فصل كهربائي هلامي: الفرق بين النسختين

[نسخة منشورة][نسخة منشورة]
تم حذف المحتوى تمت إضافة المحتوى
إعادة المقالة كما كانت
وسمان: تحرير من المحمول تعديل ويب محمول
طلا ملخص تعديل
سطر 10:
| hyphenated =
}}
'''الرحلان الكهربائي الهلامي''' أو '''الفصل الكهربائي الهلامي''' أو '''الهجرة الكهربائية الهلامية''' أو '''الفصلالرحلان الكهربائي للهلام''' ''' (ب[[الإنجليزية]]:Gel electrophoresis ''جل إلكتروفورسس'' )''' هي عملية فصلرحلان [[بروتين|الآحينات (البروتينات)]] حسب خواص معينة على [[هلام|الهلام]] باستدراج البروتينات نحو أقطاب كهربائية تساعد عل فصلرحلان البروتينات المعينة ضمن الهلام تحضيراً لاستخدامات أخرى.
 
== الطريقة ==
 
يتم فصلرحلان بروتينات عينة من الأنسجة أو الخلايا باستخدام [[رحلان كهربائي|الرحلان الكهربي]]. فصلرحلان البروتينات قد يكون باستخدام نُقْطَةُ تَساوِي الكَهْرَبِية Isoelectric point (pI)، الوزن الجزيئي، الشحنة الكهربائية، أو مجموعة من هذه العوامل. طبيعة الفصلالرحلان تعتمد على طريقة معالجة العينة وطبيعة الهلام.
 
إلى حد الآن، الطريقة الأكثر شيوعاً للفصلللرحلان الكهربائي للهلام توظف هلامات متعددالأكريلامايد polyacrylamide ومحاليل تحتوي على كبريتات دوديكل الصوديوم Sodium Dodecyl Sulfate (SDS).
 
[[SDS-PAGE]] أي (الفصلالرحلان الكهربائي لهلام كبريتات دوديكل الصوديوم متعددالأكريلامايد SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) تحافظ على سلسلة البروتيات في حالة متمسخة denatured state حالماً تتم معالجتها مع عوامل اختزال قوية للقضاء على الأشكال الثانوية والثالثية. (مثل تحويل الروابط ثنائية الكبريت S-S إلى SH و SH) وبذلك يسمح لفصللرحلان البروتينات حسب وزنها الجزيئي. يتم تغطية البروتينات في العينة بكبريتات دوديكل الصوديوم السالبة الشحنة ونقلها إلى القطب الكهربائي الموجب الشحنة خلال شبكة الأكريلامايد في الهلام.
البروتينات الصغيرة تهاجر أسرع خلال هذه الشبكة وبذلك يتم فصلرحلان البروتينات حسب الحجم (عادة ما يتم قياسها بالكيلودالتون، kD، kiloDaltons). تركيز الأكريلامايد يحدد دقة الهلام - كلما زاد تركيز الأكريلامايد كلما زادت دقة البروتينات ذات الأوزان الجزيئية العالية. البروتينات تهاجر ببعد واحد خلال الهلام لأغلب البقع.
 
[[ملف:WB-gel.jpg|left|thumb|الهلام ويلاحظ فيه الدرج بصورة حزم زرقاء اللون بسبب الصبغة الزرقاء كوماسي بلو Coomassie Blue]]
يتم تحميل العينات في ''آبار'' في الهلام. يتم حفظ إحدي الأسطر للـ ''مدروج'' أو ''العلامات''، وهما خليط متوفر تجارياً من عدة بروتينات معروفة الوزن الجزيئي، عادة ما تكون مصبوغة لكي تُظهر حزم ملونة مرئية.
أحد الأمثلة على الدرج، هو درج الأوزان الجزيئية الكامل المدى لشركة GE (كما في الشكل). عندما يتم تطبيق فرق الجهد على الهلام، تهاجر البروتينات ضمنه بسرع مختلفة. هذه المعدلات الزمنية المختلفة للتقدم ([[حركة فصلرحلان كهربائي|حركات الفصلالرحلان الكهربائي]] المختلفة) تُفصلتُرحلان إلى ''حُزم'' ضم كل ''سطر''.
 
من الممكن أيضاً استخدام [[الفصلالرحلان الكهربائي ثنائي الأبعاد]] الذي يفصليرحلان البروتينات من عينة واحدة في بُعدين. البروتينات تفصلترحلان بحسب النقطة متوازنة الكهربة (تركيز أيونات الهيدروجين pH الذي تكون فيه الشحنة متعادلة) في البعد الأول، وبحسب الوزن الجزيئي في البعد الثاني.
 
== أنظر أيضاً ==