغرافيا RP-HPLC لضمان جودة الأدوية قبل إطلاقها.
يعمل RP-HPLC على مبدأ التفاعلات الكارهة للماء، والتي تنشأ من التناظر العالي في بنية الماء ثنائي القطب ويلعب الدور الأكثر أهمية في جميع العمليات في علوم الحياة. يسمح RP-HPLC بقياس هذه القوى التفاعلية. يتناسب ارتباط المادة المنحلة بالطور الثابت مع مساحة سطح التلامس حول الجزء غير القطبي من جزيء المادة المنحلة عند الارتباط بالرابط في الطورالثابت. هذا التأثير المضاد للذوبان تهيمن عليه قوة الماء من أجل "تقليل التجويف" حول المادة المنحلة وسلسلة C18 مقابل مجمع كليهما. الطاقة المنبعثة في هذه العملية تتناسب طرديًا مع التوتر السطحي للشاطف (الماء: 7.3 × 10 /6 جول / سم 2 ، الميثانول: 2.2 × 10 /6 جول / سم 2) والسطح الكارهة للماء من الحليلة والمرتبطة (المعقد) ligand على التوالي . يمكن تقليل الاحتباس عن طريق إضافة مذيب أقل قطبية (ميثانول، أسيتونتريل) إلى الطور المتحرك لتقليل التوتر السطحي للماء. يستخدم شطف التدرج هذا التأثير عن طريق التقليل التلقائي للقطبية والتوتر السطحي للطور المتحرك المائية أثناء التحليل.
تلعب الخصائص الهيكلية للجزيء المادة المنحلة دورًا مهمًا في خصائص الاحتفاظ به. بشكل عام، يتم الاحتفاظ بالتحليل ذي المساحة السطحية الكارهة للماء (C-H ، C-C ، والروابط الذرية غير القطبية عمومًا، مثل S-S وغيرها) لفترة أطول لأنه لا يتفاعل مع بنية الماء. من ناحية أخرى، فإن المواد المنحلة ذات المساحة السطحية القطبية الأعلى (التي يمنحها وجود المجموعات القطبية، مثل -OH أو -NH2 أو COO− أو -NH3 + في هيكلها) أقل احتفاظًا بها حيث يتم دمجها بشكل أفضل في الماء. تخضع مثل هذه التفاعلات لتأثيرات فراغية في تلك الجزيئات الكبيرة جدًا قد يكون لها وصول محدود فقط إلى مسام الطورالثابت، حيث تحدث التفاعلات مع الروابط السطحية (سلاسل الألكيل). عادة ما ينتج عن عائق السطح هذا احتباس أقل.
</p><p>يزيد وقت الاستبقاء مع مساحة السطح الكارهة للماء (غير القطبية). تتخلص مركبات السلاسل المتفرعة بسرعة أكبر من الأيزومرات الخطية المقابلة لها بسبب تناقص مساحة السطح الإجمالية. وبالمثل يتم التخلص من المركبات العضوية ذات الروابط C-C المفردة في وقت لاحق من تلك التي تحتوي على رابطة ثلاثية C = C أو C-C ، حيث أن الرابطة المزدوجة أو الثلاثية أقصر من رابطة C-C مفردة.
</p><p>بصرف النظر عن التوتر السطحي للطور المتحرك (القوة التنظيمية في هيكل eluent) ، يمكن أن تؤثر معدلات الطور المتحرك الأخرى على الاحتفاظ بالمادة المنحلة. على سبيل المثال، تؤدي إضافة الأملاح غير العضوية إلى زيادة خطية معتدلة في التوتر السطحي للمحاليل المائية (حوالي 1.5 × 10 J7 جول/سم2 لكل مول لكلوريد الصوديوم، 2.5 × 10−7 جول/ سم2 لكل مول لـ (NH4) 2SO4)، ولأن إنتروبية entropy سطح التماس بين المذيبات والمادة المنحلة يتم التحكم فيها عن طريق التوتر السطحي، فإن إضافة الأملاح تميل إلى زيادة وقت الاستبقاء. تُستخدم هذه التقنية للفصل الطفيف واستعادة البروتينات وحماية نشاطها البيولوجي في تحليل البروتين (كروماتوغرافيا التفاعل الكارهة للماء، HIC).
</p><p>عامل مهم آخر هو درجة الحموضة في الطور المتحرك لأنه يمكن أن يغير الطبيعة الكارهة للماء للمادة المنحلة. لهذا السبب، تستخدم معظم الطرق عامل تخزين مؤقت، مثل فوسفات الصوديوم، للتحكم في درجة الحموضة. تخدم المحاليل الموقية Buffers أغراضًا متعددة: التحكم في الأس الهيدروجيني، وتحييد الشحنة على سطح السيليكا في الطورالثابت والعمل كعوامل إقران أيون لتحييد شحنة التحليل. يضاف فورمات الأمونيوم بشكل شائع في قياس الطيف الكتلي لتحسين الكشف عن بعض المواد المنحلة عن طريق تكوين مقاربات الأمونيوم التحليلية. غالبًا ما يضاف حمض عضوي متطاير مثل حمض الأسيتيك، أو حمض الفورميك الأكثر شيوعًا، إلى الطور المتحرك إذا تم استخدام مقياس الطيف الكتلي لتحليل العمود المائل. يستخدم حمض Trifluoroacetic بشكل غير منتظم في تطبيقات قياس الطيف الكتلي نظرًا لثباته في الكاشف ونظام توصيل المذيبات، ولكن يمكن أن يكون فعالًا في تحسين الشبكية ntion من المواد المنحلة مثل الأحماض الكربوكسيلية في التطبيقات التي تستخدم أجهزة الكشف الأخرى، حيث أنه حمض عضوي قوي إلى حد ما. تختلف تأثيرات الأحماض والمحاليل الموقية باختلاف التطبيق ولكنها تعمل بشكل عام على تحسين دقة الكروماتوغرافيا.
</p><p>من الصعب جدًا إتلاف أعمدة الطور المعكوس مقارنةً بأعمدة السيليكا العادية ؛ ومع ذلك، تتكون العديد من أعمدة الطور المعكوس من جزيئات السيليكا المشتقة من الألكيل ولا يجب استخدامها مع القواعد المائية لأنها ستدمر جسيم السيليكا الأساسي. يمكن استخدامها مع حمض مائي، ولكن لا ينبغي أن يتعرض العمود للحمض لفترة طويلة، حيث يمكن أن يؤدي ذلك إلى تآكل الأجزاء المعدنية لجهاز HPLC. يجب شطف أعمدة RP-HPLC بمذيب نظيف بعد استخدامها لإزالة الأحماض المتبقية أو المحاليل، وتخزينها في تركيبة مناسبة من المذيب. يجب أن يظل المحتوى المعدني لأعمدة HPLC منخفضًا إذا كان يجب الاحتفاظ بأفضل قدرة ممكنة لفصل المواد. الاختبار الجيد للمحتوى المعدني للعمود هو حقن عينة عبارة عن خليط من 2,2'- و 4,4'-bipyridine. نظرًا لأن 2,2'-bipy يمكن أن يخلب المعدن، فسيتم تشويه شكل ذروة 2,2'-bipy (ذيول) عندما توجد أيونات معدنية على سطح السيليكا. [بحاجة لمصدر] ..
</p>
<h3><span id=".D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.A7.D8.B3.D8.AA.D8.A8.D8.B9.D8.A7.D8.AF_.D8.A7.D9.84.D8.AD.D8.AC.D9.85.D9.8A"></span><span class="mw-headline" id="كروماتوغرافيا_الاستبعاد_الحجمي">كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=11" title="عدل القسم: كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC)، والمعروفة أيضًا باسم كروماتوغرافيا نفاذية الهلام أو كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي، تفصل الجسيمات على أساس الحجم الجزيئي (في الواقع بواسطة نصف قطر ستوكس للجسيم). وهو بشكل عام كروماتوغرافيا منخفضة الدقة، وبالتالي فإنه غالبًا ما يكون محجوزة لخطوة "التصفية" النهائية للتنقية. كما أنها مفيدة في تحديد البنية الثلاثية والبنية الرباعية للبروتينات المنقاة. تستخدم SEC بشكل أساسي لتحليل الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات أو البوليمرات. تعمل SEC عن طريق محاصرة هذه الجزيئات الأصغر في مسام الجسيم. تمر الجزيئات الأكبر ببساطة عبر المسام لأنها أكبر من أن تدخل المسام. وبالتالي، فإن الجزيئات الأكبر تتدفق عبر العمود بشكل أسرع من الجزيئات الأصغر، أي أنه كلما كان الجزيء أصغر، زاد وقت الاحتفاظ.
</p><p>تستخدم هذه التقنية على نطاق واسع لتحديد الوزن الجزيئي للسكريات. SEC هي التقنية الرسمية (التي اقترحها دستور الأدوية الأوروبي) لمقارنة الوزن الجزيئي لمختلف الهيبارين منخفض الوزن الجزيئي المتاح تجاريًا.
</p>
<h3><span id=".D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.AA.D8.A8.D8.A7.D8.AF.D9.84_.D8.A7.D9.84.D8.A3.D9.8A.D9.88.D9.86.D9.8A"></span><span class="mw-headline" id="كروماتوغرافيا_التبادل_الأيوني">كروماتوغرافيا التبادل الأيوني</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=12" title="عدل القسم: كروماتوغرافيا التبادل الأيوني">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>في كروماتوغرافيا التبادل الأيوني (IC)، يعتمد الاستبقاء على التجاذب بين الأيونات المنحلة والمواقع المشحونة المرتبطة بالطور الثابت. يتم استبعاد الأيونات المذابة بنفس الشحنة مثل المواقع المشحونة بالعمود من الربط، بينما يتم الاحتفاظ بالأيونات المذابة للشحنة المعاكسة للمواقع المشحونة للطور الثابت في العمود. يمكن التخلص من الأيونات المذابة التي يتم الاحتفاظ بها في الطور الثابت من العمود عن طريق تغيير شروط المذيب في الطور المتحرك الشاطف (على سبيل المثال، زيادة التأثير الأيوني لنظام المذيب عن طريق زيادة تركيز الملح في المحلول، وزيادة درجة حرارة العمود، وتغيير الرقم الهيدروجيني للمذيب، إلخ).
</p><p>تشمل أنواع المبادلات الأيونية راتنجات البوليسترين، ومبادلات أيونات السليلوز والديكستران (المواد الهلامية)، والزجاج ذي المسام الخاضعة للتحكم أو السيليكا المسامية. تسمح راتنجات البوليسترين بالربط المتقاطع الذي يزيد من ثبات السلسلة. يقلل الارتباط المتقاطع العالي من الانحراف، مما يزيد من وقت الموازنة ويحسن الانتقائية في النهاية. تمتلك مبادلات أيونات السليلوز والديكستران أحجام مسام أكبر وكثافة منخفضة الشحن مما يجعلها مناسبة لفصل البروتين.
</p><p>بشكل عام، تفضل المبادلات الأيونية ربط الأيونات ذات الشحنة الأعلى ونصف القطر الأصغر.
</p><p>زيادة تركيز الأيون المضاد (فيما يتعلق بالمجموعات الوظيفية في الراتنجات) يقلل من وقت الاستبقاء. يقلل انخفاض الرقم الهيدروجيني من وقت الاستبقاء في تبادل الكاتيونات بينما تقلل الزيادة في الرقم الهيدروجيني من وقت الاحتفاظ في تبادل الأنيون. عن طريق خفض الرقم الهيدروجيني للمذيب في عمود التبادل الكاتيوني، على سبيل المثال، يتوفر المزيد من أيونات الهيدروجين للتنافس على المواضع على الطور الثابت الأنيوني، وبالتالي سيتم شطف الكاتيونات ضعيفة الارتباط.
</p><p>يستخدم هذا النمط من الكروماتوغرافيا على نطاق واسع في التطبيقات التالية: تنقية المياه، والتركيز المسبق للمكونات النزرة، وكروماتوغرافيا التبادل الترابطي، وكروماتوغرافيا التبادل الأيوني للبروتينات، وكروماتوغرافيا التبادل الأنيوني عالي الحموضة للكربوهيدرات والسكريات قليلة الحموضة، وغيرها.
</p>
<h3><span id=".D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.B0.D8.A7.D8.AA_.D8.A7.D9.84.D8.A3.D9.84.D9.81.D8.A9_.D8.A7.D9.84.D8.AD.D9.8A.D9.88.D9.8A.D8.A9"></span><span class="mw-headline" id="كروماتوغرافيا_ذات_الألفة_الحيوية">كروماتوغرافيا ذات الألفة الحيوية</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=13" title="عدل القسم: كروماتوغرافيا ذات الألفة الحيوية">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<div class="rellink">لتفاصيل أكثر عن هذا الموضوع، انظر <a href="/wiki/Affinity_chromatography" class="mw-redirect" title="Affinity chromatography"><b>Affinity chromatography</b></a>.</div>
<p>تعتمد هذه العملية الكروماتوغرافية على خاصية المواد النشطة بيولوجيا لتشكيل معقدات complexes مستقرة ومحددة وقابلة للعكس. يتضمن تكوين هذه المعقدات مشاركة القوى الجزيئية المشتركة مثل تأثيرات قوى فاندر فالس Van der Waals والتأثير الكهروستاتيكي وتأثير ثنائي القطب والألفة الهيدروفيلية ورابطة الهيدروجين. يتم تكوين رابطة بيولوجية فعالة ونوعية من خلال اجتماع متضافر للعديد من هذه القوى في مواقع النشطة التفاعلية في الطور الكروماتوغرافي.
</p>
<h3><span id=".D9.83.D8.B1.D9.88.D9.85.D8.A7.D8.AA.D9.88.D8.BA.D8.B1.D8.A7.D9.81.D9.8A.D8.A7_.D8.A7.D9.84.D8.B7.D9.88.D8.B1_.D8.A7.D9.84.D8.B9.D8.A7.D8.AF.D9.8A_.D8.A7.D9.84.D9.85.D8.A7.D8.A6.D9.8A"></span><span class="mw-headline" id="كروماتوغرافيا_الطور_العادي_المائي">كروماتوغرافيا الطور العادي المائي</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=14" title="عدل القسم: كروماتوغرافيا الطور العادي المائي">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>كروماتوغرافيا الطور العادي المائي وبالإنكليزية Aqueous normal-phase chromatography (ANP) هي تقنية كروماتوغرافية تشمل منطقة الطور المتحرك (خيارات تركيب الطور المتحرك) بين كروماتوغرافيا الطور العكسي reversed-phase chromatography (RP) __التي فيها الطور المتحرك هو أكثر قطبية من الطور الثابت__ وكروماتوغرافيا الطور الطبيعي العضوي organic normal phase chromatography (ONP) التي يتصف الطور المتحرك بقطبية أقل من الطور الثابت. تُستخدم هذه التقنية لتحقيق انتقائية فريدة للمركبات المحبة للماء (هيدروفيلية)، مما يُظهر قدرة الشطف للطور العادي باستخدام مذيبات عضوية عكسية الطور. [بحاجة لمصدر]
</p>
<h2><span id=".D8.A7.D9.84.D8.B4.D8.B7.D9.81_.D9.85.D8.B9_.D8.B7.D9.88.D8.B1_.D9.85.D8.AA.D8.AD.D8.B1.D9.83_.D8.A5.D9.8A.D8.B2.D9.88.D9.82.D8.B1.D8.A7.D8.B7.D9.8A_.D9.88.D9.85.D8.AA.D8.AF.D8.B1.D8.AC"></span><span class="mw-headline" id="الشطف_مع_طور_متحرك_إيزوقراطي_ومتدرج">الشطف مع طور متحرك إيزوقراطي ومتدرج</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=15" title="عدل القسم: الشطف مع طور متحرك إيزوقراطي ومتدرج">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<p>بالإنكليزية (Isocratic and gradient elution)
</p>
<div class="thumb tleft"><div class="thumbinner" style="width:222px;"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:HPLC_extraction_and_use.jpg" class="image"><img alt="" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/56/HPLC_extraction_and_use.jpg/220px-HPLC_extraction_and_use.jpg" decoding="async" width="220" height="164" class="thumbimage" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/56/HPLC_extraction_and_use.jpg/330px-HPLC_extraction_and_use.jpg 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/56/HPLC_extraction_and_use.jpg/440px-HPLC_extraction_and_use.jpg 2x" data-file-width="2700" data-file-height="2017" /></a> <div class="thumbcaption"><div class="magnify"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:HPLC_extraction_and_use.jpg" class="internal" title="كبّر"></a></div>في وحدة أبحاث استخدام المنتجات الطبيعية ARS في أكسفورد, يقوم عالم مساعد (يمين) باستخراج أصباغ نباتية سيتم تحليلها بواسطة اختصاصي فيزيولوجيا النبات (يسار) باستخدام نظام HPLC.</div></div></div>
<p>يُطلق على الفصل الذي يظل فيه تكوين الطور المتحرك ثابتًا طوال الإجراء اسمًا إيزوقراطيًا Isocratic(يعني التكوين الثابت). (على سبيل المثال، ستبقى النسبة المئوية للميثانول طوال الإجراء ثابتة ، أي 10٪) الكلمة صاغها <a href="/wiki/%D8%B3%D8%A7%D8%A8%D8%A7_%D9%87%D9%88%D8%B1%D9%81%D8%A7%D8%AB" title="سابا هورفاث">سابا هورفاث</a> <a href="/wiki/%D8%B3%D8%A7%D8%A8%D8%A7_%D9%87%D9%88%D8%B1%D9%81%D8%A7%D8%AB" title="سابا هورفاث">Csaba Horvath</a> الذي كان أحد رواد تقانة HPLC. [بحاجة لمصدر]،
</p><p>لا يجب أن يظل تكوين الطور المتحرك ثابتًا. يوصف الفصل الذي يتغير فيه تكوين الطور المتحرك أثناء عملية الفصل بأنه شطف متدرج. أحد الأمثلة هو التدرج اللوني الذي يبدأ عند 10٪ ميثانول وينتهي عند 90٪ ميثانول بعد 20 دقيقة. ويطلق على عنصري الطور المتحرك اسم "A" و "B" ؛ A هو المذيب "الضعيف" الذي يسمح للمذاب (المادة المنحلة) بالتخلص ببطء فقط، بينما B هو المذيب "القوي" الذي يزيل المواد المذابة بسرعة من العمود. في كروماتوغرافيا الطور العكسي، غالبًا ما يكون المذيب A عبارة عن ماء أو محلول مائي ، بينما B عبارة عن مذيب عضوي قابل للامتزاج بالماء، مثل الأسيتونتريل أو الميثانول أو <a href="/wiki/%D8%B1%D8%A8%D8%A7%D8%B9%D9%8A_%D9%87%D9%8A%D8%AF%D8%B1%D9%88_%D8%A7%D9%84%D9%81%D9%88%D8%B1%D8%A7%D9%86" title="رباعي هيدرو الفوران">رباعي هيدرو الفوران</a> THF أو الأيزوبروبانول.
</p><p>في الشطف المتساوي ، يزداد عرض الذروة مع زمن الاستبقاء خطيًا وفقًا لمعادلة N ، عدد الصفائح النظرية. هذا يؤدي إلى عيب أن القمم المتأخرة تصبح مسطحة وواسعة للغاية. قد يمنعها شكلها وعرضها من التعرف عليها على أنها قمم.
يقلل شطف التدرج من الاحتفاظ بمكونات التصفية اللاحقة بحيث تتم إزالتها بشكل أسرع، مما يعطي قممًا أضيق (وأطول) لمعظم المكونات. يعمل هذا أيضًا على تحسين شكل الذروة للقمم الذيلية ، حيث يدفع التركيز المتزايد للشاطف العضوي جزء الذيل من الذروة إلى الأمام. يؤدي هذا أيضًا إلى زيادة ارتفاع الذروة (تبدو القمة "أكثر حدة")، وهو أمر مهم في تحليل التتبع. قد يتضمن برنامج التدرج زيادات مفاجئة "خطوة" في النسبة المئوية للمكون العضوي ، أو منحدرات مختلفة في أوقات مختلفة - كل ذلك وفقًا للرغبة في الفصل الأمثل في أقل وقت ممكن.
</p>
<div class="thumb tleft"><div class="thumbinner" style="width:222px;"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Reverse_Phase_Gradient_Elution_Schematic.svg" class="image"><img alt="" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/f/f8/Reverse_Phase_Gradient_Elution_Schematic.svg/220px-Reverse_Phase_Gradient_Elution_Schematic.svg.png" decoding="async" width="220" height="184" class="thumbimage" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/f/f8/Reverse_Phase_Gradient_Elution_Schematic.svg/330px-Reverse_Phase_Gradient_Elution_Schematic.svg.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/f/f8/Reverse_Phase_Gradient_Elution_Schematic.svg/440px-Reverse_Phase_Gradient_Elution_Schematic.svg.png 2x" data-file-width="367" data-file-height="307" /></a> <div class="thumbcaption"><div class="magnify"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Reverse_Phase_Gradient_Elution_Schematic.svg" class="internal" title="كبّر"></a></div>A schematic of gradient elution. . تؤدي زيادة قوة الطور المتحرك بشكل متسلسل إلى إزالة المواد المنحلة التي لها قوة تفاعل متفاوتة مع الطور الثابت.</div></div></div>
<p>في الشطف المتساوي ، لا تتغير الانتقائية إذا تغيرت أبعاد العمود (الطول والقطر الداخلي) - أي يتم فصل القمم بنفس الترتيب. في شطف التدرج ، قد يتغير ترتيب الشطف مع تغير الأبعاد أو معدل التدفق. [بحاجة لمصدر]
</p><p>تنشأ القوة الدافعة في كروماتوغرافيا الطور المعكوس في الترتيب العالي لهيكل الماء. يتمثل دور المكون العضوي في الطور المتحرك في تقليل هذا الترتيب المرتفع وبالتالي تقليل قوة التثبيط للمكون المائي.
</p>
<h2><span id=".D8.A7.D9.84.D8.AA.D8.B4.D8.BA.D9.8A.D9.84"></span><span class="mw-headline" id="التشغيل">التشغيل</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=16" title="عدل القسم: التشغيل">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<p>يتم إدخال خليط العينة المراد فصله وتحليله، في حجم صغير منفصل (عادةً ميكروليتر)، في تيار الطور المتحرك المتسرب عبر العمود. تتحرك مكونات العينة عبر العمود بسرعات مختلفة، وهي تابعة لتأثيرات فيزيائية محددة مع مادة الامتصاص (وتسمى أيضًا الطور الساكن أو الثابت stationary phase). تعتمد سرعة كل مكون على طبيعته الكيميائية وعلى طبيعة الكيميائية للطور الساكن في العمود وعلى تركيب الطور المتحرك. يُطلق على الوقت الذي يتم فيه فصل مادة تحليلية معينة elution (يخرج من العمود) اسم وقت الاحتفاظ أو الاستبقاء retention time. وقت الاستبقاء المقاس في ظل ظروف معينة هو خاصية تعريف لتحليل معين.
تتوفر العديد من أنواع الأعمدة المختلفة، المليئة بمواد ممتزة متفاوتة في حجم الجسيمات وطبيعة سطحها ("كيمياء السطح"). يتطلب استخدام مواد التعبئة ذات الأحجام الصغيرة للجسيمات استخدام ضغط تشغيلي أعلى (الضغط الخلفي backpressure) وعادة ما يحسن دقة الفصل الكروماتوغرافية (درجة الفصل للذروة بين مكونات المتتالية الخارجة من العمود). قد تكون الجسيمات الممتزة كارهة للماء hydrophobic أو قطبية بطبيعتها.
</p><p>
تشتمل الأطوار المتحركة الشائعة الاستخدام على أي مزيج قابل للامتزاج من الماء مع المذيبات العضوية المختلفة (الأكثر شيوعًا هي الأسيتونيتريل والميثانول). تستخدم بعض تقنيات HPLC أطوار متحركة خالية من الماء (انظر كروماتوغرافيا الطور الطبيعي normal-phase chromatography أدناه). قد يحتوي المكون المائي للطور المتحرك على أحماض (مثل حمض الفورميك أو الفوسفوريك أو ثلاثي فلورو أسيتيك) أو أملاح للمساعدة في فصل مكونات العينة. قد يظل تركيب الطور المتحرك ثابتًا (وضع الشطف المتساوي isocratic elution mode) أو متغيراً (وضع الشطف المتدرج gradient elution mode) أثناء التحليل الكروماتوغرافي. عادة ما يكون الشطف المتساوي فعالًا في فصل مكونات العينة التي تختلف اختلافًا كبيرًا في ألفتها الكيميائية مع الطور الثابت. في الشطف المتدرج، يتنوع تركيب الطور المتحرك نموذجيًا من قوة الشطف المنخفضة إلى عالية. تنعكس قوة الشطف للطور المتحرك من خلال أزمنة احتفاظ ذات قوة تصفية عالية والتي تنتج شطفًا سريعًا (أزمنة احتفاظ قصيرة). نموذجياً يمكن أن يبدأ برنامج التدرج للطور المتحرك في كروماتوغرافيا الطور المعكوس عند 5٪ أسيتونيتريل (في الماء أو محلول موقي مائي aqueous buffer) ويرتفع خطيًا إلى 95٪ أسيتونيتريل خلال 5-25 دقيقة. قد تكون فترات ثبات تركيب الطور المتحرك جزءًا من برنامج التدرج التشغيلي. على سبيل المثال، يمكن الاحتفاظ بتركيب الطور المتحرك ثابتًا عند تركيب 5٪ أسيتونيتريل لمدة 1-3 دقائق، ثم يجري تغيير خطي يصل إلى 95٪ أسيتونيتريل.</p><div class="thumb tleft"><div class="thumbinner" style="width:222px;"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Fraction_Collector_Tube_Rack.jpg" class="image"><img alt="" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/c9/Fraction_Collector_Tube_Rack.jpg/220px-Fraction_Collector_Tube_Rack.jpg" decoding="async" width="220" height="165" class="thumbimage" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/c9/Fraction_Collector_Tube_Rack.jpg/330px-Fraction_Collector_Tube_Rack.jpg 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/c9/Fraction_Collector_Tube_Rack.jpg/440px-Fraction_Collector_Tube_Rack.jpg 2x" data-file-width="1024" data-file-height="768" /></a> <div class="thumbcaption"><div class="magnify"><a href="/wiki/%D9%85%D9%84%D9%81:Fraction_Collector_Tube_Rack.jpg" class="internal" title="كبّر"></a></div>جامع القطفات الدوراني. The system is being used to isolate a fraction containing <a href="/w/index.php?title=Complex_I&action=edit&redlink=1" class="new" title="Complex I (الصفحة غير موجودة)">Complex I</a> from <i>E. coli</i> plasma membranes. About 50 litres of bacteria were needed to isolate this amount.<sup id="cite_ref-Fraction_collector_(post_on_Flickr)_15-0" class="reference"><a href="#cite_note-Fraction_collector_(post_on_Flickr)-15">[15]</a></sup></div></div></div>
<p>يعتمد التركيب المختار للطور المتحرك (ويسمى أيضًا الشاطف eluent) على شدة التفاعلات بين مكونات العينة المختلفة (analytes) والطور الساكن (على سبيل المثال، التفاعلات الكارهة للماء في كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور المعكوس). اعتمادًا على الفتهم الكيميائية مع الطورين المتحرك والساكن تتوزع partition مكونات العينة المختلفة بين الاثنين أثناء عملية الفصل التي تحدث في العمود. تشبه عملية التوزيع partition تلك التي تحدث أثناء الاستخلاص السائل ـ السائل liquid–liquid extraction ولكنها مستمرة وليست تتم عبر مراحل تشغيلية step-wise. في هذا المثال، باستخدام التدرج اللوني للماء/الأسيتونتريل، ستتم إزالة المزيد من المكونات الكارهة للماء (الهيدروفوبية) من الطور الساكن (أي تخرج من العمود) في وقت متأخر، بمجرد أن يصبح الطور المتحرك أكثر تركيزًا في الأسيتونيتريل (أي في الطور المتحرك ذي قوة التصفية العالية من جراء تزايد هيدروفوبية المحلول الشاطف).
يعتمد اختيار مكونات الطور المتحرك والإضافات (مثل الأملاح أو الأحماض) وشروط التدرج على طبيعة العمود ومكونات العينة. غالبًا ما يتم إجراء سلسلة من العمليات التجريبية مع العينة من أجل إيجاد طريقة HPLC التي تعطي فصلًا مناسبًا.
</p>
<h2><span id=".D8.A7.D9.84.D8.AA.D8.B7.D8.A8.D9.8A.D9.82.D8.A7.D8.AA"></span><span class="mw-headline" id="التطبيقات">التطبيقات</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=17" title="عدل القسم: التطبيقات">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<h3><span id=".D9.81.D9.8A_.D9.85.D8.AC.D8.A7.D9.84_.D8.AA.D8.B5.D9.86.D9.8A.D8.B9_.D8.A7.D9.84.D9.85.D9.88.D8.A7.D8.AF_Manufacturing"></span><span class="mw-headline" id="في_مجال_تصنيع_المواد_Manufacturing">في مجال تصنيع المواد Manufacturing</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=18" title="عدل القسم: في مجال تصنيع المواد Manufacturing">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>هناك تطبيقات عديدة لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي HPLC في العلوم المختبرية والسريرية. إنها تقنية شائعة تستخدم في تطوير <a href="/wiki/%D8%A3%D8%AF%D9%88%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="أدوية">المنتجات الصيدلانية</a>، لأنها طريقة يمكن الاعتماد عليها للحصول على نقاوة المنتج وضمان جودته.<sup id="cite_ref-16" class="reference"><a href="#cite_note-16">[16]</a></sup> بينما يمكن أن تنتج تقانة HPLC منتجات عالية الجودة (نقية)، إلا أنه ليس دائمًا الطريقة الأساسية المستخدمة في إنتاج <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%A3%D8%AF%D9%88%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="الأدوية">مواد الأدوية</a> السائبة bulk drug materials.<sup id="cite_ref-مولد_تلقائيا1_17-0" class="reference"><a href="#cite_note-مولد_تلقائيا1-17">[17]</a></sup> وفقًا لدستور الأدوية الأوروبي <a rel="nofollow" class="external text" href="http://European%20pharmacopoeia">European pharmacopoeia</a>، يتم استخدام HPLC في 15.5٪ فقط من التركيبات (<a href="/wiki/%D8%A7%D8%B5%D8%B7%D9%86%D8%A7%D8%B9_%D8%B9%D8%B6%D9%88%D9%8A" title="اصطناع عضوي">الاصطناعات</a>) syntheses.<sup id="cite_ref-مولد_تلقائيا1_17-1" class="reference"><a href="#cite_note-مولد_تلقائيا1-17">[17]</a></sup> According to the European pharmacopoeia, HPLC is used in only 15.5% of syntheses.<sup id="cite_ref-18" class="reference"><a href="#cite_note-18">[18]</a></sup> ومع ذلك، فإنه يلعب دورًا في 44٪ من التركيبات في دستور الأدوية في الولايات المتحدة United States pharmacopoeia.<sup id="cite_ref-19" class="reference"><a href="#cite_note-19">[19]</a></sup> قد يكون هذا بسبب الاختلافات في القيود النقدية والزمنية، حيث يمكن أن تكون تقانة HPLC على نطاق التطبيق الأوسع تقنية باهظة الثمن. إن الزيادة في الخصوصية والدقة والدقة التي تحدث مع تقانة HPLC تقابل للأسف زيادة في التكلفة.
</p>
<h3><span id=".D9.81.D9.8A_.D9.85.D8.AC.D8.A7.D9.84_.D8.A7.D9.84.D8.B1.D9.82.D8.A7.D8.A8.D8.A9_.D8.A7.D9.84.D9.82.D8.A7.D9.86.D9.88.D9.86.D9.8A.D8.A9"></span><span class="mw-headline" id="في_مجال_الرقابة_القانونية">في مجال الرقابة القانونية</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=19" title="عدل القسم: في مجال الرقابة القانونية">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>تُستخدم هذه التقنية أيضًا للكشف عن العقاقير غير المشروعة في <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%A8%D9%88%D9%84" class="mw-redirect" title="البول">البول</a>. الطريقة الأكثر شيوعًا للكشف عن المخدرات هي المقايسة المناعية <a href="/wiki/%D9%85%D9%82%D8%A7%D9%8A%D8%B3%D8%A9_%D9%85%D9%86%D8%A7%D8%B9%D9%8A%D8%A9" title="مقايسة مناعية">مقايسة مناعية</a>.<sup id="cite_ref-20" class="reference"><a href="#cite_note-20">[20]</a></sup> هذه الطريقة أكثر ملاءمة. ومع ذلك، تأتي الراحة على حساب خصوصية وتغطية مجموعة واسعة من <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%A3%D8%AF%D9%88%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="الأدوية">الأدوية</a>. نظرًا لأن HPLC هي طريقة لتحديد (وربما زيادة) النقاء، فإن استخدام HPLC وحده في تقييم تراكيز الأدوية غير كافٍ إلى حد ما. مع هذا، غالبًا ما يتم إجراء تحليل HPLC في هذا السياق جنبًا إلى جنب مع قياس <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%AA%D9%84%D8%A9" title="مطيافية الكتلة">الطيف الكتلي</a> mass spectrometry (MS).<sup id="cite_ref-21" class="reference"><a href="#cite_note-21">[21]</a></sup> استخدام الكروماتوغرافيا السائلة بدلاً من كروماتوغرافيا الغاز بالتزامن مع مطيافية الكتلة MS يتحايل على ضرورة الاشتقاق باستخدام عوامل الأسيتيل أو الألكلة، والتي يمكن أن تكون خطوة إضافية مرهقة.<sup id="cite_ref-22" class="reference"><a href="#cite_note-22">[22]</a></sup> تم استخدام هذه التقنية للكشف عن مجموعة متنوعة من العوامل مثل <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%85%D9%86%D8%B4%D8%B7%D8%A7%D8%AA" class="mw-redirect" title="المنشطات">المنشطات</a> doping agents، ومستقلبات الأدوية ، وتقارن الجلوكورونيد glucuronide conjugates، <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%85%D9%81%D9%8A%D8%AA%D8%A7%D9%85%D9%8A%D9%86%D8%A7%D8%AA" class="mw-redirect" title="الأمفيتامينات">والأمفيتامينات</a> amphetamines، والمواد <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%81%D9%8A%D9%88%D9%86%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="الأفيونية">الأفيونية</a> opioids، <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%88%D9%83%D8%A7%D9%8A%D9%8A%D9%86" class="mw-redirect" title="الكوكايين">والكوكايين</a> cocaine، و BZDs ، والكيتامين ketamine، و LSD ، والقنب cocaine، <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%A8%D9%8A%D8%AF%D8%A7%D8%AA_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D8%B4%D8%B1%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="المبيدات الحشرية">والمبيدات الحشرية</a> pesticides.<sup id="cite_ref-23" class="reference"><a href="#cite_note-23">[23]</a></sup><sup id="cite_ref-24" class="reference"><a href="#cite_note-24">[24]</a></sup> يؤدي أداء HPLC جنبًا إلى جنب مع قياس <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%AA%D9%84%D8%A9" title="مطيافية الكتلة">الطيف الكتلي</a> إلى تقليل الحاجة المطلقة إلى إجراء <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%B9%D8%A7%D9%8A%D8%B1%D8%A9" class="mw-redirect mw-disambig" title="المعايرة">المعايرة</a> standardization في عمليات التشغيل التجريبية لـ HPLC.
</p>
<h3><span id=".D9.81.D9.8A_.D9.85.D8.AC.D8.A7.D9.84_.D8.A7.D9.84.D8.A7.D8.A8.D8.AD.D8.A7.D8.AB"></span><span class="mw-headline" id="في_مجال_الابحاث">في مجال الابحاث</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=20" title="عدل القسم: في مجال الابحاث">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>يمكن إجراء فحوصات مماثلة لأغراض البحث، والكشف عن تراكيز مواد السريرية المحتملة مثل الأدوية المضادة <a href="/w/index.php?title=%D9%84%D9%84%D9%81%D8%B7%D8%B1%D9%8A%D8%A7%D8%AA&action=edit&redlink=1" class="new" title="للفطريات (الصفحة غير موجودة)">للفطريات</a> anti-fungal <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%B1%D8%A8%D9%88" class="mw-redirect" title="الربو">والربو</a> asthma drugs.<sup id="cite_ref-25" class="reference"><a href="#cite_note-25">[25]</a></sup> من الواضح أن هذه التقنية مفيدة في مراقبة الأنواع المتعددة في العينات التي تم جمعها أيضًا، ولكنها تتطلب استخدام محاليل عيارية قياسية <a href="/wiki/%D9%85%D8%AD%D9%84%D9%88%D9%84_%D9%82%D9%8A%D8%A7%D8%B3%D9%8A" title="محلول قياسي">محلول قياسي</a> عند البحث عن معلومات حول هوية الأنواع. يتم استخدامه كطريقة لتأكيد نتائج <a href="/wiki/%D8%A7%D8%B5%D8%B7%D9%86%D8%A7%D8%B9_%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A6%D9%8A" title="اصطناع كيميائي">التفاعلات التركيبية</a> synthesis reactions ، حيث أن <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%86%D9%82%D8%A7%D9%88%D8%A9" class="mw-redirect mw-disambig" title="النقاوة">النقاوة</a> purity ضرورية في هذا النوع من البحث. ومع ذلك، لا يزال قياس الطيف الكتلي mass spectrometry هو الطريقة الأكثر موثوقية لتحديد الأنواع.
</p>
<h3><span id=".D9.81.D9.8A_.D8.A7.D9.84.D9.85.D8.AC.D8.A7.D9.84_.D8.A7.D9.84.D8.B7.D8.A8.D9.8A"></span><span class="mw-headline" id="في_المجال_الطبي">في المجال الطبي</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=21" title="عدل القسم: في المجال الطبي">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h3>
<p>يمكن أن يشمل الاستخدام الطبي لتقانة HPLC تحليل الأدوية drug analysis، ولكنه يقع بشكل وثيق ضمن فئة تحليل المغذيات nutrient analysis. في حين أن البول هو الوسيلة الأكثر شيوعًا لتحليل تركيزات الأدوية، فإن مصل الدم blood serum هو العينة التي يتم جمعها لمعظم التحليلات الطبية باستخدام HPLC.<sup id="cite_ref-26" class="reference"><a href="#cite_note-26">[26]</a></sup> تم اختبار طرق أخرى للكشف عن الجزيئات المفيدة للدراسات السريرية ضد HPLC ، وهي <a href="/wiki/%D9%85%D9%82%D8%A7%D9%8A%D8%B3%D8%A9_%D9%85%D9%86%D8%A7%D8%B9%D9%8A%D8%A9" title="مقايسة مناعية">المقايسات المناعية</a> immunoassays. في أحد الأمثلة على ذلك، تمت مقارنة <a href="/wiki/%D8%AA%D8%B1%D9%83%D9%8A%D8%B2_%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%A7%D8%AF%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%85%D9%88%D8%A7%D9%81%D9%82_%D9%84%D9%84%D8%AA%D8%AB%D8%A8%D9%8A%D8%B7_%D8%A7%D9%84%D9%86%D8%B5%D9%81%D9%8A" title="تركيز المادة الموافق للتثبيط النصفي">فحوصات ربط البروتين التنافسية</a> competitive protein binding assays (CPBA) و تقانة HPLC من أجل الحساسية في الكشف عن <a href="/wiki/%D9%81%D9%8A%D8%AA%D8%A7%D9%85%D9%8A%D9%86_%D8%AF" class="mw-redirect" title="فيتامين د">فيتامين د</a>. مفيد في تشخيص نقص فيتامين د لدى الأطفال ، وقد وجد أن حساسية ونوعية هذا CPBA وصلت فقط إلى 40٪ و 60٪، على التوالي، من قدرة تحاليل HPLC.<sup id="cite_ref-27" class="reference"><a href="#cite_note-27">[27]</a></sup> على الرغم من كونها أداة باهظة الثمن، إلا أن دقة تقانة HPLC لا مثيل لها تقريبًا.
</p>
<h2><span id=".D8.A7.D9.84.D9.85.D8.B1.D8.A7.D8.AC.D8.B9"></span><span class="mw-headline" id="المراجع">المراجع</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=22" title="عدل القسم: المراجع">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<div class="reflist"><ol class="references">
<li id="cite_note-1"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-1">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite class="citation web"><a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20201207091340/https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/">"ترجمة و معنى high performance liquid chromatography بالعربي في قاموس المعاني. قاموس عربي انجليزي مصطلحات صفحة 1"</a>. مؤرشف من <a rel="nofollow" class="external text" href="https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/">الأصل</a> في 7 ديسمبر 2020<span class="reference-accessdate">. اطلع عليه بتاريخ 07 ديسمبر 2020</span>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Abook&rft.genre=unknown&rft.btitle=%D8%AA%D8%B1%D8%AC%D9%85%D8%A9+%D9%88+%D9%85%D8%B9%D9%86%D9%89+high+performance+liquid+chromatography+%D8%A8%D8%A7%D9%84%D8%B9%D8%B1%D8%A8%D9%8A+%D9%81%D9%8A+%D9%82%D8%A7%D9%85%D9%88%D8%B3+%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%B9%D8%A7%D9%86%D9%8A.+%D9%82%D8%A7%D9%85%D9%88%D8%B3+%D8%B9%D8%B1%D8%A8%D9%8A+%D8%A7%D9%86%D8%AC%D9%84%D9%8A%D8%B2%D9%8A+%D9%85%D8%B5%D8%B7%D9%84%D8%AD%D8%A7%D8%AA+%D8%B5%D9%81%D8%AD%D8%A9+1&rft_id=https%3A%2F%2Fwww.almaany.com%2Far%2Fdict%2Far-en%2Fhigh-performance-liquid-chromatography%2F&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><style data-mw-deduplicate="TemplateStyles:r47703133">.mw-parser-output cite.citation{font-style:inherit}.mw-parser-output .citation q{quotes:"\"""\"""'""'"}.mw-parser-output .id-lock-free a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-free a{background-image:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/6/65/Lock-green.svg/9px-Lock-green.svg.png");background-image:linear-gradient(transparent,transparent),url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/65/Lock-green.svg");background-repeat:no-repeat;background-size:9px;background-position:right .1em center}.mw-parser-output .id-lock-limited a,.mw-parser-output .id-lock-registration a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-limited a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-registration a{background-image:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/d/d6/Lock-gray-alt-2.svg/9px-Lock-gray-alt-2.svg.png");background-image:linear-gradient(transparent,transparent),url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/d6/Lock-gray-alt-2.svg");background-repeat:no-repeat;background-size:9px;background-position:right .1em center}.mw-parser-output .id-lock-subscription a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-subscription a{background-image:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/aa/Lock-red-alt-2.svg/9px-Lock-red-alt-2.svg.png");background-image:linear-gradient(transparent,transparent),url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/aa/Lock-red-alt-2.svg");background-repeat:no-repeat;background-size:9px;background-position:right .1em center}.mw-parser-output .cs1-subscription,.mw-parser-output .cs1-registration{color:#555}.mw-parser-output .cs1-subscription span,.mw-parser-output .cs1-registration span{border-bottom:1px dotted;cursor:help}.mw-parser-output .cs1-ws-icon a{background-image:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4c/Wikisource-logo.svg/12px-Wikisource-logo.svg.png");background-image:linear-gradient(transparent,transparent),url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/4c/Wikisource-logo.svg");background-repeat:no-repeat;background-size:12px;background-position:right .1em center}.mw-parser-output code.cs1-code{color:inherit;background:inherit;border:inherit;padding:inherit}.mw-parser-output .cs1-hidden-error{display:none;font-size:100%}.mw-parser-output .cs1-visible-error{font-size:100%}.mw-parser-output .cs1-maint{display:none;color:#33aa33;margin-left:0.3em}.mw-parser-output .cs1-subscription,.mw-parser-output .cs1-registration,.mw-parser-output .cs1-format{font-size:95%}.mw-parser-output .cs1-kern-left,.mw-parser-output .cs1-kern-wl-left{padding-left:0.2em}.mw-parser-output .cs1-kern-right,.mw-parser-output .cs1-kern-wl-right{padding-right:0.2em}.mw-parser-output .citation .mw-selflink{font-weight:inherit}</style></span>
</li>
<li id="cite_note-2"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-2">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite class="citation web"><a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20171208004116/http://ldlp-dictionary.com/dictionaries/word/3317765/A%20New%20Illustrated%20Science%20Dictionary%20(En/Ar)/high-performance%20liquid%20chromatography">"القاموس العلمي المُصوّر الجديد"</a>. مؤرشف من <a rel="nofollow" class="external text" href="http://ldlp-dictionary.com/dictionaries/word/3317765/A%20New%20Illustrated%20Science%20Dictionary%20(En/Ar)/high-performance%20liquid%20chromatography">الأصل</a> في 8 ديسمبر 2017<span class="reference-accessdate">. اطلع عليه بتاريخ 24 مارس 2017</span>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Abook&rft.genre=unknown&rft.btitle=%D8%A7%D9%84%D9%82%D8%A7%D9%85%D9%88%D8%B3+%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%84%D9%85%D9%8A+%D8%A7%D9%84%D9%85%D9%8F%D8%B5%D9%88%D9%91%D8%B1+%D8%A7%D9%84%D8%AC%D8%AF%D9%8A%D8%AF&rft_id=http%3A%2F%2Fldlp-dictionary.com%2Fdictionaries%2Fword%2F3317765%2FA%2520New%2520Illustrated%2520Science%2520Dictionary%2520%28En%2FAr%29%2Fhigh-performance%2520liquid%2520chromatography&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-3"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-3">^</a></b></span> <span class="reference-text">High-performance liquid chromatography (HPLC)<a rel="nofollow" class="external autonumber" href="https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/">[1]</a>,ترجمة و معنى high performance liquid chromatography في قاموس عربي انجليزي. <a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20201206114710/https://www.almaany.com/ar/dict/ar-en/high-performance-liquid-chromatography/">نسخة محفوظة</a> 6 ديسمبر 2020 على موقع <a href="/wiki/%D9%88%D8%A7%D9%8A_%D8%A8%D8%A7%D9%83_%D9%85%D8%B4%D9%8A%D9%86" title="واي باك مشين">واي باك مشين</a>.</span>
</li>
<li id="cite_note-4"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-4">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFGerberKrummenPotgeterRoth2004" class="citation journal">Gerber, F.; Krummen, M.; Potgeter, H.; Roth, A.; Siffrin, C.; Spoendlin, C. (2004). "Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice". <i>Journal of Chromatography A</i>. <b>1036</b> (2): 127–133. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1016%2Fj.chroma.2004.02.056">10.1016/j.chroma.2004.02.056</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15146913">15146913</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Journal+of+Chromatography+A&rft.atitle=Practical+aspects+of+fast+reversed-phase+high-performance+liquid+chromatography+using+3%CE%BCm+particle+packed+columns+and+monolithic+columns+in+pharmaceutical+development+and+production+working+under+current+good+manufacturing+practice&rft.volume=1036&rft.issue=2&rft.pages=127-133&rft.date=2004&rft_id=info%3Adoi%2F10.1016%2Fj.chroma.2004.02.056&rft_id=info%3Apmid%2F15146913&rft.aulast=Gerber&rft.aufirst=F.&rft.au=Krummen%2C+M.&rft.au=Potgeter%2C+H.&rft.au=Roth%2C+A.&rft.au=Siffrin%2C+C.&rft.au=Spoendlin%2C+C.&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-Karger-5"><span class="mw-cite-backlink">↑ <a href="#cite_ref-Karger_5-0"><sup><i><b>أ</b></i></sup></a> <a href="#cite_ref-Karger_5-1"><sup><i><b>ب</b></i></sup></a></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFKarger,_Barry_L.1997" class="citation journal">Karger, Barry L. (1997). "HPLC: Early and Recent Perspectives". <i>Journal of Chemical Education</i>. <b>74</b> (1): 45. <a href="/wiki/%D8%A8%D9%8A%D8%A8_%D9%83%D9%88%D8%AF" title="بيب كود">Bibcode</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://ui.adsabs.harvard.edu/abs/1997JChEd..74...45K">1997JChEd..74...45K</a>. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1021%2Fed074p45">10.1021/ed074p45</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Journal+of+Chemical+Education&rft.atitle=HPLC%3A+Early+and+Recent+Perspectives&rft.volume=74&rft.issue=1&rft.pages=45&rft.date=1997&rft_id=info%3Adoi%2F10.1021%2Fed074p45&rft_id=info%3Abibcode%2F1997JChEd..74...45K&rft.au=Karger%2C+Barry+L.&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-Henry-6"><span class="mw-cite-backlink">↑ <a href="#cite_ref-Henry_6-0"><sup><i><b>أ</b></i></sup></a> <a href="#cite_ref-Henry_6-1"><sup><i><b>ب</b></i></sup></a> <a href="#cite_ref-Henry_6-2"><sup><i><b>ت</b></i></sup></a> <a href="#cite_ref-Henry_6-3"><sup><i><b>ث</b></i></sup></a> <a href="#cite_ref-Henry_6-4"><sup><i><b>ج</b></i></sup></a> <a href="#cite_ref-Henry_6-5"><sup><i><b>ح</b></i></sup></a></span> <span class="reference-text">Henry, Richard A. (1 February 2009) <a rel="nofollow" class="external text" href="http://www.chromatographyonline.com/early-days-hplc-dupont">"The Early Days of HPLC at Dupont"</a>. Chromatography Online. Avanstar Communications Inc. <a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20200801185002/http://www.chromatographyonline.com/early-days-hplc-dupont">نسخة محفوظة</a> 1 أغسطس 2020 على موقع <a href="/wiki/%D9%88%D8%A7%D9%8A_%D8%A8%D8%A7%D9%83_%D9%85%D8%B4%D9%8A%D9%86" title="واي باك مشين">واي باك مشين</a>.</span>
</li>
<li id="cite_note-7"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-7">^</a></b></span> <span class="reference-text">Iler, R.K. (1979) <i>The Chemistry of Silica</i>. John Wiley & Sons. New York.</span>
</li>
<li id="cite_note-8"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-8">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFKarger,_B._L.Berry,_L._V.1971" class="citation journal">Karger, B. L.; Berry, L. V. (1971). "Rapid liquid-chromatographic separation of steroids on columns heavily loaded with stationary phase". <i>Clin. Chem</i>. <b>17</b> (8): 757–64. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/4254537">4254537</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Clin.+Chem.&rft.atitle=Rapid+liquid-chromatographic+separation+of+steroids+on+columns+heavily+loaded+with+stationary+phase&rft.volume=17&rft.issue=8&rft.pages=757-64&rft.date=1971&rft_id=info%3Apmid%2F4254537&rft.au=Karger%2C+B.+L.&rft.au=Berry%2C+L.+V.&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-9"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-9">^</a></b></span> <span class="reference-text">Giddings, J. Calvin (1965) <i>Dynamics of Chromatography, Part I. Principles and Theory</i>. Marcel Dekker, Inc., New York. p. 281.</span>
</li>
<li id="cite_note-10"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-10">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite class="citation web"> <span class="cs1-format">(PDF)</span> <a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20120617061134/http://www.cem.msu.edu/~cem333/Week16.pdf">https://web.archive.org/web/20120617061134/http://www.cem.msu.edu/~cem333/Week16.pdf</a>. مؤرشف من <a rel="nofollow" class="external text" href="http://www.cem.msu.edu/~cem333/Week16.pdf">الأصل</a> <span class="cs1-format">(PDF)</span> في 17 يونيو 2012.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Abook&rft.genre=unknown&rft_id=http%3A%2F%2Fwww.cem.msu.edu%2F~cem333%2FWeek16.pdf&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>); </span><span class="cs1-visible-error error citation-comment">مفقود أو فارغ <code class="cs1-code">|title=</code> (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#citation_missing_title" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-11"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-11">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFEttre2001" class="citation journal">Ettre, C. (2001). <a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20161006152921/http://images.alfresco.advanstar.com/alfresco_images/pharma/2014/08/22/1598ed6f-5bbe-400b-bc08-ff07d2c59826/article-2090.pdf">"Milestones in Chromatography: The Birth of Partition Chromatography"</a> <span class="cs1-format">(PDF)</span>. <i>LCGC</i>. <b>19</b> (5): 506–512. مؤرشف من <a rel="nofollow" class="external text" href="http://images.alfresco.advanstar.com/alfresco_images/pharma/2014/08/22/1598ed6f-5bbe-400b-bc08-ff07d2c59826/article-2090.pdf">الأصل</a> <span class="cs1-format">(PDF)</span> في 6 أكتوبر 2016<span class="reference-accessdate">. اطلع عليه بتاريخ 26 فبراير 2016</span>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=LCGC&rft.atitle=Milestones+in+Chromatography%3A+The+Birth+of+Partition+Chromatography&rft.volume=19&rft.issue=5&rft.pages=506-512&rft.date=2001&rft.aulast=Ettre&rft.aufirst=C.&rft_id=http%3A%2F%2Fimages.alfresco.advanstar.com%2Falfresco_images%2Fpharma%2F2014%2F08%2F22%2F1598ed6f-5bbe-400b-bc08-ff07d2c59826%2Farticle-2090.pdf&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-12"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-12">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFMartinSynge1941" class="citation journal">Martin, A J P; Synge, R L M (1941). <a rel="nofollow" class="external text" href="//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1265473">"Separation of the higher monoamino-acids by counter-current liquid-liquid extraction: the amino-acid composition of wool"</a>. <i>Biochemical Journal</i>. <b>35</b> (1–2): 91–121. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1042%2Fbj0350091">10.1042/bj0350091</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF_%D8%B3%D9%86%D8%AA%D8%B1%D8%A7%D9%84" title="ببمد سنترال">PMC</a> <span class="cs1-lock-free" title="يمكن الوصول إليها بحرية"><a rel="nofollow" class="external text" href="//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1265473">1265473</a></span>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16747393">16747393</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Biochemical+Journal&rft.atitle=Separation+of+the+higher+monoamino-acids+by+counter-current+liquid-liquid+extraction%3A+the+amino-acid+composition+of+wool&rft.volume=35&rft.issue=1%E2%80%932&rft.pages=91-121&rft.date=1941&rft_id=%2F%2Fwww.ncbi.nlm.nih.gov%2Fpmc%2Farticles%2FPMC1265473&rft_id=info%3Apmid%2F16747393&rft_id=info%3Adoi%2F10.1042%2Fbj0350091&rft.aulast=Martin&rft.aufirst=A+J+P&rft.au=Synge%2C+R+L+M&rft_id=%2F%2Fwww.ncbi.nlm.nih.gov%2Fpmc%2Farticles%2FPMC1265473&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-13"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-13">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFLindsay,_S.Kealey,_D.1987" class="citation book">Lindsay, S.; Kealey, D. (1987). <span class="cs1-lock-registration" title="يمكن التسجيل بحرية"><a rel="nofollow" class="external text" href="https://archive.org/details/highperformancel00lind"><i>High performance liquid chromatography</i></a></span>. Wiley. <a href="/w/index.php?title=OSTI_(identifier)&action=edit&redlink=1" class="new" title="OSTI (identifier) (الصفحة غير موجودة)">OSTI</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="https://www.osti.gov/biblio/7013902">7013902</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Abook&rft.genre=book&rft.btitle=High+performance+liquid+chromatography&rft.pub=Wiley&rft.date=1987&rft_id=%2F%2Fwww.osti.gov%2Fbiblio%2F7013902&rft.au=Lindsay%2C+S.&rft.au=Kealey%2C+D.&rft_id=https%3A%2F%2Farchive.org%2Fdetails%2Fhighperformancel00lind&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/> from review <cite id="CITEREFHungParcherShoresWard1988" class="citation journal">Hung, L. B.; Parcher, J. F.; Shores, J. C.; Ward, E. H. (1988). "Theoretical and experimental foundation for surface-coverage programming in gas–solid chromatography with an adsorbable carrier gas". <i>J. Am. Chem. Soc</i>. <b>110</b> (11): 1090–1096. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1021%2Fac00162a003">10.1021/ac00162a003</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=J.+Am.+Chem.+Soc.&rft.atitle=Theoretical+and+experimental+foundation+for+surface-coverage+programming+in+gas%E2%80%93solid+chromatography+with+an+adsorbable+carrier+gas&rft.volume=110&rft.issue=11&rft.pages=1090-1096&rft.date=1988&rft_id=info%3Adoi%2F10.1021%2Fac00162a003&rft.aulast=Hung&rft.aufirst=L.+B.&rft.au=Parcher%2C+J.+F.&rft.au=Shores%2C+J.+C.&rft.au=Ward%2C+E.+H.&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-14"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-14">^</a></b></span> <span class="reference-text"><a rel="nofollow" class="external text" href="http://www.sacheminc.com/industries/biotechnology/teaching-tools.html">Displacement Chromatography</a>. Sacheminc.com. Retrieved 2011-06-07. <a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20080915113736/http://www.sacheminc.com/industries/biotechnology/teaching-tools.html">نسخة محفوظة</a> September 15, 2008, على موقع <a href="/wiki/%D9%88%D8%A7%D9%8A_%D8%A8%D8%A7%D9%83_%D9%85%D8%B4%D9%8A%D9%86" title="واي باك مشين">واي باك مشين</a>.</span>
</li>
<li id="cite_note-Fraction_collector_(post_on_Flickr)-15"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-Fraction_collector_(post_on_Flickr)_15-0">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFMorgan2003" class="citation web">Morgan, David J. (2003-11-19). <a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20201207102226/https://www.flickr.com/photos/tz1_1zt/112090380">"Fraction collector (post on Flickr)"</a>. <i>Flickr</i>. مؤرشف من <a rel="nofollow" class="external text" href="https://www.flickr.com/photos/tz1_1zt/112090380">الأصل</a> في 7 ديسمبر 2020<span class="reference-accessdate">. اطلع عليه بتاريخ 28 أكتوبر 2015</span>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=unknown&rft.jtitle=Flickr&rft.atitle=Fraction+collector+%28post+on+Flickr%29&rft.date=2003-11-19&rft.aulast=Morgan&rft.aufirst=David+J.&rft_id=https%3A%2F%2Fwww.flickr.com%2Fphotos%2Ftz1_1zt%2F112090380&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-16"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-16">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFGerber2004" class="citation journal">Gerber, Frederic (May 2004). "Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3 μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice". <i>Journal of Chromatography</i>. <b>1036</b> (2): 127–33. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1016%2Fj.chroma.2004.02.056">10.1016/j.chroma.2004.02.056</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15146913">15146913</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Journal+of+Chromatography&rft.atitle=Practical+aspects+of+fast+reversed-phase+high-performance+liquid+chromatography+using+3+%CE%BCm+particle+packed+columns+and+monolithic+columns+in+pharmaceutical+development+and+production+working+under+current+good+manufacturing+practice&rft.volume=1036&rft.issue=2&rft.pages=127-33&rft.date=2004-05&rft_id=info%3Adoi%2F10.1016%2Fj.chroma.2004.02.056&rft_id=info%3Apmid%2F15146913&rft.aulast=Gerber&rft.aufirst=Frederic&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-مولد_تلقائيا1-17"><span class="mw-cite-backlink">↑ <a href="#cite_ref-مولد_تلقائيا1_17-0"><sup><i><b>أ</b></i></sup></a> <a href="#cite_ref-مولد_تلقائيا1_17-1"><sup><i><b>ب</b></i></sup></a></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFSiddiquiAlOthmanRahman2013" class="citation journal">Siddiqui, Masoom Raza; AlOthman, Zeid A.; Rahman, Nafisur (2013). "Analytical techniques in pharmaceutical analysis: A review". <i>Arabian Journal of Chemistry</i>. <b>10</b>: S1409–S1421. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<span class="cs1-lock-free" title="يمكن الوصول إليها بحرية"><a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1016%2Fj.arabjc.2013.04.016">10.1016/j.arabjc.2013.04.016</a></span>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Arabian+Journal+of+Chemistry&rft.atitle=Analytical+techniques+in+pharmaceutical+analysis%3A+A+review&rft.volume=10&rft.pages=S1409-S1421&rft.date=2013&rft_id=info%3Adoi%2F10.1016%2Fj.arabjc.2013.04.016&rft.aulast=Siddiqui&rft.aufirst=Masoom+Raza&rft.au=AlOthman%2C+Zeid+A.&rft.au=Rahman%2C+Nafisur&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-18"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-18">^</a></b></span> <span class="reference-text"><i>The European Pharmacopoeia</i>, 2002. fourth ed., Council of Europe, Strasbourg.</span>
</li>
<li id="cite_note-19"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-19">^</a></b></span> <span class="reference-text"><i>United States Pharmacopoeia</i>, 2004. 27th ed. The USP Convention Inc., Rockville, MD.</span>
</li>
<li id="cite_note-20"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-20">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFPesceRosenthalWestWest2010" class="citation journal">Pesce, Amadeo; Rosenthal, Murray; West, Robert; West, Cameron; Crews, Bridgit; Mikel, Charles; Almazan, Perla; Latyshev, Sergey (2010-06-01). <a rel="nofollow" class="external text" href="https://web.archive.org/web/20200808125348/https://www.painphysicianjournal.com/current/pdf?article=MTM1MQ==&journal=55">"An evaluation of the diagnostic accuracy of liquid chromatography-tandem mass spectrometry versus immunoassay drug testing in pain patients"</a>. <i>Pain Physician</i>. <b>13</b> (3): 273–281. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20495592">20495592</a>. مؤرشف من <a rel="nofollow" class="external text" href="http://www.painphysicianjournal.com/current/pdf?article=MTM1MQ%3D%3D&journal=55">الأصل</a> في 8 أغسطس 2020.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Pain+Physician&rft.atitle=An+evaluation+of+the+diagnostic+accuracy+of+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+versus+immunoassay+drug+testing+in+pain+patients&rft.volume=13&rft.issue=3&rft.pages=273-281&rft.date=2010-06-01&rft_id=info%3Apmid%2F20495592&rft.aulast=Pesce&rft.aufirst=Amadeo&rft.au=Rosenthal%2C+Murray&rft.au=West%2C+Robert&rft.au=West%2C+Cameron&rft.au=Crews%2C+Bridgit&rft.au=Mikel%2C+Charles&rft.au=Almazan%2C+Perla&rft.au=Latyshev%2C+Sergey&rft_id=http%3A%2F%2Fwww.painphysicianjournal.com%2Fcurrent%2Fpdf%3Farticle%3DMTM1MQ%253D%253D%26journal%3D55&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-21"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-21">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFTsaiWengTsengTan2013" class="citation journal">Tsai, I.-Lin; Weng, Te-I.; Tseng, Yufeng J.; Tan, Happy Kuy-Lok; Sun, Hsiao-Ju; Kuo, Ching-Hua (2013-12-01). "Screening and confirmation of 62 drugs of abuse and metabolites in urine by ultra-high-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry". <i>Journal of Analytical Toxicology</i>. <b>37</b> (9): 642–651. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<span class="cs1-lock-free" title="يمكن الوصول إليها بحرية"><a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1093%2Fjat%2Fbkt083">10.1093/jat/bkt083</a></span>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24084874">24084874</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Journal+of+Analytical+Toxicology&rft.atitle=Screening+and+confirmation+of+62+drugs+of+abuse+and+metabolites+in+urine+by+ultra-high-performance+liquid+chromatography-quadrupole+time-of-flight+mass+spectrometry&rft.volume=37&rft.issue=9&rft.pages=642-651&rft.date=2013-12-01&rft_id=info%3Adoi%2F10.1093%2Fjat%2Fbkt083&rft_id=info%3Apmid%2F24084874&rft.aulast=Tsai&rft.aufirst=I.-Lin&rft.au=Weng%2C+Te-I.&rft.au=Tseng%2C+Yufeng+J.&rft.au=Tan%2C+Happy+Kuy-Lok&rft.au=Sun%2C+Hsiao-Ju&rft.au=Kuo%2C+Ching-Hua&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-22"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-22">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFWeinmannRenzVogtPollak2000" class="citation journal">Weinmann, W.; Renz, M.; Vogt, S.; Pollak, S. (2000-01-01). "Automated solid-phase extraction and two-step derivatisation for simultaneous analysis of basic illicit drugs in serum by GC/MS". <i>International Journal of Legal Medicine</i>. <b>113</b> (4): 229–235. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1007%2Fs004149900098">10.1007/s004149900098</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10929239">10929239</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=International+Journal+of+Legal+Medicine&rft.atitle=Automated+solid-phase+extraction+and+two-step+derivatisation+for+simultaneous+analysis+of+basic+illicit+drugs+in+serum+by+GC%2FMS&rft.volume=113&rft.issue=4&rft.pages=229-235&rft.date=2000-01-01&rft_id=info%3Adoi%2F10.1007%2Fs004149900098&rft_id=info%3Apmid%2F10929239&rft.aulast=Weinmann&rft.aufirst=W.&rft.au=Renz%2C+M.&rft.au=Vogt%2C+S.&rft.au=Pollak%2C+S.&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-23"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-23">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFKolmonenLeinonenPelanderOjanperä2007" class="citation journal">Kolmonen, Marjo; Leinonen, Antti; Pelander, Anna; Ojanperä, Ilkka (2007-02-28). "A general screening method for doping agents in human urine by solid phase extraction and liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry". <i>Analytica Chimica Acta</i>. <b>585</b> (1): 94–102. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1016%2Fj.aca.2006.12.028">10.1016/j.aca.2006.12.028</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17386652">17386652</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Analytica+Chimica+Acta&rft.atitle=A+general+screening+method+for+doping+agents+in+human+urine+by+solid+phase+extraction+and+liquid+chromatography%2Ftime-of-flight+mass+spectrometry&rft.volume=585&rft.issue=1&rft.pages=94-102&rft.date=2007-02-28&rft_id=info%3Adoi%2F10.1016%2Fj.aca.2006.12.028&rft_id=info%3Apmid%2F17386652&rft.aulast=Kolmonen&rft.aufirst=Marjo&rft.au=Leinonen%2C+Antti&rft.au=Pelander%2C+Anna&rft.au=Ojanper%C3%A4%2C+Ilkka&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-24"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-24">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFPelanderOjanperäLaksRasanen2003" class="citation journal">Pelander, Anna; Ojanperä, Ilkka; Laks, Suvi; Rasanen, Ilpo; Vuori, Erkki (2003-11-01). "Toxicological screening with formula-based metabolite identification by liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry". <i>Analytical Chemistry</i>. <b>75</b> (21): 5710–5718. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1021%2Fac030162o">10.1021/ac030162o</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14588010">14588010</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Analytical+Chemistry&rft.atitle=Toxicological+screening+with+formula-based+metabolite+identification+by+liquid+chromatography%2Ftime-of-flight+mass+spectrometry&rft.volume=75&rft.issue=21&rft.pages=5710-5718&rft.date=2003-11-01&rft_id=info%3Adoi%2F10.1021%2Fac030162o&rft_id=info%3Apmid%2F14588010&rft.aulast=Pelander&rft.aufirst=Anna&rft.au=Ojanper%C3%A4%2C+Ilkka&rft.au=Laks%2C+Suvi&rft.au=Rasanen%2C+Ilpo&rft.au=Vuori%2C+Erkki&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-25"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-25">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFNobilisPourSenelPavlík2007" class="citation journal">Nobilis, Milan; Pour, Milan; Senel, Petr; Pavlík, Jan; Kunes, Jirí; Voprsalová, Marie; Kolárová, Lenka; Holcapek, Michal (2007-06-15). "Metabolic profiling of a potential antifungal drug, 3-(4-bromophenyl)-5-acetoxymethyl-2,5-dihydrofuran-2-one, in mouse urine using high-performance liquid chromatography with UV photodiode-array and mass spectrometric detection". <i>Journal of Chromatography B</i>. <b>853</b> (1–2): 10–19. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1016%2Fj.jchromb.2007.02.045">10.1016/j.jchromb.2007.02.045</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17400036">17400036</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Journal+of+Chromatography+B&rft.atitle=Metabolic+profiling+of+a+potential+antifungal+drug%2C+3-%284-bromophenyl%29-5-acetoxymethyl-2%2C5-dihydrofuran-2-one%2C+in+mouse+urine+using+high-performance+liquid+chromatography+with+UV+photodiode-array+and+mass+spectrometric+detection&rft.volume=853&rft.issue=1%E2%80%932&rft.pages=10-19&rft.date=2007-06-15&rft_id=info%3Adoi%2F10.1016%2Fj.jchromb.2007.02.045&rft_id=info%3Apmid%2F17400036&rft.aulast=Nobilis&rft.aufirst=Milan&rft.au=Pour%2C+Milan&rft.au=Senel%2C+Petr&rft.au=Pavl%C3%ADk%2C+Jan&rft.au=Kunes%2C+Jir%C3%AD&rft.au=Voprsalov%C3%A1%2C+Marie&rft.au=Kol%C3%A1rov%C3%A1%2C+Lenka&rft.au=Holcapek%2C+Michal&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-26"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-26">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFSundströmPelanderAngererHutter2013" class="citation journal">Sundström, Mira; Pelander, Anna; Angerer, Verena; Hutter, Melanie; Kneisel, Stefan; Ojanperä, Ilkka (2013-10-01). "A high-sensitivity ultra-high performance liquid chromatography/high-resolution time-of-flight mass spectrometry (UHPLC-HR-TOFMS) method for screening synthetic cannabinoids and other drugs of abuse in urine". <i>Analytical and Bioanalytical Chemistry</i>. <b>405</b> (26): 8463–8474. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1007%2Fs00216-013-7272-8">10.1007/s00216-013-7272-8</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23954996">23954996</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry&rft.atitle=A+high-sensitivity+ultra-high+performance+liquid+chromatography%2Fhigh-resolution+time-of-flight+mass+spectrometry+%28UHPLC-HR-TOFMS%29+method+for+screening+synthetic+cannabinoids+and+other+drugs+of+abuse+in+urine&rft.volume=405&rft.issue=26&rft.pages=8463-8474&rft.date=2013-10-01&rft_id=info%3Adoi%2F10.1007%2Fs00216-013-7272-8&rft_id=info%3Apmid%2F23954996&rft.aulast=Sundstr%C3%B6m&rft.aufirst=Mira&rft.au=Pelander%2C+Anna&rft.au=Angerer%2C+Verena&rft.au=Hutter%2C+Melanie&rft.au=Kneisel%2C+Stefan&rft.au=Ojanper%C3%A4%2C+Ilkka&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
<li id="cite_note-27"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-27">^</a></b></span> <span class="reference-text"><cite id="CITEREFZahedi_RadNeyestaniNikooyehShariatzadeh2015" class="citation journal">Zahedi Rad, Maliheh; Neyestani, Tirang Reza; Nikooyeh, Bahareh; Shariatzadeh, Nastaran; Kalayi, Ali; Khalaji, Niloufar; Gharavi, Azam (2015-01-01). <a rel="nofollow" class="external text" href="//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4542329">"Competitive Protein-binding assay-based Enzyme-immunoassay Method, Compared to High-pressure Liquid Chromatography, Has a Very Lower Diagnostic Value to Detect Vitamin D Deficiency in 9–12 Years Children"</a>. <i>International Journal of Preventive Medicine</i>. <b>6</b>: 67. <a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%B1%D9%81_%D8%A7%D9%84%D8%BA%D8%B1%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%82%D9%85%D9%8A" title="معرف الغرض الرقمي">doi</a>:<a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.4103%2F2008-7802.161069">10.4103/2008-7802.161069</a>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF_%D8%B3%D9%86%D8%AA%D8%B1%D8%A7%D9%84" title="ببمد سنترال">PMC</a> <span class="cs1-lock-free" title="يمكن الوصول إليها بحرية"><a rel="nofollow" class="external text" href="//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4542329">4542329</a></span>. <a href="/wiki/%D8%A8%D8%A8%D9%85%D8%AF" title="ببمد">PMID</a> <a rel="nofollow" class="external text" href="//pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26330983">26330983</a>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=article&rft.jtitle=International+Journal+of+Preventive+Medicine&rft.atitle=Competitive+Protein-binding+assay-based+Enzyme-immunoassay+Method%2C+Compared+to+High-pressure+Liquid+Chromatography%2C+Has+a+Very+Lower+Diagnostic+Value+to+Detect+Vitamin+D+Deficiency+in+9%E2%80%9312+Years+Children&rft.volume=6&rft.pages=67&rft.date=2015-01-01&rft_id=%2F%2Fwww.ncbi.nlm.nih.gov%2Fpmc%2Farticles%2FPMC4542329&rft_id=info%3Apmid%2F26330983&rft_id=info%3Adoi%2F10.4103%2F2008-7802.161069&rft.aulast=Zahedi+Rad&rft.aufirst=Maliheh&rft.au=Neyestani%2C+Tirang+Reza&rft.au=Nikooyeh%2C+Bahareh&rft.au=Shariatzadeh%2C+Nastaran&rft.au=Kalayi%2C+Ali&rft.au=Khalaji%2C+Niloufar&rft.au=Gharavi%2C+Azam&rft_id=%2F%2Fwww.ncbi.nlm.nih.gov%2Fpmc%2Farticles%2FPMC4542329&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8+%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84+%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9+%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" class="Z3988"></span> <span class="cs1-hidden-error error citation-comment">الوسيط <code class="cs1-code">|CitationClass=</code> تم تجاهله (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:CS1_errors#parameter_ignored" title="مساعدة:CS1 errors">مساعدة</a>)</span><link rel="mw-deduplicated-inline-style" href="mw-data:TemplateStyles:r47703133"/></span>
</li>
</ol></div>
<table class="navbox" style="border-spacing:0"><tbody><tr><td style="padding:1px"><table class="nowraplinks collapsible autocollapse navbox-inner" style="border-spacing:0;background:transparent;color:inherit"><tbody><tr><th scope="col" class="navbox-title" colspan="2"><div class="plainlinks hlist navbar mini"><ul><li class="nv-عرض"><a href="/wiki/%D9%82%D8%A7%D9%84%D8%A8:%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8" title="قالب:استشراب"><abbr title="عرض هذا القالب" style=";;background:none transparent;border:none;">ع</abbr></a></li><li class="nv-ناقش"><a href="/wiki/%D9%86%D9%82%D8%A7%D8%B4_%D8%A7%D9%84%D9%82%D8%A7%D9%84%D8%A8:%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8" title="نقاش القالب:استشراب"><abbr title="ناقش هذا القالب" style=";;background:none transparent;border:none;">ن</abbr></a></li><li class="nv-عدل"><a class="external text" href="https://ar.wikipedia.org/w/index.php?title=%D9%82%D8%A7%D9%84%D8%A8:%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8&action=edit"><abbr title="عدل هذا القالب" style=";;background:none transparent;border:none;">ت</abbr></a></li></ul></div><div style="font-size:114%"><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8" title="استشراب">استشراب</a></div></th></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><th scope="row" class="navbox-group">التقنيات</th><td class="navbox-list navbox-odd hlist" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px"><div style="padding:0em 0.25em">
<ul><li><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%86%D8%AC%D8%B0%D8%A7%D8%A8%D9%8A" title="استشراب انجذابي">استشراب انجذابي</a></li>
<li><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%B9%D9%85%D9%88%D8%AF" title="استشراب عمود">استشراب عمود</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D8%B2%D8%A7%D8%AD%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="استشراب ازاحة (الصفحة غير موجودة)">استشراب ازاحة</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D9%83%D9%87%D8%B1%D8%A8%D9%8A&action=edit&redlink=1" class="new" title="استشراب كهربي (الصفحة غير موجودة)">استشراب كهربي</a></li>
<li><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%BA%D8%A7%D8%B2%D9%8A" title="استشراب غازي">استشراب غازي</a></li>
<li><a class="mw-selflink selflink">استشراب السائل رفيع الإنجاز</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D9%83%D9%87%D8%B1%D8%A8%D9%8A_%D8%B4%D8%B9%D8%B1%D9%8A&action=edit&redlink=1" class="new" title="استشراب كهربي شعري (الصفحة غير موجودة)">استشراب كهربي شعري</a></li>
<li><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%AA%D8%A8%D8%A7%D8%AF%D9%84_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%8A%D9%88%D9%86%D9%8A" title="استشراب التبادل الأيوني">استشراب التبادل الأيوني</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D9%83%D8%B1%D9%88%D9%85%D8%A7%D8%AA%D9%88%D8%BA%D8%B1%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A7_%D8%AD%D8%B1%D9%83%D9%8A%D8%A9_%D9%83%D9%87%D8%B1%D8%A8%D9%8A%D8%A9_Micellar&action=edit&redlink=1" class="new" title="كروماتوغرافيا حركية كهربية Micellar (الصفحة غير موجودة)">كروماتوغرافيا حركية كهربية Micellar</a></li>
<li><a class="mw-selflink selflink">استشراب الطور العادي</a></li>
<li><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D9%88%D8%B1%D9%82%D8%A9" title="استشراب ورقة">كروموتوغرافيا الورقة</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%B7%D9%88%D8%B1_%D8%B9%D9%83%D8%B3%D9%8A&action=edit&redlink=1" class="new" title="استشراب طور عكسي (الصفحة غير موجودة)">استشراب طور عكسي</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%AD%D8%AC%D9%85_%D9%85%D8%B3%D8%AA%D8%A8%D8%B9%D8%AF&action=edit&redlink=1" class="new" title="استشراب حجم مستبعد (الصفحة غير موجودة)">استشراب حجم مستبعد</a></li>
<li><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%B7%D8%A8%D9%82%D8%A9_%D8%B1%D9%82%D9%8A%D9%82%D8%A9" title="استشراب طبقة رقيقة">الاستشراب بالطبقة الرقيقة</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%AB%D9%86%D8%A7%D8%A6%D9%8A_%D8%A7%D9%84%D8%A7%D8%A8%D8%B9%D8%A7%D8%AF&action=edit&redlink=1" class="new" title="استشراب ثنائي الابعاد (الصفحة غير موجودة)">استشراب ثنائي الابعاد</a></li></ul>
</div></td></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><th scope="row" class="navbox-group">الطرق المتصلة</th><td class="navbox-list navbox-even hlist" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px"><div style="padding:0em 0.25em">
<ul><li><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%BA%D8%A7%D8%B2%D9%8A-%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81_%D9%83%D8%AA%D9%84%D8%A9" title="استشراب غازي-مطياف كتلة">استشراب غازي-مطياف كتلة</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B9%D8%A7%D9%84%D9%8A_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D8%AF%D8%A7%D8%A1-%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81_%D9%83%D8%AA%D9%84%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="استشراب سائل عالي الأداء-مطياف كتلة (الصفحة غير موجودة)">استشراب سائل عالي الأداء-مطياف كتلة</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D9%86%D8%AD%D9%84%D8%A7%D9%84_%D8%AD%D8%B1%D8%A7%D8%B1%D9%8A%E2%80%93%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%BA%D8%A7%D8%B2%D9%8A%E2%80%93%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81_%D9%83%D8%AA%D9%84%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="انحلال حراري–استشراب غازي–مطياف كتلة (الصفحة غير موجودة)">انحلال حراري–استشراب غازي–مطياف كتلة</a></li></ul>
</div></td></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><th scope="row" class="navbox-group">النظريات</th><td class="navbox-list navbox-odd hlist" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px"><div style="padding:0em 0.25em">
<ul><li><a href="/wiki/%D8%AB%D8%A7%D8%A8%D8%AA_%D8%A7%D9%84%D8%AA%D9%88%D8%B2%D9%8A%D8%B9" title="ثابت التوزيع">ثابت التوزيع</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D9%85%D8%B9%D8%A7%D8%AF%D9%84%D8%A9_%D9%81%D8%B1%D9%88%D9%86%D8%AF%D9%84%D9%8A%D8%AA%D8%B4&action=edit&redlink=1" class="new" title="معادلة فروندليتش (الصفحة غير موجودة)">معادلة فروندليتش</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=Kovats_retention_index&action=edit&redlink=1" class="new" title="Kovats retention index (الصفحة غير موجودة)">Kovats retention index</a></li>
<li><a href="/wiki/%D9%85%D8%B9%D8%A7%D9%85%D9%84_%D8%A5%D8%B9%D8%A7%D9%82%D8%A9" title="معامل إعاقة">عامل الاحتباس</a></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D9%85%D8%B9%D8%A7%D8%AF%D9%84%D8%A9_%D9%81%D8%A7%D9%86_%D8%AF%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%AA%D8%B1&action=edit&redlink=1" class="new" title="معادلة فان ديميتر (الصفحة غير موجودة)">معادلة فان ديميتر</a></li></ul>
</div></td></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><th scope="row" class="navbox-group">المنشورات البارزة</th><td class="navbox-list navbox-even hlist" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px"><div style="padding:0em 0.25em">
<ul><li><i><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%B1%D9%88%D9%85%D8%A7%D8%AA%D9%88%D8%BA%D8%B1%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A7_%D8%A7%D9%84%D8%B7%D8%A8%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%8A%D9%88%D9%8A%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="الكروماتوغرافيا الطبية الحيوية (الصفحة غير موجودة)">الكروماتوغرافيا الطبية الحيوية</a></i></li>
<li><i><a href="/w/index.php?title=%D9%85%D8%AC%D9%84%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%84%D9%88%D9%85_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%B1%D9%88%D9%85%D8%A7%D8%AA%D9%88%D8%BA%D8%B1%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="مجلة العلوم الكروماتوغرافية (الصفحة غير موجودة)">مجلة العلوم الكروماتوغرافية</a></i></li>
<li><i><a href="/w/index.php?title=%D9%85%D8%AC%D9%84%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%B1%D9%88%D9%85%D8%A7%D8%AA%D9%88%D8%BA%D8%B1%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A7_A&action=edit&redlink=1" class="new" title="مجلة الكروماتوغرافيا A (الصفحة غير موجودة)">مجلة الكروماتوغرافيا A</a></i></li>
<li><i><a href="/w/index.php?title=%D9%85%D8%AC%D9%84%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%B1%D9%88%D9%85%D8%A7%D8%AA%D9%88%D8%BA%D8%B1%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A7_B&action=edit&redlink=1" class="new" title="مجلة الكروماتوغرافيا B (الصفحة غير موجودة)">مجلة الكروماتوغرافيا B</a></i></li>
<li><i><a href="/w/index.php?title=%D9%85%D8%AC%D9%84%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%B1%D9%88%D9%85%D8%A7%D8%AA%D9%88%D8%AC%D8%B1%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A7_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84%D8%A9_%D9%88%D8%B5%D9%84%D8%A7%D8%AA%D9%87%D8%A7_%D8%A7%D9%84%D8%AA%D9%83%D9%86%D9%88%D9%84%D9%88%D8%AC%D9%8A%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="مجلة الكروماتوجرافيا السائلة وصلاتها التكنولوجية (الصفحة غير موجودة)">مجلة الكروماتوجرافيا السائلة وصلاتها التكنولوجية</a></i></li>
<li><i><a href="/wiki/%D9%85%D8%AC%D9%84%D8%A9_%D8%B9%D9%84%D9%88%D9%85_%D8%A7%D9%84%D9%81%D8%B5%D9%84" title="مجلة علوم الفصل">مجلة علوم الفصل</a></i></li></ul>
</div></td></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><td class="navbox-abovebelow" colspan="2"><div><b><a href="/wiki/%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9" title="كيمياء تحليلية">الكيمياء التحليلية</a></b></div></td></tr></tbody></table></td></tr></tbody></table>
<table class="navbox" style="border-spacing:0"><tbody><tr><td style="padding:1px"><table class="nowraplinks collapsible autocollapse navbox-inner" style="border-spacing:0;background:transparent;color:inherit"><tbody><tr><th scope="col" class="navbox-title" colspan="2"><div class="plainlinks hlist navbar mini"><ul><li class="nv-عرض"><a href="/wiki/%D9%82%D8%A7%D9%84%D8%A8:%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9" title="قالب:كيمياء تحليلية"><abbr title="عرض هذا القالب" style=";;background:none transparent;border:none;">ع</abbr></a></li><li class="nv-ناقش"><a href="/wiki/%D9%86%D9%82%D8%A7%D8%B4_%D8%A7%D9%84%D9%82%D8%A7%D9%84%D8%A8:%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9" title="نقاش القالب:كيمياء تحليلية"><abbr title="ناقش هذا القالب" style=";;background:none transparent;border:none;">ن</abbr></a></li><li class="nv-عدل"><a class="external text" href="https://ar.wikipedia.org/w/index.php?title=%D9%82%D8%A7%D9%84%D8%A8:%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9&action=edit"><abbr title="عدل هذا القالب" style=";;background:none transparent;border:none;">ت</abbr></a></li></ul></div><div style="font-size:114%"><a href="/wiki/%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9" title="كيمياء تحليلية">الكيمياء التحليلية</a></div></th></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><th scope="row" class="navbox-group"><a href="/wiki/%D8%AC%D9%87%D8%A7%D8%B2_%D9%82%D9%8A%D8%A7%D8%B3" title="جهاز قياس">أدوات</a></th><td class="navbox-list navbox-odd" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px"><div style="padding:0em 0.25em"><a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%A7%D9%85%D8%AA%D8%B5%D8%A7%D8%B5_%D8%A7%D9%84%D8%B0%D8%B1%D9%8A" title="مطيافية الامتصاص الذري">مطياف الامتصاص الذري</a> <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%B1%D8%A7%D9%85%D8%A7%D9%86_%D8%B0%D8%A7%D8%AA_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%B7%D8%AD_%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%AD%D8%B3%D9%86" title="مطيافية رامان ذات السطح المحسن">مطيافية رامان ذات السطح المحسن</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%A7%D9%86%D8%A8%D8%B9%D8%A7%D8%AB_%D8%A7%D9%84%D8%B0%D8%B1%D9%8A" title="مطيافية الانبعاث الذري">مطياف إصدار اللهب</a> <b>·</b>  <a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%BA%D8%A7%D8%B2%D9%8A" title="استشراب غازي">كروماتوغرافيا غازية</a> <b>·</b> <a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%B7%D8%A8%D9%82%D8%A9_%D8%B1%D9%82%D9%8A%D9%82%D8%A9" title="استشراب طبقة رقيقة">كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة</a>  <b>·</b>  <a class="mw-selflink selflink">استشراب السائل رفيع الإنجاز</a> <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D8%B4%D8%B9%D8%A9_%D8%AA%D8%AD%D8%AA_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%85%D8%B1%D8%A7%D8%A1" title="مطيافية الأشعة تحت الحمراء">مطيافية الأشعة تحت الحمراء</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D8%AA%D9%84%D8%A9" title="مطيافية الكتلة">مطيافية الكتلة</a> <b>·</b>  <a href="/wiki/%D8%AC%D9%87%D8%A7%D8%B2_%D8%AA%D8%AD%D8%AF%D9%8A%D8%AF_%D9%86%D9%82%D8%B7%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%A7%D9%86%D8%B5%D9%87%D8%A7%D8%B1" title="جهاز تحديد نقطة الانصهار">جهاز تحديد نقطة الانصهار</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%85%D8%AC%D9%87%D8%B1" title="مجهر">مجهر</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%85%D8%B7%D9%8A%D8%A7%D9%81" title="مطياف">مطياف</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%82%D9%8A%D8%A7%D8%B3_%D8%A7%D9%84%D8%B6%D9%88%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%B7%D9%8A%D9%81%D9%8A" title="قياس الضوء الطيفي">قياس الضوء الطيفي</a></div></td></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><th scope="row" class="navbox-group">تقنيات</th><td class="navbox-list navbox-even" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px"><div style="padding:0em 0.25em"><a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%B9%D8%B1%D9%8A%D8%A9" title="مسعرية">مسعرية</a>  <b>·</b>  <a href="/w/index.php?title=%D9%82%D9%8A%D8%A7%D8%B3%D9%8A%D8%A7%D8%AA_%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A6%D9%8A%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="قياسيات كيميائية (الصفحة غير موجودة)">قياسيات كيميائية</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8" title="استشراب">كروماتوغرافيا</a> <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D9%83%D9%87%D8%B1%D8%A8%D8%A7%D8%A6%D9%8A%D8%A9" title="كيمياء كهربائية">كيمياء كهربائية</a> <b>·</b>  <a href="/wiki/%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84_%D9%88%D8%B2%D9%86%D9%8A" title="تحليل وزني">تحليل وزني</a></div></td></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><th scope="row" class="navbox-group"><a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B9%D9%8A%D8%A7%D9%86" title="استعيان">أخذ العينات</a></th><td class="navbox-list navbox-odd" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px"><div style="padding:0em 0.25em"><a href="/w/index.php?title=%D8%AA%D8%B4%D9%83%D9%8A%D9%84_%D9%87%D8%B1%D9%85%D9%8A_%D9%88%D8%AA%D8%B1%D8%A8%D9%8A%D8%B9&action=edit&redlink=1" class="new" title="تشكيل هرمي وتربيع (الصفحة غير موجودة)">التشكيل الهرمي والتربيع</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D8%AA%D8%B1%D9%83%D9%8A%D8%B2_(%D8%AA%D9%88%D8%B6%D9%8A%D8%AD)" class="mw-disambig" title="تركيز (توضيح)">تمديد</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D8%A7%D9%86%D8%AD%D9%84%D8%A7%D9%84%D9%8A%D8%A9" title="انحلالية">ذوبان</a>  <b>·</b>  <a href="/wiki/%D8%AA%D8%B1%D8%B4%D9%8A%D8%AD" title="ترشيح">ترشيح</a> <b>·</b>  <a href="/w/index.php?title=%D8%B9%D8%A7%D9%85%D9%84_%D9%85%D9%82%D9%86%D8%B9&action=edit&redlink=1" class="new" title="عامل مقنع (الصفحة غير موجودة)">تقنيع</a> <b>·</b>  <a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%AD%D9%88%D9%82" title="مسحوق">سحق وتنعيم</a> <b>·</b>  <a href="/w/index.php?title=%D8%AA%D8%AD%D8%B6%D9%8A%D8%B1_%D8%A7%D9%84%D8%B9%D9%8A%D9%86%D8%A9_(%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9)&action=edit&redlink=1" class="new" title="تحضير العينة (كيمياء تحليلية) (الصفحة غير موجودة)">تحضير العينة</a> <b>·</b>  <a href="/wiki/%D8%B9%D9%85%D9%84%D9%8A%D8%A9_%D9%81%D8%B5%D9%84" title="عملية فصل">عمليات الفصل</a> <b>·</b>  <a href="/w/index.php?title=%D8%AA%D8%AD%D8%AA-%D8%A7%D9%84%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B9%D9%8A%D8%A7%D9%86&action=edit&redlink=1" class="new" title="تحت-الاستعيان (الصفحة غير موجودة)">تحت-الاستعيان</a></div></td></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><th scope="row" class="navbox-group"><a href="/w/index.php?title=%D9%82%D8%A7%D8%A6%D9%85%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%85%D9%86%D8%B4%D9%88%D8%B1%D8%A7%D8%AA_%D8%A7%D9%84%D9%87%D8%A7%D9%85%D8%A9_%D9%81%D9%8A_%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1&action=edit&redlink=1" class="new" title="قائمة المنشورات الهامة في الكيمياء (الصفحة غير موجودة)">منشورات</a> بارزة</th><td class="navbox-list navbox-even" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px"><div style="padding:0em 0.25em">
<ul><li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%AD%D9%84%D9%84_(%D9%85%D8%AC%D9%84%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1)&action=edit&redlink=1" class="new" title="المحلل (مجلة الكيمياء) (الصفحة غير موجودة)">المحلل</a><i></i></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A3%D9%86%D8%A7%D9%84%D9%8A%D8%AA%D9%8A%D9%83%D8%A7_%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D9%83%D8%A7_%D8%A7%D9%83%D8%AA%D8%A7&action=edit&redlink=1" class="new" title="أناليتيكا كيميكا اكتا (الصفحة غير موجودة)">أناليتيكا كيميكا اكتا</a><i></i></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1%D8%A7%D9%84%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9_%D9%88%D8%A7%D9%84%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%8A%D9%88%D9%8A%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="الكيمياءالتحليلية والتحليلية الحيوية (الصفحة غير موجودة)">الكيمياءالتحليلية والتحليلية الحيوية</a><i></i></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9_(%D9%85%D8%AC%D9%84%D8%A9)&action=edit&redlink=1" class="new" title="الكيمياء التحليلية (مجلة) (الصفحة غير موجودة)"> الكيمياء التحليلية</a><i></i></li>
<li><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D9%84%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%8A%D9%88%D9%8A%D8%A9_(%D9%85%D8%AC%D9%84%D8%A9)_%D9%86%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%AA_%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9_%D9%81%D9%89_%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%8A%D9%88%D9%8A%D8%A9&action=edit&redlink=1" class="new" title="التحليلية الكيمياء الحيوية (مجلة) نشرات تحليلية فى الكيمياء الحيوية (الصفحة غير موجودة)">التحليلية الكيمياء الحيوية (مجلة) نشرات تحليلية فى الكيمياء الحيوية</a><i></i></li></ul>
</div></td></tr><tr style="height:2px"><td colspan="2"></td></tr><tr><td class="navbox-abovebelow" colspan="2"><div><b><a href="/wiki/%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1" title="كيمياء">كيمياء</a></b></div></td></tr></tbody></table></td></tr></tbody></table>
<ul class="bandeau-portail إعلام" id="bandeau-portail">
<li class="bandeau-portail-element"><span class="bandeau-portail-icone" style="margin-right:1em"><a href="/wiki/%D8%A8%D9%88%D8%A7%D8%A8%D8%A9:%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1" title="بوابة:الكيمياء"><img alt="أيقونة بوابة" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/59/Nuvola_apps_edu_science.svg/28px-Nuvola_apps_edu_science.svg.png" decoding="async" width="28" height="28" class="noviewer" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/59/Nuvola_apps_edu_science.svg/42px-Nuvola_apps_edu_science.svg.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/59/Nuvola_apps_edu_science.svg/56px-Nuvola_apps_edu_science.svg.png 2x" data-file-width="128" data-file-height="128" /></a></span><span class="bandeau-portail-texte"><a href="/wiki/%D8%A8%D9%88%D8%A7%D8%A8%D8%A9:%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1" title="بوابة:الكيمياء">بوابة الكيمياء</a></span></li>
<li class="bandeau-portail-element"><span class="bandeau-portail-icone" style="margin-right:1em"><a href="/wiki/%D8%A8%D9%88%D8%A7%D8%A8%D8%A9:%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%8A%D9%88%D9%8A%D8%A9" title="بوابة:الكيمياء الحيوية"><img alt="أيقونة بوابة" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/3/3d/1GZX_Haemoglobin.png/28px-1GZX_Haemoglobin.png" decoding="async" width="28" height="28" class="noviewer" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/3/3d/1GZX_Haemoglobin.png/42px-1GZX_Haemoglobin.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/3/3d/1GZX_Haemoglobin.png/56px-1GZX_Haemoglobin.png 2x" data-file-width="1600" data-file-height="1600" /></a></span><span class="bandeau-portail-texte"><a href="/wiki/%D8%A8%D9%88%D8%A7%D8%A8%D8%A9:%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%8A%D9%88%D9%8A%D8%A9" title="بوابة:الكيمياء الحيوية">بوابة الكيمياء الحيوية</a></span></li></ul>
<p><br />
</p>
<div class="إعلام صغير plainlinks sisterlinks commonscat" style="width:50%"><div class="صورة" style="display:inline"><a href="/wiki/%D8%AE%D8%A7%D8%B5:%D8%A8%D8%AD%D8%AB/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" title="مشاريع شقيقة"><img alt="مشاريع شقيقة" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4a/Commons-logo.svg/49px-Commons-logo.svg.png" decoding="async" width="49" height="66" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4a/Commons-logo.svg/74px-Commons-logo.svg.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4a/Commons-logo.svg/98px-Commons-logo.svg.png 2x" data-file-width="1024" data-file-height="1376" /></a></div> <div style="display:inline">في <a href="/wiki/%D9%88%D9%8A%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%AF%D9%8A%D8%A7_%D9%83%D9%88%D9%85%D9%86%D8%B2" title="ويكيميديا كومنز">كومنز</a> صور وملفات عن: <a href="https://commons.wikimedia.org/wiki/Category:High_performance_liquid_chromatography" class="extiw" title="commons:Category:High performance liquid chromatography">استشراب السائل رفيع الإنجاز</a></div></div>
<div class="medic-box"><table class="navbox" style="border-spacing:0"><tbody><tr><td style="padding:1px"><table class="nowraplinks hlist navbox-inner" style="border-spacing:0;background:transparent;color:inherit"><tbody><tr><th scope="row" class="navbox-group">التصنيفات الطبية</th><td class="navbox-list navbox-odd" style="text-align:right;border-right-width:2px;border-right-style:solid;width:100%;padding:0px;text-align:left;"><div style="padding:0em 0.25em">
<ul><li><span style="font-style: italic;"><b><a href="/wiki/%D9%86%D8%B8%D8%A7%D9%85_%D9%81%D9%87%D8%B1%D8%B3%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%85%D9%88%D8%A7%D8%B6%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%B7%D8%A8%D9%8A%D8%A9" title="نظام فهرسة المواضيع الطبية">MeSH ID</a></b></span>: <a rel="nofollow" class="external text" href="https://meshb.nlm.nih.gov/record/ui?ui=D002851">D002851</a> </li></ul>
</div></td></tr></tbody></table></td></tr></tbody></table></div>
<p><br />
</p>
<h2><span class="mw-headline" id="Further_reading">Further reading</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=23" title="عدل القسم: Further reading">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<ul><li>L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. W. Dolan, Introduction to Modern Liquid Chromatography, John Wiley & Sons, New York, 2009.</li>
<li>M.W. Dong, Modern HPLC for practicing scientists. Wiley, 2006.</li>
<li>L. R. Snyder, J.J. Kirkland, and J. L. Glajch, Practical HPLC Method Development, John Wiley & Sons, New York, 1997.</li>
<li>S. Ahuja and H. T. Rasmussen (ed), HPLC Method Development for Pharmaceuticals, Academic Press, 2007.</li>
<li>S. Ahuja and M.W. Dong (ed), Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Elsevier/Academic Press, 2005.</li>
<li>Y. V. Kazakevich and R. LoBrutto (ed.), HPLC for Pharmaceutical Scientists, Wiley, 2007.</li>
<li>U. D. Neue, HPLC Columns: Theory, Technology, and Practice, Wiley-VCH, New York, 1997.</li>
<li>M. C. McMaster, HPLC, a practical user's guide, Wiley, 2007.</li></ul>
<h2><span class="mw-headline" id="External_links">External links</span><span class="mw-editsection"><span class="mw-editsection-bracket">[</span><a href="/w/index.php?title=%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2&action=edit&section=24" title="عدل القسم: External links">عدل المصدر</a><span class="mw-editsection-bracket">]</span></span></h2>
<div class="إعلام صغير plainlinks sisterlinks commonscat" style="width:50%"><div class="صورة" style="display:inline"><a href="/wiki/%D8%AE%D8%A7%D8%B5:%D8%A8%D8%AD%D8%AB/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" title="مشاريع شقيقة"><img alt="مشاريع شقيقة" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4a/Commons-logo.svg/49px-Commons-logo.svg.png" decoding="async" width="49" height="66" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4a/Commons-logo.svg/74px-Commons-logo.svg.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4a/Commons-logo.svg/98px-Commons-logo.svg.png 2x" data-file-width="1024" data-file-height="1376" /></a></div> <div style="display:inline">في <a href="/wiki/%D9%88%D9%8A%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%AF%D9%8A%D8%A7_%D9%83%D9%88%D9%85%D9%86%D8%B2" title="ويكيميديا كومنز">كومنز</a> صور وملفات عن: <a href="https://commons.wikimedia.org/wiki/Category:High_performance_liquid_chromatography" class="extiw" title="commons:Category:High performance liquid chromatography">استشراب السائل رفيع الإنجاز</a></div></div>
<ul><li><a rel="nofollow" class="external text" href="https://rxlalit.com/hplc-chromatography-principle-procedure-application/"><b>HPLC Chromatography Principle</b>, Application [Basic Note] – 2020.</a> at <a rel="nofollow" class="external text" href="https://rxlalit.com/">Rxlalit.com</a></li></ul>
<ul><li><a rel="nofollow" class="external text" href="https://curlie.org//Science/Chemistry/Analytical/Separations_Science/Liquid_Chromatography">Liquid Chromatography</a> على <a href="/wiki/%D9%85%D8%B4%D8%B1%D9%88%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%AF%D9%84%D9%8A%D9%84_%D8%A7%D9%84%D9%85%D9%81%D8%AA%D9%88%D8%AD" title="مشروع الدليل المفتوح">مشروع الدليل المفتوح</a></li></ul>
<p><a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%AA%D8%AD%D9%84%D9%8A%D9%84%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="الكيمياء التحليلية">الكيمياء التحليلية</a>
<a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%B9%D8%B6%D9%88%D9%8A%D8%A9" class="mw-redirect" title="الكيمياء العضوية">الكيمياء العضوية</a>
</p>
' |
ما إذا كان التعديل قد تم عمله من خلال عقدة خروج تور (tor_exit_node) | false |
طابع زمن التغيير ليونكس (timestamp) | 1607575907 |