تمزق خلية: الفرق بين النسختين

[نسخة منشورة][نسخة منشورة]
تم حذف المحتوى تمت إضافة المحتوى
سطر 13:
تتميز تلك الطريقة عن الطرق الميكانيكية الأخرى بأنها تستطيع تمزيق جدار أصغر الخلايا ، وتجهيز عينات متعددة من دون الخلط بينها ولا تنتج شوائب aerosols .
 
أسهل طريقة تستخدم مخلوطا متساوي الحجم من الخرز والمحلول العالقة به الخلايا ، توضع في أنبوب اختبار ويرج بشدة ، ويمكن استخدام خلاط رجاج معملي معتاد. يكون زمن استخراج الجزيئات بهذه الطريقة أطول نحو 3 - 10 مرات عن استخدام الآلات الخاصة ، فهي طريقة حسنة وأقل تكلفة.
 
In the simplest example of the method, an equal volume of beads are added to a cell or tissue suspension in a test tube and the sample is vigorously mixed on a common laboratory vortex mixer. While processing times are slow, taking 3-10 times longer than that in specialty shaking machines, it works well for easily disrupted cells and is inexpensive.
 
يكون اختيار الخرز بحيث يكون بين 1و0 مليمتر إلى 6 مليمتر ، بخرز من الزجاج او السيراميك أو الفولاذ.
In most laboratories, beadbeating is done in sealed, plastic vials, centrifuge tubes, or deep well microtiter plates. The sample and tiny beads are agitated at about 2000 oscillations per minute in specially designed vial shakers driven by high power electric motors. Cell disruption is complete in 1–3 minutes of shaking. Machines are available that can process hundreds of samples simultaneously inside deep well microplates.
 
يؤدي استخدام الآلات الخاصة عالية القدرة إلى ارتفاع درجة حراة المخلوط ربما بمعدل 10 [[درجة مئوية|درجات مئوية]]/الدقيقة بسبب الاحتكاك الشديد. لهذا فلا بد من تبريد العينة بين حين وآخر لمنع فساد البروتينات والإنزيمات الناتجة .
 
Successful beadbeating is dependent not only design features of the shaking machine (which take into consideration shaking oscillations per minute, shaking throw or distance, shaking orientation and vial orientation), but also the selection of correct bead size (0.1–6 mm diameter), bead composition (glass, ceramic, steel) and bead load in the vial.
 
All high energy beadbeating machines warm the sample about 10 degrees/minute. This is due to frictional collisions of the beads during homogenization. Cooling of the sample during or after beadbeating may be necessary to prevent damage to heat sensitive proteins such as enzymes. Sample warming can be controlled by beadbeating for short time intervals with cooling on ice between each interval, by processing vials in pre-chilled aluminum vial holders or by circulating gaseous coolant through the machine during beadbeating.
 
A different beadbeater configuration, suitable for larger sample volumes, uses a fluorocarbon rotor inside a 15, 50 or 200 ml chamber to agitate the beads. In this configuration, the chamber can be surrounded by a static cooling jacket. Using the same rotor/chamber configuration, large commercial machines are available to process many liters of cell suspension. Currently, these machines are limited to processing monocellular organisms such as yeast, algae and bacteria.