فحص الانجذاب الكيميائي
فحص الانجذاب الكيميائي هو أداة تجريبية لتقييم القدرة الكيميائية للخلايا بدائية النواة أو حقيقية النواة. تم تطوير مجموعة متنوعة من التقنيات. بعض التقنيات نوعية-تسمح للمحقق بتحديد التقارب الكيميائي للخلية لتحليلها تقريبًا- بينما البعض الآخر كمي، مما يسمح بقياس دقيق لهذا التقارب.
رقابة جودة عدل
بشكل عام، فإن أهم المتطلبات هو معايرة وقت الحضانة لفحص كل من الخلية النموذجية والرابط المراد تقييمه. يؤدي وقت الحضانة القصير جدًا إلى عدم وجود خلايا في العينة، بينما يؤدي الوقت الطويل جدًا إلى اضطراب تدرجات التركيز وقياس الكيمياء الحركية أكثر من الاستجابة الكيميائية.
تقسم التقنيات الأكثر استخدامًا الى مجموعتين رئيسيتين:
تقنية لوحة أجار عدل
تتعامل طريقة التقييم هذه مع أجار أجار أو جيلاتين يحتوي على طبقات شبه صلبة مصنوعة قبل التجربة. يتم قطع الآبار الصغيرة في الطبقة وتمتلئ بالخلايا ومادة الاختبار. يمكن أن تهاجر الخلايا نحو التدرج الكيميائي في الطبقة شبه الصلبة أو تحت الطبقة أيضًا. تتعامل بعض الاختلافات في التقنية مع الآبار والقنوات المتوازية المتصلة بقطع في بداية التجربة (تقنية PP). يوفر الترتيب الشعاعي لتقنية PP (3 قنوات أو أكثر) إمكانية مقارنة النشاط الكيميائي لمجموعات الخلايا المختلفة أو تفضيل الدراسة بين الروابط.[1]
عد الخلايا: يمكن عد الخلايا المستجيبة الإيجابية من مقدمة الخلايا المهاجرة، بعد التلوين أو في الظروف الأصلية باستخدام المجهر الضوئي.
تقنيات الغرفتين عدل
غرفة بويدن عدل
الغرف المعزولة بواسطة المرشحات هي أدوات مناسبة لتحديد السلوك الكيميائي بدقة. بنيت هذه الغرف من قبل بويدن.[2] يتم وضع الخلايا المتحركة في الغرفة العلوية، بينما يملأ السائل الذي يحتوي على مادة الاختبار في الغرفة السفلية. يحدد حجم الخلايا المتحركة التي سيتم فحصها حجم مسام المرشح؛ من الضروري اختيار قطر يسمح بالنقل النشط. لتمثيله في ظروف الجسم الحي، تفضل العديد من البروتوكولات تغطية المرشح بجزيئات المصفوفة خارج الخلية (الكولاجين والإيلاستين وما إلى ذلك) تمت زيادة كفاءة القياسات من خلال تطوير غرف متعددة الطبقات (مثل مسبار عصبي)، حيث يقيم 24، 96، 384 عينة بشكل متوازي. ميزة هذا المتغير هو انه يقيم العديد من المتوازيات في ظروف متطابقة.
غرف الجسر عدل
في مكان آخر، توصل الغرف جنبًا إلى جنب أفقياً (غرفة زيجموند)[3] أو على شكل حلقات متحدة المركز على شريحة (غرفة دن)[4] يتطور تدرج التركيز على جسر متصل ضيق بين الغرف وعدد الخلايا المهاجرة يُحسب على سطح الجسر بواسطة المجهر الضوئي. في بعض الحالات، يملأ الجسر بين الغرفتين بأجار ويجب أن "تنزلق" الخلايا في هذه الطبقة شبه الصلبة.
تقنيات الشعيرات الدموية عدل
توفر بعض تقنيات الشعيرات الدموية ترتيبًا مشابهًا للغرفة، ومع ذلك، لا يوجد مرشح بين الخلايا ومادة الاختبار.[5] يحصل على النتائج الكمية بواسطة نوع مولتي ويل لهذا المجس باستخدام ماصات ذات 4-8-12 قناة. تعد دقة الماصة وزيادة عدد عينات التشغيل المتوازي الميزة العظيمة لهذا الاختبار.[6]
عد الخلايا: تعد الخلايا المستجيبة الإيجابية من الغرفة السفلية (فترة حضانة طويلة) أو من المرشح (فترة حضانة قصيرة). للكشف عن الخلايا، يتم استخدام تقنيات التلوين العامة (مثل أزرق تريبان) أو تحقيقات خاصة (مثل الكشف عن نازعة الهيدروجين باستخدام اختبار القياس اللوني لتقييم نشاط الخلية الاستقلابي). تُستخدم الخلايا المسمى (على سبيل المثال الفلوروكرومات)، في بعض الفحوصات تصنف الخلايا أثناء انتقال المرشح.
تقنيات أخرى عدل
إلى جانب مجموعة التقنيات الأكثر استخدامًا المذكورة أعلاه، طورت مجموعة واسعة من البروتوكولات لقياس النشاط الكيميائي. بعضها نوعي فقط، مثل اختبارات التجميع، حيث توضع قطع صغيرة من الأجار أو المرشحات على شريحة ويقاس تراكم الخلايا حولها.
في تقنية شبه كمية أخرى، تتراكم الخلايا على مادة الاختبار وتسجل التغييرات في بريق الحيز الأصلي الخالي من الخلايا خلال فترة الحضانة.[7]
التقنية النوعية الثالثة المستخدمة بشكل متكرر هي متاهة تي وتكيفها مع الصفائح الدقيقة. في النسخة الأصلية، تمتلئ حاوية محفورة في وتد بالخلايا. ثم يتم لف الوتد وتتلامس الخلايا مع حاويتين أخريين مملوءتين بمواد مختلفة. توقف الحضانة عن طريق إعادة تعيين الوتد ويحسب رقم الخلية من الحاويات.[8]
أيضا، في الآونة الأخيرة، استخدِمت أجهزة الموائع الدقيقة بشكل متكرر أكثر فأكثر للاختبار الكمي والدقيق للانجذاب الكيميائي.[9][10][11]
المراجع عدل
- ^ Kőhidai L. (1995). "Method for determination of chemoattraction in Tetrahymena pyriformis". Curr Microbiol. ج. 30 ع. 4: 251–3. DOI:10.1007/BF00293642. PMID:7765899. S2CID:28989380.
- ^ Boyden, S.V. (1962). "The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes". J Exp Med. ج. 115 ع. 3: 453–66. DOI:10.1084/jem.115.3.453. PMC:2137509. PMID:13872176.
- ^ Zigmond S.H. (1977). "Ability of polymorphonuclear leukocytes to orient in gradients of chemotactic factors". Journal of Cell Biology. ج. 75 ع. 2: 606–616. CiteSeerX:10.1.1.336.4181. DOI:10.1083/jcb.75.2.606. PMC:2109936. PMID:264125.
- ^ Zicha D.؛ Dunn G.A.؛ Brown A.F. (1991). "A new direct-viewing chemotaxis chamber". J Cell Sci. ج. 99 ع. 4: 769–75. DOI:10.1242/jcs.99.4.769. PMID:1770004.
- ^ Leick V.؛ Helle J. (1983). "A quantitative assay for ciliate chemotaxis". Anal Biochem. ج. 135 ع. 2: 466–9. DOI:10.1016/0003-2697(83)90713-3. PMID:6660520.
- ^ Kőhidai, L., Lemberkovits, É. and Csaba, G. (1995). "Molecule dependent chemotactic responses of Tetrahymena pyriformis elicited by volatile oils". Acta Protozool. ج. 34: 181–5.
{{استشهاد بدورية محكمة}}: صيانة الاستشهاد: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين (link) - ^ Koppelhus U.؛ Hellung-Larsen P.؛ Leick V. (1994). "An improved quantitative assay for chemokinesis in Tetrahymena". Biol Bull. ج. 187 ع. 1: 8–15. DOI:10.2307/1542160. JSTOR:1542160. PMID:7918798. مؤرشف من الأصل في 2020-06-08.
- ^ Van Houten J.؛ Martel E.؛ Kasch T. (1982). "Kinetic analysis of chemokinesis of Paramecium". J Protozool. ج. 29 ع. 2: 226–30. DOI:10.1111/j.1550-7408.1982.tb04016.x. PMID:7097615.
- ^ Seymour J. R.؛ J. R. Ahmed؛ Marcos S. R (2008). "A microfluidic chemotaxis assay to study microbial behavior in diffusing nutrient patches". Limnology and Oceanography: Methods. ج. 6 ع. 9: 477–887. DOI:10.4319/lom.2008.6.477. hdl:10453/8517.
- ^ Zhang C.؛ {\i{}et al.} (2013). "A Sensitive Chemotaxis Assay Using a Novel Microfluidic Device". {\i{}BioMed Research International}. ج. 8: 8211–8.
- ^ Ahmed T.؛ himizu T. S.؛ Stocker R. (2010). "Microfluidics for bacterial chemotaxis". {\i{}Integrative Biology}. ج. 2 ع. 11–12: 604–29. DOI:10.1039/c0ib00049c. hdl:1721.1/66851. PMID:20967322.
